滋肾育胎丸对先兆流产止血安胎作用的机理研究

发布时间：2019-01-05 14:48

【摘要】：目的：探讨先兆流产阴道出血的发病机理,分析凝血功能、血液黏度、血清激素水平和子宫动脉血流指数对先兆流产阴道出血的影响及用药前后的对比观察,探讨滋肾育胎丸对阴道出血症状的止血作用和对先兆流产患者的安胎作用。并通过动物实验建立大鼠先兆流产阴道出血模型,以滋肾育胎丸为研究对象,以大鼠一般情况、血清E2和P水平、凝血功能、血液流变学、在体子宫收缩实验等为评价追踪指标,对滋肾育胎丸进行初次拆方研究,再通过药效验证实验寻找止血安胎有效药物,初步形成制作大鼠先兆流产阴道出血模型标准流程,为滋肾育胎丸药效学的研究奠定基础。方法： 1.临床研究(滋肾育胎丸治疗早孕先兆流产的临床研究)：以符合纳入及排除标准的先兆流产患者共60例为研究对象,按就诊随机数字表法分为中药治疗组和西药对照组,每组各30例。治疗期间,初诊和定期复诊时由研究人员填写患者临床观察表,并随访患者情况。中药治疗组予滋肾育胎丸,西药对照组予地屈孕酮片,均治疗1疗程并对所有病人进行中医证候积分,探讨滋肾育胎丸对肾虚型先兆流产的临床疗效、对血清HCG、P、E2水平的影响、对凝血功能、血液流变学的影响、评定动态监测同期血清HCG、P、E2水平、凝血指标、血液流变学指标和B超观察子宫动脉血流阻力指数(RI)、搏动指数(PI)在观察先兆流产治疗效果中的作用。 2.实验研究(先兆流产大鼠模型的建立与中药干预的实验研究)：以70只孕鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、滋肾育胎丸组(A组)、胶鹿艾组(B组)、全方去胶鹿艾组(C组)、阿胶组(D组)共7组。从妊娠第1天开始每天上午9时灌胃,正常组和模型组灌服生理盐水,阳性组灌服地屈孕酮水溶液,其余各组灌服相应的中药。在妊娠第10天除正常对照组外,各组动物于末次灌胃6小时后分别加灌米非司酮溶液(RU486)3.75mg/kg,以造成先兆流产阴道出血模型,同时阴道内置入100mg自置棉栓。24h后各组大鼠取出阴道棉栓称重密封保存待测阴道出血量,5%戊巴比妥麻醉后摘眼球法采血,1.5ml全血分离血清检测E2、P含量和TXB2、6-k-PGFlα含量,6ml全血分装抗凝管检测凝血功能、血液流变学。取血后立刻开腹暴露子宫,行在体子宫收缩实验,测试40分钟,记录曲线图。留取子宫称重后计算子宫腔内胚胎个数和观察宫腔积血情况,标本用福尔马林浸泡保存。结果： 1.临床研究 1.1治疗前后患者的综合临床疗效和中医证候积分对比显示：治疗组综合临床疗效愈显率为56.67%,总有效率为100%,与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)；治疗组中医证候疗效愈显率为56.67%,总有效率为100%,与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。治疗后,两组中医证候积分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P0.01),组间比较差异无统计学意义(P0.05)。 1.2治疗前后患者各项观测指标对比显示：滋肾育胎丸和地屈孕酮片可使患者血清β-HCG、P、E2水平提高,两组组内比较差异均有均统计学意义(P0.01),组间比较差异无统计学意义(P0.05)；滋肾育胎丸和地屈孕酮片均可以降低全血黏度,改善早期高凝状态,两组全血黏度高切值组内比较差异均有统计学意义(P0.01),组间比较差异无统计学意义(P0.05)；滋肾育胎丸和地屈孕酮片均可以延长PT时间,减少Fbg和D-2聚体数量,改善高凝状态和血栓前状态,两组PT、Fbg、D-2聚体值组内比较差异均有统计学意义(P0.05),组间比较差异均无统计学意义(P0.05)；滋肾育胎丸和地屈孕酮片均可以减小子宫动脉血流阻力指数(RI)和搏动指数(PI),改善子宫胎盘灌注状态,两组PI、RI值组内比较差异均有统计学意义(P0.05),组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。 2.实验研究 2.1孕鼠一般状态良好、毛色光滑、反应灵活、体重呈稳步增长、食欲量好、大便正常。给药期间无不良反应。解剖后肉眼见正常组子宫为光洁粉红色,呈结节状膨大,发育良好,胚胎之间界限清晰,周围血供丰富,胚胎完好；见模型组孕鼠子宫腔内不同程度瘀血,可见膨大结节,发育尚可,胚胎数目无明显减少或缺失,胚胎之间界限较明显,胚胎完好；其余6组小鼠子宫内可见膨大的结节,各组胚胎数目无明显差异；B组、C组、D组胚胎有明显瘀血痕迹；阳性组和A组孕鼠子宫有瘀血例数较模型组明显减少。 