【摘要】：背景salusins是由编码人类扭转应力障碍基因(torison dystonia, TOR2A)的mRNA选择性剪接(alternative splicing)的产物。salusins包括两个活性单体：含有28个氨基酸的salusin-α和含有20个氨基酸的salusin-β。salusin-β对心室肌表现为负性肌力作用。Salusin-β样免疫阳性细胞被发现存在于视交叉、视上核和室旁核(paraventricular nucleus, PVN),在垂体后叶也发现了salusin-β阳性神经纤维的末稍。我们前期的实验研究表明：在两肾一夹(two-kidney, one-clip,2K1C)高血压大鼠的PVN微量注射salusin-β可以增强肾交感神经活动(renal sympathetic nerve activity, RSNA)、平均动脉压(mean arterial pressure, MAP)和心率(heart rate, HR),其机制与循环和延髓头端腹外侧部(rostral ventrolateral medulla, RVLM)的精氨酸加压素(arginine vasopressin, AVP)有关。RVLM涉及多种类型的高血压模型的血压升高的机制。在RVLM微量注射AVP的V1受体拮抗剂(dTyr(CH2)5(Me)AVP, AAVP)可以阻断PVN中应用salusin-β对RSNA和HR的效应,但是仅仅减弱了salusin-β对MAP的效应。然而,至今还不清楚RVLM中是否同样有salusin-β的表达,RVLM中的salusin-β是否参与了高血压大鼠心血管活动的调节。因此本研究采用两肾一夹的方法制作肾血管性高血压大鼠模型,探讨高血压大鼠的RVLM中的salusin-β是否对交感神经活动和血压起调控作用及其下游分子机制。目的1探讨salusin-β是否在大鼠的RVLM中表达。2探讨高血压大鼠RVLM中的salusin-β是否参与血压和交感神经活动的调控。3探讨高血压大鼠的RVLM中的salusin-β调控血压和交感神经活动的下游分子机制。方法肾血管性高血压大鼠的模型采用两肾一夹的方法制作,对照组大鼠实施同样的手术,只是不放U形夹。以尾动脉收缩压大于或等于160 mmHg作为造模成功的标准。用免疫组织化学的方法研究RVLM中salusin-β阳性细胞的表达；用免疫荧光双染的细胞共定位技术确定RVLM中salusin-β表达的细胞类型；急性实验在2K1C手术或者假手术实施四周后在乌拉坦和a-氯醛糖的麻醉下进行。在机械通气的情况下,采用PowerLab信号采集系统记录RSNA, MAP和HR；用大鼠脑立体定位仪定位以及双侧RVLM微量注射药物；用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)测定RVLM中salusin-β的含量,以及RVLM和血浆中AVP的含量；用化学发光法测定RVLM中NAD(P)H氧化酶活性和超氧阴离子水平；用二氢乙啶(dihydroethidium, DHE)荧光探针原位捡测salusin-β对RVLM部位的超氧阴离子生成的影响。结果1.RVLM中有salusin-β样阳性细胞的分布,与Sham组相比,2K1C大鼠的salusin-β样阳性细胞的数目明显增多。2.用ELISA法测定RVLM中salusin-β的含量,2K1C组也高于Sham组。3.用免疫荧光双染的细胞共定位技术检测到RVLM中的salusin-β的荧光与神经元特异性标记物神经元核蛋白(neuronal nuclear antigen, NeuN)的荧光重叠。4.在Sham组大鼠的RVLM微量注射不同剂量的salusin-β对血压和交感神经活动无明显影响。但在2K1C大鼠则可引起剂量依赖性的RSNA增强、MAP升高和HR加快。5. Sham组大鼠的RVLM微量注射anti-salusin-β IgG (SIgG)对基础的RSNA、MAP无明显影响,但在2K1C大鼠的RVLM微量注射SIgG减弱基础的RSNA、降低MAP。在2K1C大鼠的RVLM微量注射CIgG预处理对salusin-β对RSNA、MAP和HR的效应无明显影响,但在RVLM微量注射SIgG预处理几乎可以完全阻断salusin-β 对 RSNA、MAP和HR的效应,但是CIgG却无此效应。