白介素22融合蛋白对刀豆蛋白A诱导肝损伤病理状态下肝切除后肝再生的影响
发布时间：2019-10-22 06:15
【摘要】：目的研究白介素22融合蛋白(IL-22-FP)对刀豆蛋白A(Con A)诱导急性肝损伤后行70%肝切除手术(PHx)的小鼠术后肝再生及肝脏保护的作用。方法建立小鼠Con A肝损伤和PHx手术模型,术后32 h通过过量麻醉法处死小鼠。5-溴脱氧尿嘧啶核苷染色,观察小鼠肝脏再生情况;全自动生化分析仪检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平;HE染色观察小鼠肝脏组织损伤情况;Western blot法检测小鼠肝组织中增值细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cycli D1)、信号转导子及转录激活子3(STAT3)及p-STAT3蛋白的表达情况。结果 Con A+PHx+IL-22-FP组小鼠同Con A+PHx+rh-IL-22组及其他组小鼠相比,表现出更多的肝细胞增殖和更高的肝指数(肝脏重量/体重);HE染色显示Con A+PHx+IL-22-FP组小鼠肝脏坏死及炎症细胞浸润程度较低;生化检测显示ConA+PHx+IL-22-FP组血清ALT和AST水平明显低于其他组;Western blot结果表明Con A+PHx+IL-22-FP组小鼠的肝脏组织PCNA、Cyclin D1和p-STAT3蛋白的表达量也明显高于其他组。结论 IL-22-FP能够促进由Con A诱导肝损伤的小鼠PHx后的肝再生,并表现出显著的肝脏保护作用。
【图文】：
图1IL-22-FP对小鼠术后肝指数及肝细胞增殖的影响BrdU染色×400A:部分肝切除术后各组肝指数变化;B:部分肝切除术后肝组织BrdU染色图;C:部分肝切除术后不同组别肝组织BrdU阳性率比较;1:Co-nA组;2:PHx组;3:ConA+PHx组;4:ConA+PHx+rh-IL-22组;5:ConA+PHx+IL-22-FP组;与ConA+PHx+IL-22-FP组比较:*P＜0.05，，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;与ConA+PHx+rh-IL-22组比较:#P＜0.01图2IL-22-FP对小鼠术后血清ALT和AST水平的影响A:ALT;B:AST;1:ConA组;2:PHx组;3:ConA+PHx组;4:ConA+PHx+rh-IL-22组;5:ConA+PHx+IL-22-FP组;与ConA+PHx+IL-22-FP组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;与ConA+PHx+rh-IL-22组比较:#P＜0.05+IL-22-FP组更加明显，说明IL-22-FP在这种模型的损伤下对肝脏具有更强的保护作用。2．4不同剂量IL-22-FP对PHx后肝再生作用的对比小鼠根据体重随机分为3组(n=6)，分别标记为低、中、高剂量组，每组给以ConA损伤，4d后行PHx手术(具体给药及手术方法如实验方法中所述)。术前30min低、中、高3组分别给予42、125和375μg/kg剂量的IL-22-FP静脉注射，术后32h过量麻醉处死小鼠。3组肝脏组织BrdU染色结果及BrdU阳性细胞百分比结果显示见图4。从染色图片可以看出中剂量组和高剂量组染色阳性细胞数明显高于低剂量组，BrdU阳性细胞百分比的结果也证实了这一点。尽管高剂量组BrdU阳性细胞数量多于中剂量组，但差异无统计学意义。低剂量组血清ALT水平明显高于中剂量组(P＜0.05)和高剂量组(P＜0.05)，同样的，中剂量组和高剂量组的差异无统计学意义(图5)。见表3。2．5IL-22-FP促进术后PCNA、CyclinD1和p-STAT3蛋白的表达图6显示，在PHx术后，ConA+PHx+rh-IL-22组和ConA+PHx+IL-22-FP组小鼠较其他组肝?
