五加生化胶囊雌激素样作用的实验研究

发布时间：2019-09-29 08:33

【摘要】：研究目的：本研究通过去卵巢小鼠模型和雌激素受体表达阳性的MCF-7细胞增殖实验,探讨五加生化胶囊类雌激素样作用及其发挥作用的有效用药部位,为五加生化胶囊替代雌激素治疗围绝经期综合症提供依据。研究方法： 1.五加生化胶囊粉对成熟去卵巢小鼠的影响：选取12周龄的昆明种雌性小鼠60只,随机分为假手术组、模型组、五加生化低剂量组(3.120g/kg)、五加生化高剂量组(4.992g/kg)、乙烯雌酚组(0.325mg/kg),每组12只,乙醚麻醉,行双侧卵巢摘除术(假手术组只切除卵巢附近的脂肪,不切除卵巢)。各组灌胃给药,每日一次,假手术组及模型组按体重给予相应体积的生理盐水,所有动物均在同等条件下进食、饮水,连续给药四周。期间观察各组小鼠动情周期情况；于末次给药两小时后,摘除眼球取血,离心取上清,分别测定血清中E2、FSH、TC、TG含量；迅速剥离小鼠子宫及肾上腺称重,计算子宫及肾上腺的脏器指数,并将子宫标本固定,HE常规病理切片染色法观察子宫体积、宫腔形态、腺体数量等。 2.五加生化胶囊65%乙醇提取物对MCF-7细胞增殖的影响：用D-101型大孔树脂柱将五加生化胶囊65%乙醇提取物分离为水洗脱部位、20%乙醇洗脱部位、40%乙醇洗脱部位、60%乙醇洗脱部位,用培养液将各洗脱部位分别配制成10mg/ml、1mg/ml、0.1mg/ml及0.01ng/ml四个浓度,设空白对照组、五加生化组及E2阳性组。将MCF-7细胞接种于96孔板,给药继续培养48小时后,进行MTT显色反应,于酶标仪(BIO-TEK)上490nm处测定各孔光吸收值OD(OD与活细胞数量成正比),并进行三次独立重复实验,结果以三次独立重复试验平均值为准。研究结果： 1.对成熟去卵巢小鼠的影响与假手术组比较,模型组小鼠去除卵巢后,连续5日的动情周期消失,一直处于间情期,子宫萎缩,重量减轻,腺体数量减少,且血清E2、TG含量降低,FSH、TC含量升高。与模型组比较,五加生化高、低剂量组及乙烯雌酚组均可恢复去卵巢小鼠的动情周期,拮抗小鼠子宫萎缩,增加子宫重量；子宫病理切片HE染色显示小鼠子宫内膜变厚,细胞间隙增大,腺体数量增多且腺腔扩大,其中部分充满了红色分泌物(嗜酸性物质)；对去卵巢小鼠肾上腺重量有温和的增加作用,但除乙烯雌酚组外其他各剂量组之间差异无统计学意义；ELISA试剂盒检测发现,五加生化两个剂量组均能显著增加血清中E2含量,促进雌激素分泌,明显降低FSH的含量,拮抗促卵泡生成素分泌,且高剂量组可以显著降低TC含量,并明显升高TG含量,而低剂量组对小鼠血清中TC、TG的含量与模型组相比,无统计学差异。 2.对MCF-7细胞增殖的影响：与空白对照组比较,在0.01mg/ml浓度时,五加生化胶囊提取物各脱部位对MCF-7细胞增殖无影响；在0.1mg/ml浓度时,水洗脱部位、20%乙醇洗脱部位及60%乙醇洗脱部位对MCF-7细胞增殖均无影响,而40%乙醇洗脱部位可明显促进MCF-7细胞增殖；在1mg/ml浓度时,20%、40%及60%乙醇洗脱部位均可明显促进MCF-7细胞增殖,且以40%乙醇洗脱部位对MCF-7细胞的增殖作用最强,但仍弱于E2阳性组；在10mg/ml药物浓度时,五加生化胶囊提取物各洗脱部位对MCF-7细胞增殖均具有抑制作用,其对细胞的生长产生了毒副作用。综上,五加生化胶囊40%乙醇洗脱部位植物雌激素活性最强,可能是该药发挥雌激素样作用的主要有效部位。结论： 1.五加生化胶囊具有明显的类雌激素样作用,可以拮抗小鼠子宫萎缩,增加小鼠子宫重量,调节去卵巢小鼠血清中雌二醇、FSH等激素含量,同时对血脂代谢紊乱有一定的改善作用。 2.五加生化胶囊40%乙醇大孔树脂洗脱部位能显著促进MCF-7细胞的增殖,是五加生化胶囊发挥植物雌激素样作用的有效部位。
【学位授予单位】：黑龙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R285.5

【参考文献】