血管紧张素Ⅱ-1型受体阻断在预防大鼠慢性血栓栓塞性肺动脉高压形成中的作用机制研究

发布时间：2018-10-30 07:21

【摘要】：第一部分大鼠慢性血栓栓塞性肺动脉高压模型的建立与病理生理学评估目的：慢性血栓栓塞性肺动脉高压(chronic thromboembolic pulmonary hypertension, CTEPH)是急性肺动脉栓塞(acute pulmonary embolism, APE)后的一个远期并发症,主要表现为进展性肺动脉高压和右心衰竭。现阶段,APE的病人除了抗凝及溶栓治疗,尚无有效的药物方案来预防CETPH的发生。因此,如何在APE后对其进行积极干预,减缓甚至扭转CTEPH疾病发展进程将具有极其重要的意义。我们拟建立一个制作简单、可重复性高的大鼠CTEPH的模型,模拟出人CTEPH关键的功能和组织学特征,为CTEPH治疗方法的研发提供一个有效的工具。方法：健康雄性SD大鼠25只,10周龄,体重200-230g,禁食12小时后予以全身麻醉。9只大鼠用于急性期肺动脉压力变化监测：右侧颈静脉置入右心室测压导管,持续监测右心室收缩压力(RVSP),经左侧股静脉注入PVA颗粒悬液(粒径90-180μm,平均100μm,总量45颗/g体重),记录PVA颗粒注入后10分钟右心室收缩压改变。另外16只大鼠分为肺栓塞组(PE,n=8)及假手术组(CON,n=8):PE组经左侧股静脉注入PVA悬液(总量45颗/g体重),对照组注入等量液体。模型建立后第7天,右心测压导管测RVSP,动脉有创血压测体循环压力。抽取动脉血行BNP、AngⅡ检测。留取心、肺标本用于组织学检测。结果：肺动脉栓塞急性期：大鼠]RVSP由栓塞前基础压力值28.87±5.32mmHg升高至56.28±12.29mmHg,并能稳定维持。APE后体循环收缩压为118.16±12.28mmHg,与对照组相比无明显变化。肺动脉栓塞后一周：PE组RVSP为46.73±6.20mmHg,CON组RVSP为27.67±4.80mmHg, P0.05,差异具有统计学意义。PE组体循环收缩压(sBP)为115.02±21.47mmHg,CON组sBP为116.04±13.13mmHg,P0.05,差异无统计学意义。PE组BNP为2.42±0.18ng/ml,CON组BNP为1.33±0.22ng/ml, P0.05,差异具有统计学意义。PE组AngⅡ为28.12±5.25pg/ml,CON组Ang II为25.44±2.88ng/ml,P0.05,差异具有统计学意义。HE染色显示PE组肺动脉内弹力板巧曲变形,管壁明显增厚,部分小动脉闭塞,血管周围灾症细胞浸润。肺小动脉定量分析显示,肺小动脉管壁厚度达到血管直径的77.0%。PE组RV/(LV+septum)为0.32±0.02,CON组RV/(LV+septum)为0.28 ±0.02mmHg,P0.05,差异具有统计学意义。HE染色显示PE组右心室壁明显增厚,心肌细胞增生肥大,排列紊乱,心外膜下小动脉壁轻度增厚,并可见团簇样出现的新生血管。结论：本项实验研究成功建立了大鼠CTEPH模型,符合临床CTEPH的多项特征,不仅可用于CTEPH发病机理的研究,而且能用来评估各种治疗方案对CTEPH的干预作用。第二部分厄贝沙坦在预防大鼠慢性血栓性肺动脉高压形成中的作用机制研究目的：慢性血栓栓塞性肺动脉高压(chronic thromboembolic pulmonary hypertension, CTEPH)是急性肺栓塞(acute pulmonary embolism, APE)后的一个远期并发症,发病机制主要包括肺血栓对肺动脉的机械性阻断,以及未栓塞部位的肺小动脉血管壁重塑。多项研究提示肾素-血管紧张素系统(renin-ANG system, RAS)参与了APE后CTEPH的发病过程。因此,本研究拟应用前期成功建立的大鼠CTEPH模型,首先对厄贝沙坦是否能改善APE后CTEPH的发生做初步的观察研究。