MicroRNA-214对大鼠心肌梗死后心肌纤维化的影响

发布时间：2019-10-14 17:44

【摘要】：目的:心血管疾病是导致中老年死亡的常见原因之一，而心力衰竭是心血管疾病导致死亡的主要原因。在最近几年有关microRNA-214(miR-214)的研究中，显示出了其在心血管中的重要作用。大量的研究已经展现出在急性心肌梗死中miR-214表达的相对水平是有区别的。我们已经研究了miR-214在大鼠的急性心肌梗死模型中通过磷酸酶-张力蛋白同源物途径发挥调控左室重塑的作用。此次试验，我们将继续深入的研究miR-214在大鼠模型中急性心肌梗死后心脏纤维化的具体作用：通过结扎大鼠心脏左冠状动脉的前降支制作急性心肌梗死的模型，心腔注射miR-214的前体及抑制剂来调节miR-214的表达，实时定量PCR验证表达情况，观测不同的miR-214表达水平下胶原相关指标的变化情况。方法:一心肌梗死大鼠模型的制备及miR-214的调节成年大鼠麻醉后，气管插管接小动物呼吸机辅助呼吸，被皮后逐层开胸，暴露心脏于胸腔外，阻断心脏血流约6秒，向心腔内缓慢注射药物后，然后结扎左冠状动脉前降支。通过下腔静脉注射依文思蓝的方法证实结扎成功：梗死区的心肌组织是苍白色的，非梗死区的心肌则被染成蓝色。将80只大鼠随机分成4组：假手术组（穿过线后未做结扎n=20），对照组（结扎前心腔内注射PBS，n=20），miR-214上调组（结扎并心腔内注射miR-214前体，n=20），miR-214下调组（结扎并心腔内注射miR-214抑制剂，n=20)。于手术后2周和6周取材，观察比较这两个时间段各指标的不同变化。二心重体重比和组织学分析大鼠称重后通过腹腔内注射水合氯醛的方法处死，取下心脏，称重后放入10%福尔马林中固定。固定好的样本石蜡包埋，切成5um的厚度放于载玻片上进行马松染色。三PCR和western 取1mm*1mm的梗死边缘区的小块组织，放入EP管中，检测miR-214及mmp1的mRNA的表达及胶原I，胶原III，mmp1和tgf-β1蛋白的表达。结果：一心重体重比称量每只大鼠的体重（g）和心脏重量（mg）在取材时，计算得出的在2周和6周各组的心重体重比：对照组和前体组，抑制剂组和前体组具有显著的统计学差异。且前一组明显高于后面的一组。这一结果间接表明心肌组织中miR-214的表达上调能够抑制急性心肌梗死后的心肌纤维化。与此同时，如果miR-214的表达下调则有利于心肌纤维化的发生。二马松染色选取心肌梗死后6周的大鼠左心室心肌进行马松染色。结果显示：对照组与前体组对比有更多的纤维组织增生，而抑制剂组的胶原增生最明显。三实时定量PCR 通过RT-PCR验证不同组别之间miR-214的表达水平。在不同的时间段，与前体组相比，对照组miR-214的表达明显增加。相对于对照组和前体组，抑制剂组表达的miR-214最少。并且各组之间具有明显的统计学差异。随着miR-214表达水平的变化，mmp1呈现一个相反的趋势。对照组与前体组的表达具有明显差异，而抑制剂组mmp-1的表达显著高于前体组。四western Western的结果显示除了不同的分组中各项指标的不同表达。在miR-214表达水平高的分组（前体组），胶原I，，胶原III，mmp1和tgf-β1的蛋白表达是降低的。在2周和6周时，假手术组、对照组、抑制剂组的表达与前体组相比具有显著差异。在2周时，胶原I/III在各组间没有明显差异，而6周时差异明显。总的来说，在miR-214的表达上调组，促进纤维化的各项指标均高于单纯结扎左冠状动脉前降支注射PBS的对照组和下调组。假手术组的表达是最低的。结果表明miR-214能够影响纤维化相关蛋白的表达并且减少心肌的纤维化。结论： 1miR-214对急性心肌梗死心肌纤维化所致的心脏重塑具有保护作用。其表达水平上调时，心重/体重以及胶原的生成具有明显减轻。 2miR-214能够通过影响mmp1，胶原I，胶原III和tgf-β1的基因及蛋白表达而作用于心脏的胶原形成，抑制其重塑。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R542.22

【参考文献】