图3IL-22-FP对小鼠术后肝组织的保护作用HE×400A:ConA组;B:PHx组;C:ConA+PHx组;D:ConA+PHx+rh-IL-22组;E:ConA+PHx+IL-22-FP组图4不同剂量IL-22-FP对小鼠术后肝细胞增殖的影响BrdU染色×400A:低剂量组(42μg/kg);B:中剂量组(125μg/kg);C:高剂量组(375μg/kg);与低剂量组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01图5不同剂量IL-22-FP对小鼠术后血清ALT水平的影响与低剂量组比较:*P＜0.05增加的更加显著，没有经过任何处理的正常组和ConA组表达量较少。这提示IL-22能够促进小鼠术后肝脏中上述3种蛋白的表达，且IL-22-FP的促进作用强于rh-IL-22。各组STAT3蛋白表达量差异较校图6IL-22-FP对小鼠术后肝组织PCNA、CyclinD1、STAT3及p-STAT3蛋白表达的影响A:正常组;B:ConA组;C:PHx组;D:ConA+PHx组;E:ConA+PHx+rh-IL-22组;F:ConA+PHx+IL-22-FP组;与ConA+PHx+IL-22-FP组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;与ConA+PHx+rh-IL-22组比较:#P＜0.0013讨论外科肝切除手术被认为是肝癌患者的最佳治疗手段。对于正常肝脏行PHx的最大比率为肝总体的70%～75%［9］，超过这一比例很有可能由于残余肝脏再生不足而导致急性肝衰竭;而对于伴有基础肝病/肝损伤的患者而言，这一切除比率会大大降低，这将严重限制手术的开展和疾病的治疗。本研究证实了IL-22-FP能够在存在基础肝脏疾病的条件下显著的提高PHx后的肝再生水平，同时，有效的减少术后肝脏的损伤。这为IL-22-FP用于临床扩展肝切除手术适应症及提高术后患者生存率提供了数据支持。目前的研究［1－6］已经证实，IL-22在多种化学毒物(ConA、Ccl4、GaIN)、乙型肝炎病毒和酒精等因素引起的肝损伤中扮演着保肝角色，而这种保护作用·1112·安徽医科大学学报Ac
【作者单位】： 安徽医科大学药学院;安徽医科大学肝病研究所;安徽医科大学第一附属医院肿瘤科;安徽省立医院老年医学科;
【基金】：国家自然科学基金(编号:81100311,81470879) 新世纪优秀人才支持计划(编号:NCET-13-0644) 安徽省皖江学者计划
【分类号】：R965
【图文】：
图1IL-22-FP对小鼠术后肝指数及肝细胞增殖的影响BrdU染色×400A:部分肝切除术后各组肝指数变化;B:部分肝切除术后肝组织BrdU染色图;C:部分肝切除术后不同组别肝组织BrdU阳性率比较;1:Co-nA组;2:PHx组;3:ConA+PHx组;4:ConA+PHx+rh-IL-22组;5:ConA+PHx+IL-22-FP组;与ConA+PHx+IL-22-FP组比较:*P＜0.05，，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;与ConA+PHx+rh-IL-22组比较:#P＜0.01图2IL-22-FP对小鼠术后血清ALT和AST水平的影响A:ALT;B:AST;1:ConA组;2:PHx组;3:ConA+PHx组;4:ConA+PHx+rh-IL-22组;5:ConA+PHx+IL-22-FP组;与ConA+PHx+IL-22-FP组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;与ConA+PHx+rh-IL-22组比较:#P＜0.05+IL-22-FP组更加明显，说明IL-22-FP在这种模型的损伤下对肝脏具有更强的保护作用。2．4不同剂量IL-22-FP对PHx后肝再生作用的对比小鼠根据体重随机分为3组(n=6)，分别标记为低、中、高剂量组，每组给以ConA损伤，4d后行PHx手术(具体给药及手术方法如实验方法中所述)。术前30min低、中、高3组分别给予42、125和375μg/kg剂量的IL-22-FP静脉注射，术后32h过量麻醉处死小鼠。3组肝脏组织BrdU染色结果及BrdU阳性细胞百分比结果显示见图4。从染色图片可以看出中剂量组和高剂量组染色阳性细胞数明显高于低剂量组，BrdU阳性细胞百分比的结果也证实了这一点。尽管高剂量组BrdU阳性细胞数量多于中剂量组，但差异无统计学意义。低剂量组血清ALT水平明显高于中剂量组(P＜0.05)和高剂量组(P＜0.05)，同样的，中剂量组和高剂量组的差异无统计学意义(图5)。见表3。2．5IL-22-FP促进术后PCNA、CyclinD1和p-STAT3蛋白的表达图6显示，在PHx术后，ConA+PHx+rh-IL-22组和ConA+PHx+IL-22-FP组小鼠较其他组肝?
