esRAGE基因修饰OECs移植对糖尿病缺血性足部溃疡的治疗研究

发布时间：2019-02-15 21:51

【摘要】：研究目的： 1、观察正常空白对照组、单纯糖尿病组、糖尿病缺血性足部溃疡组、糖尿病缺血性足部溃疡注射未转染OECs组、糖尿病缺血性足部溃疡注射转染后OECs组、糖尿病缺血性足部溃疡注射DMEM培养液组6组大鼠肌肉组织RAGE、NF-kB、VEGF和TGF-β1等mRNA和蛋白的表达水平。 2、探讨esRAGE基因转染OECs进行细胞移植的同时提高局部esRAGE水平对糖尿病缺血性足部溃疡的治疗作用。方法： SD雄性大鼠60只，体重260-300g，随机分为6组：正常空白对照组（N组）10只，，单纯糖尿病组（DM组）10只；糖尿病缺血性足部溃疡组（DFU组）10只；糖尿病缺血性足部溃疡注射未转染OECs组（DFU+OECs组）10只；糖尿病缺血性足部溃疡注射转染后OECs组（DFU+esRAGE+OECs组）10只；糖尿病缺血性足部溃疡注射DMEM培养液组（DFU+DMEM组）10只。实验组大鼠给予1％链脲佐菌素（50毫克/公斤）腹腔注射，对照组予以等剂量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液腹腔注射。空腹血糖(FBG)≥16.7mmol/L视为糖尿病造模成功。一周后，每只大鼠以10％水合氯醛按3.0m/k g腹腔注射麻醉，沿左侧腹股沟中点至膝内侧作约1.5cm长的切口，分离出股动脉及其分支并结扎，同时结扎乆动脉。DFU+OECs组、DFU+esRAGE+OECs组分别进行细胞移植，DFU+DMEM组用相同方法注射DMEM培养液作对照。沿股动脉至乆动脉走向于内收肌至腓肠肌选取6个点，每隔2mm用麻醉针头肌肉注射移植液体50uL，共0.3mL（细胞总数5×105个）。DFU+OECs组注射未转染OECs，DFU+esRAGE+OECs组注射转染后OECs，DFU+DMEM组注射DMEM培养液。细胞移植完毕后用剪刀在左侧下肢足部背侧造成穿透全层皮肤的伤口，剪下5mm×5mm面积的皮肤。移植后大鼠在同等条件下饲养4周，同时观察伤口愈合情况。于第4周末颈椎脱臼处死大鼠，取细胞移植处肌肉组织，采用HE染色检测毛细血管分布密度及内皮细胞增生情况。通过使用TUNEL方法检测细胞凋亡的表达。采用荧光定量PCR和免疫组化检测组织RAGE、NF-κB、VEGF和TGF-β1等mRNA和蛋白表达水平。结果：与DFU组、DFU+DMEM组大鼠肌肉组织中NF-κB表达强度比较，DFU+OECs组、DFU+OECs+esRAGE组大鼠肌肉组织NF-κB表达减少，且差异有统计学意义(P0.01)；与DFU+OECs组相比，DFU+OECs+esRAGE组大鼠NF-κB表达量减少，差异有统计学意义（P0.01）。与DFU组、DFU+DMEM组大鼠肌肉组织中RAGE表达强度比较，DFU+OECs组、DFU+OECs+esRAGE组大鼠肌肉组织RAGE表达减少，且差异有统计学意义(P0.01)；与DFU+OECs组相比，DFU+OECs+esRAGE组大鼠RAGE表达量减少，差异有统计学意义（P0.01）。与DFU组、DFU+DMEM组大鼠肌肉组织中TGF-β1表达强度比较，DFU+OECs组、DFU+OECs+esRAGE组大鼠肌肉组织TGF-β1表达增加，且差异有统计学意义(P0.01)；与DFU+OECs组相比，DFU+OECs+esRAGE组大鼠TGF-β1表达量增加，差异有统计学意义（P0.01）。与DFU组、DFU+DMEM组、DFU+OECs组三组相比，DFU+OECs+esRAGE组大鼠VEGF蛋白表达量稍有增加，差异有统计学意义（P0.01）。与DFU组、DFU+DMEM组大鼠肌肉组织中细胞凋亡量比较，DFU+OECs组、DFU+OECs+esRAGE组大鼠肌肉组织凋亡减少，且差异有统计学意义(P0.01)；DFU组、DFU+DMEM组大鼠肌肉组织中细胞凋亡量较正常对照组及DM组大鼠增多(P0.01)；与DFU+OECs组相比，DFU+OECs+esRAGE组大鼠细胞凋亡量减少且差异有统计学意义（P＜0.01）；与DFU组、DFU+DMEM组大鼠肌肉组织中RAGEmRNA表达强度比较，DFU+OECs组、DFU+OECs+esRAGE组大鼠肌肉组织RAGEmRNA表达增强，且差异有统计学意义(P0.01)；与DFU+OECs组相比，DFU+OECs+esRAGE组大鼠RAGEmRNA表达量降低，且差异有统计学意义（P＜0.05）；结论： 1、esRAGE基因修饰的OECs移植大鼠肌肉组织RAGE、NF-kB蛋白的表达和RAGEmRNA含量水平、细胞凋亡量均低于糖尿病缺血性足部溃疡大鼠。 2、esRAGE基因修饰的OECs移植大鼠肌肉组织TGF-β1、VEGF蛋白表达均高于糖尿病缺血性足部溃疡大鼠。 3、.esRAGE基因修饰的OECs移植对糖尿病大鼠缺血性足部溃疡的修复可能有促进作用。
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【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R587.1

【参考文献】