补肾健脾调肝法对去势雌性大鼠ER及衰老因子的研究

发布时间：2019-06-11 03:18

【摘要】：目的：本实验以3月龄的雌性大鼠为研究对象,探讨补肾法、健脾法、调肝法分别对育龄鼠和去势雌性大鼠ER及衰老因子的影响,探讨金代名医刘完素在《素问病机气宜保命集.妇人胎产论》中提出“妇人童幼天癸未行之间,皆属少阴；天癸已行,皆从厥阴论之；天癸已绝,乃属太阴经也”的理论内涵。从太阴脾经、少阴肾经及厥阴肝经等治法的角度探讨对更年期大鼠衰老的影响和治疗效果。为临床治疗女性更年期提供科学依据。方法： 80天的雌性大鼠,体重在108-250g之间,适应性喂养10天后,区组随机分为空白组、假手术组、去势模型组、去势健脾组、去势补肾组、去势调肝组。给药组在手术前先给药1个月,给药浓度为健脾组：归脾丸,0.4g/ml；补肾组：更年期补肾口服液,4.8g/ml；调肝组：养阴疏肝胶囊0.4g/ml。其它组予以0.9%的生理盐水,每日一次。然后对给药的3组(健脾组、补肾组、调肝组)和去势模型组进行去卵巢手术,假手术组仅切除卵巢周围的脂肪组织。在去势后10天给药组继续按上法药物灌胃2个月。末次给药24小时后0.35%的水合氯醛过量麻醉处死。腹主动脉采血,3000r/min离心血清10min,检测血清中的MDA(丙二醛)、H202(过氧化氢)、ROS(活性氧簇),SOD(超氧化物歧化酶)、CAT(过氧化物酶)、GPX(谷胱甘肽过氧化物酶)、5-HT(5-羟色胺)、DA(多巴胺)及肠中的衰老基因P21、P16、cyclinDl(细胞周期依赖性蛋白D)及ER(雌激素受体)的表达。检测大鼠子宫、下丘脑、海马、垂体、脾、胸腺、肾上腺的体重指数。结果： 1.模型组子宫、下丘脑、垂体、肾上腺的体重指数在去势后均降低。脾的体重指数随着年龄的衰老而降低,胸腺的体重指数去势后升高。 (1)子宫体重指数：与空白组、假手术组比较,模型组子宫体重指数降低(P0.05)；补肾法可以升高下降的子宫体重指数(P0.05),与模型组比较,健脾组、调肝组无显著性差异(P0.05)。 (2)海马体重指数：假手术组、健脾组、调肝组、补肾组、模型组组间比较,无显著性差异(P0.05)。 (3)下丘脑体重指数：与空白组、假手术组比较,模型组下丘脑体重指数降低(P0.01)；与模型组比较,脾法、补肾法可以升高下降的下丘脑体重指数(P0.05)。调肝组则无显著性差异(P0.05)。 (4)垂体体重指数：与空白组、假手术组比较,模型组垂体体重指数明显降低(P0.01)；与模型组比较,健脾法、调肝法、补肾法可以升高下降的垂体体重指数(P0.05)；三种中药干预组对垂体体重指数的升高明显低于空白组(P0.01)； (5)肾上腺体重指数：与空白组、假手术组比较,模型组的肾上腺体重指数无显著性差异(P0.05),结合均值,肾上腺的体重指数是降低的；与模型组比较,健脾组、调肝组的肾上腺体重指数显著增高(P0.05),补肾组无显著性差异(P0.05)；与空白组比较,健脾组的肾上腺体重指数显著升高(P0.05),而调肝组、补肾组则无显著性差异(P0.05)；三组中药干预组组间比较,健脾组的肾上腺体重指数高于补肾组(P0.05)。 (6)脾体重指数：与空白组、假手术组比较,模型组的脾体重指数无显著性差异(P0.05)；与模型组比较,健脾组、调肝组、补肾组的脾体重指数升高(P0.05),与空白组比较,健脾组、调肝组、补肾组的脾体重指数显著升高(P0.05)；三组中药干预组组间进行比较无显著性差异(P0.05)。 (7)胸腺体重指数：与空白组、假手术组比较,模型组的胸腺体重指数明显升高(P0.01)；与模型组比较,健脾组的胸腺体重指数降低(P0.05),调肝组的胸腺体重指数明显降低(P0.01),补肾组大鼠胸腺体重指数则无显著性差异(P0.05)。三组中药干预组组间比较,健脾组、调肝组的胸腺体重指数明显低于补肾组(P0.01)。与空白组比较,健脾组、调肝组、补肾组的胸腺体重指数明显偏高(P0.01)。 2.衰老因子H2O2, MDA, ROS及抗衰老因子SOD、CAT、GPX在去势后大鼠体内的变化 (1)衰老因子方面： ①H202：与空白组、假手术组比较,模型组中的血清中H202含量偏高(P0.05),与模型组比较,健脾组、调肝组、补肾组血清中H202的含量降低(P0.05)。与空白组比较,健脾组、调肝组、补肾组血清中H202的含量无显著性差异(P0.05)。 ②MDA：与空白组、假手术组比较,模型组血清中MDA的含量明显升高(P0.01)。与模型组比较,健脾组、补肾组血清中的MDA含量无显著性差异(P0.05),调肝组血清中的MDA含量明显低于模型组(P0.05)。