然后,进一步探讨厄贝沙坦是否能通过增强ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴的活性在缓解CTEPH的发生过程中发挥相应的作用。方法：健康雄性SD大鼠40只,10周龄,体重200-230g,禁食12小时后予以全身麻醉。40只大鼠分为假手术组(CON,n=8)、假手术+厄贝沙坦组(IR,n=8)、肺栓塞组(PE,n=8)、肺栓塞+厄贝沙坦组(PE+IR, n=8)和肺栓塞+厄贝沙坦+A779组(A779为Mas受体拮抗剂,n=8)：PE组、PE+IR组和A779组经左侧股静脉注入PVA悬液(总量45颗/g体重)；CON组、IR组注入等量液体。模型建立后第7天,右心测压导管测RVSP,动脉有创血压测体循环压力。抽取动脉血行BNP/Ang II检测。留取心、肺标本用于分子生物学及组织学检测。结果：建模后一周：1、RVSP在CON组、IR组、PE组、PE+IR组和A779组分别为：27.67±4.80mmHg.25.93±5.21mmHg、48.89±4.05mmHg、35.68±4.43mmHg和38.28±6.12mmHg。CON组vs. PE组,P0.05;PE组vs.PE+IR组,P0.05;PE+IR组vs.A779组,P0.05。2、BNP在CON组、IR组、PE组、PE+IR组和A779组分别为：1.33±0.23ng/ml、1.19±0.24ng/ml、2.42±0.18ng/ml、1.51±0.19ng/ml和2.01±0.32ng/ml。CON组vs. PE组,P0.05;PE组vs.PE+IR组,P0.05; PE+IR组vs.A779组,P0.05。3, Ang II在CON组、IR组、PE组、PE+IR组和A779组分别为：25.45±2.88pg/ml、25.91±3.24pg/ml、33.75±6.30pg/ml、30.46±4.25pg/ml和33.47±4.26pg/ml。CON组vs. PE组,P0.05;PE组vs.PE+IR组,P0.05；PE+IR组vs.A779组,P0.05。4、PE组肺组织ACE2水平为对照组的50.59%(CON组vs.PE组,n=8,P0.05)；给予厄贝沙坦口服干预(PE+IR组),ACE2蛋白水平升高到PE组的1.60倍(PE+IR组vs.PE组,n=8,P0.05)；当APE后给予厄贝沙坦坦口服的同时,腹腔微量泵给予Mas受体拮抗剂A779后,ACE2蛋白的表达则又降为(PE+IR)组的78.26%(A779组vs.PE+IR组,n=8,P0.05)。5、免疫组化显示PE组非栓塞区肺组织ACE2表达较CON相比降低,栓塞区肺组织较非栓塞区ACE2表达高,与CON组相比大致相仿。6、肺小动脉定量分析显示CON组、PE组、(PE+IR)组、IR组和A779组肺小动脉管壁厚度占血管外径的比例分别为24.35%、76.97%、45.78%、23.37%和61.97%。7、右心室/(左心室+室间隔)重量比显示CON组、PE组、(PE+IR)组、IR组和A779组分别为27%、28%、32%、29%和31%。CON组vs.PE组,P0.05；PE组vs. PE+IR组,P0.05;PE+IR组vs.A779组,P0.05结论：厄贝沙坦干预能减轻CTEPH形成过程中的肺血管重构及右心室肥厚,其中厄贝沙坦直接与AT1受体结合以及其对ACE2/Ang-(11-7)/Mas轴的增强效应可能在其中发挥了重要作用。
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【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R544.1

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