2.2阴道出血量：模型组大鼠的阴道出血量与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01)；阳性组和B组大鼠的阴道出血量与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01)；A组和D组大鼠的阴道出血量与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)；A组、B组、C组和D组大鼠的阴道出血量与阳性组比较,差异无统计学意义(P0.05)；A组大鼠的阴道出血量与B组、C组和D组比较,差异无统计学意义(P0.05)。 2.3E2、P水平：模型组大鼠的血清E2水平与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01)；A组和B组大鼠的血清E2水平与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)；阳性组、C组和D组大鼠的血清E2水平与模型组比较,差异虽无统计学意义(P0.05),但是其E2水平都明显高于模型组E2水平值。模型组大鼠的血清P水平与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01)；阳性组大鼠的血清P水平与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01)；A组和B组大鼠的血清P水平与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)；C组大鼠血清水平与模型组比较,虽差异无统计学意义(P0.05),但明显高于模型组；A组、B组大鼠的血清P水平与阳性组比较,差异无统计学意义(P0.05)；C组和D组大鼠的血清P水平与阳性组比较,差异有统计学意义(P0.05)。 2.4TXB2、6-K-PGF1α、TXB2/6-K-PGF1α比值水平：模型组大鼠的血清TXB2水平与正常组比较,差异有统计学意义(P0.05)；阳性组、A组、B组、C组和D组大鼠的血清TXB2水平与正常组比较,差异无统计学意义(P0.05)；阳性组、A组和C组大鼠的血清TXB2水平与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)；B组和D组大鼠的血清TXB2水平与模型组比较,虽差异无统计学意义(P0.05),但B组明显低于模型组；A组、B组大鼠的血清TXB2水平与阳性组比较,差异无统计学意义(P0.05)；C组和D组大鼠的血清TXB2水平与阳性组比较,差异有统计学意义(P0.05)。模型组大鼠的血清6-K-PGFl α水平与正常组比较,虽差异无统计学意义(P0.05),但模型组明显低于正常组；阳性组、A组、B组、C组和D组大鼠的血清6-K-PGF1α水平与模型组比较,虽差异无统计学意义(P0.05),但除B组和C组外,余组都高于模型组,其中D组接近正常组水平。模型组大鼠的TXB2/6-K-PGFl α比值水平与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01)；阳性组、A组、B组、C组和D组大鼠的TXB2/6-K-PGF1α比值水平与模型组比较,虽差异无统计学意义(P0.05),但除D组外,余组都低于模型组,阳性组和A组明显低于模型组。 2.5PT、APTT、Fbg值：模型组大鼠的PT值与正常组比较,虽差异均无统计学意义(P0.05),但略低于正常组；A组大鼠的PT值与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01)；阳性组、B组、C组和D组大鼠的PT值与模型组比较,虽差异无统计学意义(P0.05),但都高于模型组。模型组大鼠的APTT值与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01)；阳性组和A组大鼠的APTT值与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01)；B组、C组和D组大鼠的APTT值与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。模型组大鼠的Fbg值与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01)；阳性组和A组大鼠的Fbg值与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01)；B组、C组和D组大鼠的Fbg值与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。 