与空白组比较,健脾组、调肝组、补肾组血清中MDA的含量无显著性差异(P0.05)。 ③ROS：与空白组比较,模型组中的ROS的活力偏高(P0.05),与模型组比较,健脾组、调肝组ROS的活力降低(P0.05)。与空白组比较,健脾组、调肝组血清中H202的含量无显著性差异(P0.05)。 (2)抗衰老因子方面：SOD、GPX的活力在去势后降低。 ①SOD：与空白组、假手术组比较,模型组血清中SOD的活力无显著性差异(P0.05),结合均值,模型组的SOD的活力在降低。与模型组比较,健脾组、补肾组血清中SOD的活力明显升高(P0.01),调肝组大鼠血清中SOD的活力则无显著性差异。与空白组比较,健脾组、补肾组血清中的含量无显著性差异(P0.05)。 ②CAT：空白组、假手术组、补肾组、调肝组、健脾组、模型组组间比较,差异无统计学意义(PO.05)。 ③GPX：与空白组、假手术组比较,模型组大鼠血清中GPX的活力明显降低(P0.01),与模型组比较,调肝组、补肾组大鼠血清中GPX的活力升高(P0.05)。健脾组则无显著性差异(P0.05)。与空白组比较,调肝组、补肾组大鼠血清中GPX的活力无显著性差异(P0.05),健脾组大鼠血清中GPX的活力明显低于空白组(P0.01)。三组中药干预组组间比较,补肾组血清中GPX的活力高于健脾组(P0.05)。 3.神经递质5-HT及DA方面 (1)5-HT：与空白组、假手术组比较,模型组大鼠血清中5-HT的含量降低,与模型组比较,健脾组大鼠血清中5-HT的含量明显增高(P0.01),调肝组、补肾组血清中5-HT的含量则无显著性差异(P0.05)。与空白组比较,健脾组大鼠血清中5-HT的含量则无显著性差异(P0.05),调肝组、补肾组大鼠血清中的5-HT的含量则明显降低(P0.01)。三组中药干预组组间比较,健脾组大鼠血清中5-HT的含量则明显高于调肝组、补肾组(P0.01) (2)DA：空白组、假手术组、健脾组、调肝组、补肾组、模型组组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。 4.小肠中衰老相关基因及ER方面 (1)衰老相关基因CyclinD1、P16、P21:对于CyclinD1的表达,与模型组比较,调肝组CyclinD1的表达升高(P0.05),健脾组、补肾组则无显著性差异(P0.05)。对于P16的表达,三组中药干预组与模型组比较,差异无统计学意义(P0.05),但结合均值,P16的表达在模型组表达最高,在三种中药组干预的作用下有下调的趋势。对于P21的表达,与模型组比较,健脾组、补肾组P21的表达显著降低(P0.01),调肝组P21的表达升高(P0.01),三组中药干预组组间比较,补肾组、健脾组P21的表达低于调肝组(P0.05)。 (2)ER基因：对于ER的表达,三组中药干预组与模型组比较,差异无统计学意义(P0.05),结合其均值ER在模型组表达最高,在中药组的干预下,ER的表达下调的趋势。结论： 1.健脾法对去势大鼠的衰老状态的作用：健脾法可以改善下降的下丘脑、垂体、肾上腺的体重指数,还可增加脾的体重指数,控制胸腺体重指数的增加,增强机体的免疫力；其对肾上腺、胸腺的体重指数的效果要优于补肾法、调肝法；健脾法通过降低衰老因子H202和ROS的活力,下调衰老基因P21,同时升高SOD的活力起到抗衰老的作用,还可以调节血清中神经递质5-HT的含量。 2.补肾法对去势大鼠的衰老状态的作用：补肾法可以改善下降的子宫、下丘脑、垂体的体重指数,可以升高脾的体重指数。还可以降低衰老因子H202的含量,降低衰老基因P21的表达,增强抗衰老因子GPX、SOD的活力起到延缓衰老的作用。 3.调肝法对去势大鼠的衰老状态的作用：调肝法可以改善下降的垂体、肾上腺体重指数,还可升高脾的体重指数,控制胸腺的异常肥大,还可以降低衰老因子MDA、 ROS、H2O2的含量个,增强抗衰老因子GPX的活力,上调细胞周期正性调控因子CyclinD1起到抗衰的作用。综上,健脾法、调肝法、补肾法对于去势大鼠衰老状态的均有改善的作用,但作用层次及着眼点不同。其中健脾法的作用层次有5个,着眼点有肾上腺、胸腺、神经递质5-HT,衰老基因P21。补肾法的作用层次有4个,着眼点有抗衰老因子GPX和衰老基因P21；调肝法作用层次有4个,着眼点在于上调细胞周期正性调控因子CyclinD1的表达。因此其三种方法中健脾法最好,其次是补肾法,最后是调肝法。本实验的结果初步探讨刘完素的“天癸竭,乃属太阴经也”的理论,为丰富临床治疗更年期的方案提供了的初步的实验依据。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R285.5

【参考文献】