图3IL-22-FP对小鼠术后肝组织的保护作用HE×400A:ConA组;B:PHx组;C:ConA+PHx组;D:ConA+PHx+rh-IL-22组;E:ConA+PHx+IL-22-FP组图4不同剂量IL-22-FP对小鼠术后肝细胞增殖的影响BrdU染色×400A:低剂量组(42μg/kg);B:中剂量组(125μg/kg);C:高剂量组(375μg/kg);与低剂量组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01图5不同剂量IL-22-FP对小鼠术后血清ALT水平的影响与低剂量组比较:*P＜0.05增加的更加显著，没有经过任何处理的正常组和ConA组表达量较少。这提示IL-22能够促进小鼠术后肝脏中上述3种蛋白的表达，且IL-22-FP的促进作用强于rh-IL-22。各组STAT3蛋白表达量差异较校图6IL-22-FP对小鼠术后肝组织PCNA、CyclinD1、STAT3及p-STAT3蛋白表达的影响A:正常组;B:ConA组;C:PHx组;D:ConA+PHx组;E:ConA+PHx+rh-IL-22组;F:ConA+PHx+IL-22-FP组;与ConA+PHx+IL-22-FP组比较:*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001;与ConA+PHx+rh-IL-22组比较:#P＜0.0013讨论外科肝切除手术被认为是肝癌患者的最佳治疗手段。对于正常肝脏行PHx的最大比率为肝总体的70%～75%［9］，超过这一比例很有可能由于残余肝脏再生不足而导致急性肝衰竭;而对于伴有基础肝病/肝损伤的患者而言，这一切除比率会大大降低，这将严重限制手术的开展和疾病的治疗。本研究证实了IL-22-FP能够在存在基础肝脏疾病的条件下显著的提高PHx后的肝再生水平，同时，有效的减少术后肝脏的损伤。这为IL-22-FP用于临床扩展肝切除手术适应症及提高术后患者生存率提供了数据支持。目前的研究［1－6］已经证实，IL-22在多种化学毒物(ConA、Ccl4、GaIN)、乙型肝炎病毒和酒精等因素引起的肝损伤中扮演着保肝角色，而这种保护作用·1112·安徽医科大学学报Ac
【作者单位】： 安徽医科大学药学院;安徽医科大学肝病研究所;安徽医科大学第一附属医院肿瘤科;安徽省立医院老年医学科;
【基金】：国家自然科学基金(编号:81100311,81470879) 新世纪优秀人才支持计划(编号:NCET-13-0644) 安徽省皖江学者计划
【分类号】：R965
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 韩淑媛;黄志强;刘永雄;于国;咎世明;张曙光;李晖;;大鼠肝部分切除后肝再生过程的动态观察[J];传染病信息;1995年02期
2 唐天勋,樊克武,井清源;大鼠肝、胰十二指肠联合切除对残肝再生的影响[J];南京医科大学学报;2002年01期
3 黄志刚,刘殿武;肝再生增强因子的研究进展[J];中国病理生理杂志;2002年05期
4 王阁;肝再生信号转录调控进展[J];国外医学(消化系疾病分册);2003年04期
5 赵利峰,徐存拴,王林嵩,章静波;调控肝再生的基因和生长因子的研究进展[J];解剖学报;2004年03期
6 许翠萍,韩德五,张杨,赵元昌,尹镭;肝部分切除大鼠肠源性内毒素血症与肝再生的关系[J];世界华人消化杂志;2004年12期
7 李瀚e
本文编号：2551506
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/mazuiyixuelunwen/2551506.html
最近更新
教材专著