2.6血液流变学和HCT值：模型组大鼠的HCT、血浆黏度、全血黏度高切值与正常组比较,差异无统计学意义(P0.05)；阳性组、A组、B组和D组大鼠的HCT、血浆黏度、全血黏度高切值与模型组比较,差异无统计学意义(P0.05)；C组大鼠的血浆黏度与模型组比较,差异有显著性(P0.05)。模型组大鼠的血黏度中切值与正常组比较,差异虽无统计学意义(P0.05),但明显高于正常组；A组大鼠的血黏度中切值与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01)；阳性组、B组、C组和D组大鼠的血黏度中切值与模型组比较,虽差异无统计学意义(P0.05),但都略低于模型组。模型组大鼠的血黏度低切值与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01)；阳性组和A组大鼠的血黏度低切值与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)；B组、C组和D组大鼠的血黏度低切值与模型组比较,虽差异无统计学意义(P0.05),但都低于模型组。 2.7宫缩频率和宫缩力度值：模型组大鼠的宫缩频率与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01)；阳性组大鼠的宫缩频率与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01)；A组和C组大鼠的宫缩频率与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)；B组和D组大鼠的宫缩频率与模型组比较,虽差异无统计学意义(P0.05),但都略低于模型组。模型组大鼠的宫缩力度与正常组比较,差异有统计学意义(P0.01)；阳性组和A组大鼠的宫缩力度与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01)；B组和C组大鼠的宫缩力度与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)；D组大鼠的宫缩力度与模型组比较,虽差异有显著性(P0.05),但略低于模型组。结论： 1.临床研究中,滋肾育胎丸对于改善肾虚型先兆流产患者肾虚症状,使血清β-HCG、P、E2水平升高,降低全血黏度,延长PT时间,减少Fbg和D-2聚体数量,减小子宫动脉血流阻力方面,与地屈孕酮片疗效相当；PT、Fbg和D-2聚体的动态监测,超声多普勒监测子宫螺旋动脉血流阻力指数(RI)、搏动指数(PI),可作为先兆流产疗效评价及预后判断的指标。 2.实验研究中,成功建立米非司酮诱导的大鼠先兆流产阴道出血模型,较好模拟了临床先兆流产阴道出血状态。本研究在总结罗颂平教授创立的肾虚-黄体抑制(病证结合)流产模型的基础上,初步制定出大鼠先兆流产阴道出血模型的SOP。 3.先兆流产模型大鼠具备P、E2水平低下,PT、APTT缩短,Fbg增加,全血黏度升高,TXB2水平升高,TXB2/6-K-PGF1α比值升高,宫缩频率和力度增加等一系列特征,与临床表现基本一致。提示先兆流产与黄体功能不足、血液高黏高凝状态、子宫收缩异常等因素相关,为诊治先兆流产提供了多角度多视野的参考指标。 4.以滋肾育胎丸全方组对大鼠先兆流产模型进行干预,提示其防治先兆流产的止血安胎疗效与西药地屈孕酮比较差异无显著性。其作用机理,一方面可增加E2、P含量,抑制不规则宫缩,降低不自主宫缩的频率和力度,使子宫肌纤维松弛,改善胎盘灌注,改善子宫动脉血流,改善子宫缺血缺氧状态；另一方面通过降低TXB2、升高6-Keto-PGF1α的含量来纠正体内二者的失衡,使子宫胎盘血液循环得以改善,抑制血栓产生,改善子宫高凝状态和血栓前状态,令妊娠得以继续；并降低血液黏度,延长凝血时间,减少体内Fbg含量,进一步改善全身血液高黏高凝状态。从而起到多途径防治先兆流产的目的。 5.在止血方面,胶鹿艾组明显优于滋肾育胎丸全方组和去胶鹿艾组；阿胶组止血作用虽稍逊于胶鹿艾组,但明显优于去胶鹿艾组。说明滋肾育胎丸止血功效主要通过鹿角霜、艾叶、阿胶实现。
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【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R271.9

【参考文献】