芎芍胶囊对动脉粥样硬化兔胆固醇逆向转运及炎症反应的影响

发布时间：2019-03-02 15:19

【摘要】：目的：观察芎芍胶囊对动脉粥样硬化(AS)兔血管壁AS形成的影响,从促进主动脉胆固醇跨膜转运、肝脏胆固醇代谢影响胆固醇逆向转运(RCT)过程,抑制炎症反应及保护高密度脂蛋白(HDL)抗炎作用等方面探讨活血化瘀中药抗AS的新机制。实验方法和结果：60只新西兰兔随机分为6组：空白对照组,模型组,芎芍小、中、大剂量组,辛伐他汀组。采用单纯高脂喂养法复制兔AS模型,分别在给药前,给药6周、12周及15周末4个时间点经耳缘静脉采血,15周末麻醉后处死动物,取胸主动脉及肝脏。肉眼观察大体标本各组兔脂纹、脂斑情况,HE染色观察各组兔AS斑块形成情况,油红O染色观察各组兔动脉壁脂质沉积情况；酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、髓过氧化物酶(MPO)、对氧磷酶1(PON1)水平,测定动脉血管平滑肌细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)水平,肝脏细胞内肝X受体α(LXRα)水平；凝胶迁移实验(EMSA)测定核因子·-κB (NF-κB)p65活性；蛋白印迹法(WB)测定主动脉壁内小凹蛋白-1(cav-1)、亲环素A表达量,肝脏B类Ⅰ型清道夫受体(SB-B Ⅰ)表达量；实时定量聚合酶链式反应(real-time PCR)测定主动脉壁cav-lmRNA、亲环素A mRNA、NF-κB mRNA表达量,肝脏SR-BI mRNA, LXRαmRNA表达量结果显示：空白对照组兔主动脉管壁表面光滑,内皮细胞连续完整,无脂质沉积；模型组兔主动脉管壁满布脂质斑块,平滑肌层细胞内见大量脂质沉积；芎芍小、中、大剂量组随用药剂量增加,管壁表面脂纹逐渐减少,显微镜下见形成斑块逐渐减少,管壁细胞内脂质沉积减少；其中芎芍大剂量组与辛伐他汀组在大体标本及HE染色、油红O染色结果上无明显差异。15周末模型组兔平滑肌细胞内TC较空白对照组明显升高(P=0.006,P0.01),FC呈现相同的趋势(模型组与空白对照组比P=0.008,P0.01)。芎芍中剂量组较模型组细胞内TC明显减少(P=0.035,P0.05),芎芍大剂量降低效果更加明显(P=0.004,P0.01)。芎芍小剂量组较模型组FC明显减少(P=0.024,P0.05),芎芍中、大剂量组(P=0.001,P0.01)及辛伐他汀组FC水平降低更明显(P=0.006,P0.01),模型组兔cav-1表达量明显下降(P=0.001,P0.01),芎芍中、大剂量组较模型组表达增加(P=0.0220.05,P=0.0020.01),辛伐他汀组及芎芍小剂量组与模型组相比cav-1表达也有增加趋势,但无统计学意义(P=0.063,P=0.179)。模型组兔亲环素A表达量较对照组增加(P=0.013,P0.05),芎芍中、大剂量组及辛伐他汀组较模型组亲环素A表达减少(P=0.0170.05,P=0.006,0.0000.01)。与对照组相比,模型组兔明显下降(P=0.001,P0.01),辛伐他汀组及芎芍大剂量组较模型组增加cav-lmRNA(P=0.014,P0.05；P=0.001,P0.01)。模型组兔亲环素表达量与对照组相比AmRNA有下降趋势,但无统计学差异(P=0.884,P0.05)；芎芍大剂量组及辛伐他汀组与模型组相比明显增加(P=0.003,P=0.0040.01),余治疗组较模型组无明显差异。肝细胞测定结果显示,模型组兔LXRα表达量较空白对照组下降(P=0.798,P0.05),但没有统计学差异。