鉴于salusin-β和SIgG在Sham组大鼠均无作用,因此,接下来的实验仅仅在2K1C大鼠上进行。6. RVLM微量注射超氧阴离子清除剂PEG-SOD或tempol或NAD(P)H氧化酶抑制剂apocynin可以减弱基础的RSNA、降低MAP和减慢HR,并且可以阻断salusin-β增强RSNA.升高MAP和加快HR的效应。7. RVLM微量注射salusin-β增高2K1C大鼠RVLM中超氧阴离子水平,增强NAD(P)H氧化酶的活性,并且这种效应可以被SIgG预处理所阻断。微量注射SIgG有使超氧阴离子水平降低、NAD(P)H氧化酶活性减弱的趋势,但还没有统计学意义。8.用DHE探针原位检测salusin-β对超氧阴离子生成的影响发现：2K1C大鼠的RVLM微量注射salusin-β与salil e相比,salusin-β明显增加RVLM区域的荧光密度。9.RVLM微量注射AAVP对基础的R SNA、MAP和HR几乎无影响也不能阻断salusin-β在RVLM的效应。10.静脉给予AAVP可降低基础的RSNA、MAP和HR,但是对RVLM 微量注射salusin-β的效应却无影响。11.与saline相比,RVLM微量注射salusin-β对血浆和RVLM中AVP的水平几乎无影响；同样的,与CIgG相比,RVLM微量注射SIgG对血浆和RVLM中AVP的水平几乎无影响。结论：与Sham组大鼠相比,2K1C大鼠RVLM中的salusin-β阳性神经元的数目和含量明显增多；在Sham组大鼠的RVLM应用salusin-β对血压和交感神经活动无显著影响,在2K1C大鼠的RVLM应用salusin-β可增强交感神经活动、升高血压并且加快心率；其效应是由NAD(P)H氧化酶源性的超氧阴离子介导的而非循环或RVLM中的AVP或其V1受体介导的。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R544.1
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 吴振英,余承高,张晓汉,杨q ;脑室微量注射促甲状腺素释放激素对心血管活动的影响及其机制[J];同济医科大学学报;1988年05期
2 王公瑞,鲁广洲,吴云鹏,毕婵琴,周明娟,刘淑文;可携式微型微量注射仪的研制及其临床应用[J];生物医学工程学杂志;1989年01期
3 郑华;叶智文;娄艾琳;左和呜;;在同一脑区内微量注射与微电极技术同时应用的方法介绍[J];中日友好医院学报;1990年01期
4 鲁广洲;王公瑞;杨玫;;微量注射及微量注射器[J];医疗卫生装备;1990年03期
5 林琼秋;;微量注射(输液)泵校准方法的研究[J];中国新技术新产品;2010年20期
6 朱兵;刘乡;;大鼠尾核头部微量注射纳洛酮和多巴胺对电针效应的影响[J];针刺研究;1985年03期
7 夏萤,李鹏;延髓中线区微量注射5-羟色胺、吗啡等药物对刺激兔下丘脑诱发室性期前收缩的影响[J];生理学报;1984年06期
8 陈启贤;谢扬高;柴慧霞;黄云;;家兔海马内微量注射马桑内酯造成化学点燃[J];四川生理科学动态;1986年01期
9 张有青,满恒业,刘磊;面神经核腹内侧区微量注射三种递质的呼吸效应[J];生理学报;1991年06期
10 严华春,廖肇铭,张敬东;微量注射推进器的研制[J];第四军医大学学报;1998年S1期
相关会议论文 前9条
1 王燕;董蕾;夏先明;戴菲;李慧鹏;;下丘脑室旁核微量注射ghrelin对大鼠小肠转运和消化间期复合肌电活动的影响及作用机制[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编（上册）[C];2007年
2 杨智杰;唐敬师;贾红;;丘脑中央下核微量注射吗啡对福尔马林诱发大鼠脊髓背角c-fos表达的抑制效应[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年
3 张咏梅;胡霞;张建福;周晓燕;徐明;石s，
本文编号：2293119
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/mazuiyixuelunwen/2293119.html
