注射用穿心莲内酯对大鼠重症急性胰腺炎的作用及机制研究

发布时间：2018-12-30 18:21

【摘要】：目的：通过静脉注射穿心莲内酯，观察其对重症急性胰腺炎（severeacute pancreatitis，SAP）大鼠胰腺组织中核因子-κB（nuclear transcriptionfactor-κB，NF-κB）表达的影响，以及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosisfactor-α，TNF-α）在血清中的含量变化，探讨穿心莲内酯对大鼠SAP的治疗作用及相关机制，为其在临床SAP的广泛应用提供实验依据。方法：健康SD雌性大鼠30只，体重为200～250克，随机分为三组：假手术组（sham-operation group，SO组），重症急性胰腺炎模型组（severe acutepancreatitis model group，SAP组）、穿心莲内酯干预组（andrographolidetreatment group，AND组），每组10只，在实验开始前禁食12h，不禁水。腹腔注射1%的戊巴比妥钠3ml/kg将大鼠麻醉充分后，SAP组和AND组采用3.5％牛磺胆酸钠（0.1ml/100g）逆行胰胆管注射（注射速度为0.2ml/min）建立重症急性胰腺炎大鼠模型，SO组开腹仅翻动肠管后即关腹。造模成功后，AND组于模型制备成功后立即给予穿心莲内酯（5ug/g）尾静脉注射。SAP组则采用相同方法给予同等剂量的生理盐水尾静脉注射。造模6h后采用下腔静脉抽血，随后处死各组大鼠。肉眼观察并记录各组大鼠胰腺组织大体形态、胰周及腹腔腹水情况；检测各组大鼠血清淀粉酶（Amylase，AMY）水平；各组大鼠血清TNF-α的含量采用双抗体夹心ELISA法进行测定；对HE染色后的各组大鼠胰腺组织进行病理学评分；两步免疫组化法（PV法）测定各组大鼠NF-κB p65蛋白在胰腺组织的表达情况。所有实验所得数据均以均数±标准差（x±s）的格式表示，结果采用SPSS11.5统计软件包进行统计分析。多组样本比较采用方差分析，检验水准α=0.05，P0.05为差异具有统计学意义。结果：1、各组大鼠血清淀粉酶水平的变化：在造模后6h，SAP组与AND组血清淀粉酶水平则明显升高，SO组血清淀粉酶值无明显改变（P0.05），AND组血清淀粉酶水平较SAP组明显降低（P0.05）。2、胰腺组织病理改变：（1）肉眼观察：SO组解剖后，胰腺组织形态未见明显异常改变，SAP组可见胰腺组织变灰白色，有明显的充血水肿，局部可见暗红色出血灶及灰褐色坏死灶，胰周可见皂化斑，并与周围有粘连，胃肠有胀气，腹腔有血性腹水，这说明牛黄胆酸钠逆行胰胆管注射诱导的重症急性胰腺炎大鼠模型成功建立。AND组解剖后，可见淡黄色腹水，胰腺组织也有充血水肿，未见明显出血样改变，胃肠有少许胀气，偶可见胰周有少许皂化斑，与胰周无明显粘连等改变，但与SAP组相比较，程度明显减轻，差异具有统计学意义（P0.05）。（2）光镜下观察：HE染色后，SO组大鼠胰腺组织在光镜下可见其结构完整，未见充血水肿、坏死、出血等改变，胰腺间质内也未见炎症细胞浸润、渗出等，而SAP组可见其正常的胰腺组织结构被破坏，小叶结构紊乱，叶间隔、小叶间隔增宽，腺泡肿胀，局部可见出血及坏死，间质内有大量炎症细胞浸润。AND组也可见叶间隔及小叶间隔有所增宽，胰腺腺泡细胞肿胀，有少许炎症细胞浸润，但未见明显的坏死及出血，胰腺组织病理改变较SAP组不同程度减轻。（3）胰腺组织病理学评分：SAP组与AND组胰腺组织病理学评分均高于SO组（P0.05），AND组较SAP组低（P0.05）。3、ELISA法测定各组大鼠血清TNF-α的结果：SO组TNF-α水平无明显改变，而SAP组与AND组较SO组明显升高（P0.05），AND组与SAP组相比较血清TNF-α水平有所降低（P0.05）。4、各组大鼠胰腺组织NF-κB p65蛋白的表达：NF-κB p65在SO组大鼠胰腺组织中无明显的阳性表达，而在SAP组胰腺组织中具有高表达，细胞核为其阳性表达的主要位置，同时在细胞质中也有少许表达，棕黄色、深棕色为其阳性表达染色，AND组及SAP组胰腺组织中NF-κB p65蛋白的表达较SO组明显增多（P0.05），，但AND组与SAP组相比较，NF-κB p65蛋白的表达减弱，染色变淡（P0.05）。结论：1、经穿心莲内酯治疗后，SAP大鼠胰腺组织的病理损伤减轻，血清淀粉酶也下降，对SAP具有治疗作用。2、穿心莲内酯可以减少SAP大鼠促炎因子TNF-α的大量释放。3、穿心莲内酯可以抑制SAP大鼠胰腺组织NF-κB p65的活化表达。4、穿心莲内酯能够通过抑制SAP大鼠胰腺组织NF-κB的表达，减少促炎因子TNF-α的表达，从而达到治疗SAP的作用，这可能为穿心莲内酯治疗SAP的机制之一。
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【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R576

【参考文献】