芎芍大剂量组较模型组表达增加(P=0.005,P0.01),余治疗组与模型组相比表达有增加趋势,但无统计学意义。模型组LXRamRNA较空白对照组表达量明显增加(P=0.000,P0.01),各治疗组较模型组无明显差异(P0.05),模型组与空白对照组兔相比肝脏SR-BI蛋白表达量有减少趋势,但无统计学差异(P=0.281,P0.05),而芎芍胶囊各治疗组较模型组SR-B Ⅰ蛋白表达量有增多趋势,无统计学差异。辛伐他汀组兔与模型组相比,SR-BI蛋白表达量增多明显(P=0.049,P0.05),其与芎芍大剂量组相比表达量无明显差异。模型组兔SR-BI基因表达量较空白对照组明显增加(P=0.021,P0.05)。各给药组与模型组相比,基因转录水平无明显增多(P0.05)。芎芍中剂量组、大剂量组及辛伐他汀组兔SR-BI基因转录水平有升高趋势,且大剂量组较中剂量组更加明显。炎症因子方面,对4个不同时间点的测量结果显示,造模及给药时间长短、不同治疗方法均对各组兔IL-2、TNF-α水平产生影响。模型组与空白对照组相比IL-2水平增加,但无统计学差异(P=0.790,P0.05),与模型组相比,芎芍中、大剂量组及辛伐他汀组兔血浆IL-2水平均明显降低,有统计学意义(P=0.0040.01,P=0.026,P=0.013,P0.05)。模型组兔TNF-α水平较空白对照组升高,但无统计学差异(P=0.120,P0.05),芎芍中、大剂量组及辛伐他汀组较模型组兔TNF-α水平明显降低(P=0.032,P=0.013,P=0.049,P0.05)。模型组比空白对照组兔主动脉NF-κBp65表达量增多,但并无统计学差异(P=0.169,P0.05),各给药组与模型组相比蛋白表达量减少,其中芎芍大剂量组(P=0.035,P0.05),辛伐他汀组(P=0.001,P0.01)与模型组相比下降更明显。模型组NF-κBmRNA表达量与空白对照组相比略有减少,但无统计学差异(P=0.893,P0.05),芎芍大剂量组表达量较模型组增加(P=0.031,P0.05),各给药组基因表达量与空白对照组无明显差异(P0.05)。各治疗组兔PON1水平无明显差异(P0.05),模型组兔与空白对照组兔血浆PON1亦无差异(P=0.697,P0.05)。模型组兔血浆MPO水平与空白对照组相比明显升高(P=0.025,P0.05),芎芍中剂量组及大剂量组、辛伐他汀组较模型组血浆MPO水平明显下降(P=0.028,P=0.013,P0.05；P=0.004,P0.01),芎芍中、大剂量组与辛伐他汀组间比较无差异护0.05)。结论： 1.芎芍胶囊能够抑制AS兔主动脉斑块形成,减少动脉壁细胞内脂质沉积。 2.芎芍胶囊能够通过保护AS兔主动脉平滑肌细胞内cav-1蛋白表达,增加主动脉细胞内胆固醇跨膜转运促进细胞内胆固醇流出,从而减少主动脉细胞内TC及FC含量,起到抗AS作用。 3.芎芍胶囊能够促进AS兔肝脏表达LXRα,促进肝脏内胆固醇代谢,推动RCT过程,其对SR-BI促进作用不明显。 4.芎芍胶囊能够降低AS兔血浆IL-2、TNF-a水平,降低主动脉细胞核内NF-κBp65的活性水平,抑制AS中的炎症反应。 5.芎芍胶囊能够降低AS兔血浆中MPO水平,保护HDL抗炎功能,维持其正常运载脂质的作用,其对血浆PON1水平作用不明显。
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【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R285.5

【参考文献】