GRKs在持久激动β-AR诱导的心肌肥厚中的作用

发布时间：2019-10-02 03:24

【摘要】：目的:1.于整体水平探讨不同GRK亚型对心肌Ca MKII活化的影响;筛选出作用显著的GRK亚型,观察其在βAR持久兴奋诱发病理性心肌肥厚中的作用。2.探讨持久兴奋βAR,氧化应激信号分子ROS是否通过影响该GRK亚型激活心肌Ca MKII,诱发病理性心肌肥厚。方法:本课题分两部分进行:第一部分:采用雄性小鼠(体重20-28g)作为野生对照组(WT:SPF级C57BL/6小鼠)、GRK2,3,5,6基因敲除小鼠(GRK2KO、GRK3KO、GRK5KO、GRK6KO)和β1、2-AR突变小鼠(GRK(-):β-AR缺乏GRK磷酸化位点)。各组小鼠分别给予异丙基肾上腺素(ISO)刺激或等量生理盐水两周,断颈处死动物,切取左心室并剥离粘连组织,经液态氮处理后贮存于-80°C。Western Blot用于检测有活性的钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ca MKⅡ(p-Ca MKⅡThr286/T-Ca MKⅡ)的表达变化;心肌匀浆Ca MK II活性采用ELISA方法检测;HE染色检测心肌细胞组织学变化。第二部分:采用健康雄性SD大鼠,体重180~200g,随机分成4组,每组6只:正常对照组(CTRL)、ISO处理组(ISO)、正常NAC组(CTRL+NAC)和ISO处理NAC组(ISO+NAC)。ISO给药方法是ISO及ISO+NAC组动物每天腹腔注射ISO(3mg/kg/d),CTRL及CTRL+NAC组腹腔注射相同体积的生理盐水;NAC给药方法:CTRL+NAC及ISO+NAC组动物每日自由饮用含15g/L NAC的饮用水。连续给药14天后,于第二周末麻醉下处死动物。以心重指数(HW/BW)和左心室组织HE染色检测心肌肥厚情况;RT-q PCT、免疫组化和Western blot检测左室心肌GRK5的表达变化。结果 :第一部分:给予ISO刺激后,WT及GRK2KO,GRK3 KO,and GRK 6 KO小鼠心肌组织中有活性的Ca MK II表达水平明显增加(n=5,P0.05;WT,GRK2KO,GRK3 KO,GRK6 KO ISO刺激组分别与非刺激组相比),而GRK5 KO小鼠心肌组织ISO刺激后有活性Ca MK II表达无明显增加;GRK(-)小鼠心肌组织中ISO刺激的有活性Ca MK II表达亦无明显增加。ELISA检测发现,ISO刺激后WT及GRK2KO,GRK 3 KO,and GRK 6 KO基因敲除小鼠心肌组织匀浆的Ca MK II活性显著增加(n=5,P0.05;WT,GRK2 KO,GRK3 KO,GRK6 KO ISO刺激组分别与非刺激组相比),而GRK5 KO及GRK(-)小鼠ISO刺激后Ca MKII活性无明显增加。HE染色发现ISO刺激可使WT小鼠出现明显心肌肥厚表现,而GRK5 KO小鼠ISO刺激的心肌肥厚得到显著改善。第二部分:(1)ISO刺激组大鼠心重指数(HW/BW)明显高于CTRL组[(3.99±0.13 vs 3.31±0.10)mg/g,P0.05],HE染色显示ISO刺激组与CTRL组相比,心肌细胞横截面积明显增大[(11117.00±387.57 vs 4572.23±176.39)μ3，

本文编号：2544717