清肠愈疡汤治疗TNBS溃疡性结肠炎大鼠的实验研究

发布时间：2019-03-20 09:34

【摘要】：目的：溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis,UC）又称慢性非特异性溃疡性结肠炎，是一种病因不明的直肠和结肠慢性炎症疾病。其临床特征是结肠粘膜慢性炎症伴上皮层溃疡，病情轻重不等多反复发作。主要表现为腹泻、便血、粘液便、发热、贫血等，可并发中毒性肠扩张、肠出血、肠穿孔。现代研究表明细胞因子在溃疡性结肠炎局部炎症反应和免疫反应中起重要作用，白介素促炎性细胞因子是公认的能介导UC发病的细胞因子，在溃疡性结肠炎发病中起重要作用。转化生长因子是一多肽类生长因子，是能够调节免疫，创伤修复，维持粘膜完整性的一类重要介质。本实验宗旨为在建立溃疡性结肠炎大鼠模型上，研究中药汤剂清肠愈疡汤对溃疡性结肠炎大鼠治疗前后一般生理状态变化，血清及肠粘膜组织中促炎性细胞因子IL-1β及转化生长因子TGF-β的变化，以初步探讨中药汤剂清肠愈疡汤治疗溃疡性结肠炎可能的作用机制。材料与方法： 1.实验动物 SPF级SD雄性大鼠，鼠龄11~12周，体重(200±2)g，共40只（辽宁长生生物技术有限公司）。 2.实验方法（1）实验动物分组及处理 40只SD大鼠按随机数字表分为五组：正常空白组、模型对照组、清肠愈疡汤治疗组、香连丸治疗组、美沙拉秦治疗组。用药量按动物与人体的每公斤体重剂量折算系数表换算，换算得出清肠组灌胃量为0.72g/ml，香连组为0.05g/ml，美沙组为0.02g/ml。模型组大鼠等量生理盐水每日灌胃，空白组正常喂养。（2）溃疡性结肠炎大鼠模型的制备除空白组以外的大鼠造模前禁食24小时，水合氯醛肌肉注射麻醉。麻醉后用大鼠灌胃针头从肛门推入TNBS溶液，捏紧肛门平放5分钟即可，制备后常规饲养。（3）指标检测 (a)在第1天、第4天、第8天、第12天对各组大鼠进行疾病活动指数评分（DAI）。 (b) ELISA法检测各组大鼠血清中细胞因子IL-1β、TGF-β表达水平。 (c) ELISA法检测各组大鼠肠组织中细胞因子IL-1β、TGF-β表达水平。结果： 1.一般情况及DAI评分：正常组8只大鼠在实验进程13天内反应灵活、食欲旺盛、无腹泻血便，体质量逐渐增加。余下模型组与三组治疗组在灌胃的第1天进行疾病活动指数评分（DAI），模型组、美沙组、香连组、清肠组的DAI评分与正常组比较有显著差异（P0.01），模型组与三个治疗组间无明显差异（P0.05），三个治疗组间无明显差异（P0.05），各组大鼠均有不同程度精神萎靡、懒动、肉眼血丝便、体质量下降。第4天开始，三个治疗组的DAI评分与模型组比较有明显差异(P0.05)，治疗组内大鼠懒动、腹泻便血、体质量下降等症状较轻。治疗第8天，三个治疗组大鼠症状较模型组病情明显好转、大鼠精神状态较好、体质量增加、腹泻便血症状减轻、食量增加，DAI评分较模型组明显下降，具有统计学意义（P0.05）。治疗第12天，三个治疗组大鼠精神状态佳、活动度增加、饮食量增加、无肉眼血丝便、体质量增加，DAI评分较模型组明显下降，，具有统计学意义（P0.05），且清肠组症状改善优于美沙组与香连组，但三者间尚无明显差异（P0.05）。 2.组织损伤学情况：肉眼观察：空白组：结肠粘膜光整，纹理清晰，无炎性渗出及水肿。模型对照组部分大鼠结肠粘膜炎症明显，结直肠肠壁可以观察到明显水肿与充血，与周围组织粘连。结肠粘膜表面凹凸不平，出现不同程度糜烂、溃疡、增厚水肿，病变主要在远端结直肠。美沙组：结肠粘膜炎症比较模型组有所减轻，有轻微炎性渗出，部分水肿增生。香连组：部分大鼠结肠壁增厚，结肠粘膜炎症对比模型组较轻，无明显水肿，有炎性渗出。清肠组：结肠粘膜炎症比较模型组减轻，结肠粘膜表面无出血水肿，无溃疡，有轻微炎性渗出。光镜下病理形态：模型对照组炎症反应明显，不同程度腺体结构消失，肠粘膜上皮细胞呈现大面积溃疡，大量炎性细胞浸润。美沙组腺体排列仍不规则，有少量小面积溃疡，炎性细胞浸润。香连组肌层完整，腺体排列不规则，可见散在溃疡。清肠组治疗结肠病变改善明显，各层较完整，腺体排列较规则，有少量小面积溃疡。 3.各组血清中IL-1β、TGF-β的表达：模型组大鼠IL-1β明显升高，TGF-β明显降低，差异有统计学意义（P0.05），提示各治疗组造模成功。各治疗组间比较对IL-1β影响：清肠组、美沙组与模型组均有显著性差异（P0.05），两组间差异不明显（P0.05），香连组与模型组无明显差异（P0.05），表明清肠组与美沙组作用相似，均能抑制促炎性细胞因子IL-1β的表达，但其两组间疗效无明显差异，香连组疗效不明显。各治疗组间比较对TGF-β影响：各治疗组与模型组均有差异（P0.05），表明各治疗组均有疗效。美沙组与香连组、清肠组间差异不明显（P0.05）。 4.各组肠组织中IL-1β、TGF-β的表达：模型组与正常组比较：模型组大鼠肠组织中IL-1β明显升高，TGF-β明显降低，差异有统计学意义（P0.05），提示造模成功。各治疗组间比较对IL-1β影响：各治疗组与模型组均有显著性差异（P0.05），美沙组与香连组、清肠组间比较差异不明显（P0.05），清肠组与香连组间比较有差异（P0.05）提示各组均能抑制促炎性细胞因子IL-1β的表达，均有治疗效果。清肠组疗效优于香连组，美沙组疗效与清肠组、香连组疗效差异不明显。各治疗组间比较对TGF-β影响：各治疗组与模型组均有差异（P0.05），表明各组均有治疗作用。香连组、清肠组组间无明显差异（P0.05），两组TGF-β表达均高于美沙组。提示香连组、清肠组两组的治疗效果均优于美沙组，香连组与清肠组间的疗效则无明显差异（P0.05）。结论： TNBS溃疡性结肠炎大鼠模型中促炎性细胞因子IL-1β、转化生长因子TGF-β表达发生显著改变，提示清肠愈疡汤能改善TNBS所致的溃疡性结肠炎大鼠模型，可能通过下调IL-1β水平，上调TGF-β水平而起作用。减轻肠内炎症反应，改善机体免疫功能，从而达到治疗与预防的作用。
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【学位授予单位】：辽宁中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R259

【参考文献】