Mfn2过表达对七氟醚后处理糖尿病大鼠心肌损伤及细胞凋亡的影响

发布时间：2017-03-20 17:03

  本文关键词：Mfn2过表达对七氟醚后处理糖尿病大鼠心肌损伤及细胞凋亡的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:探讨线粒体融合蛋白2(Mfn2)重组腺病毒过表达后能否对七氟醚后处理糖尿病大鼠的心肌缺血再灌注损伤及细胞凋亡产生影响,为糖尿病病人的心肌保护提供新的理论依据和临床思维。方法:(1)糖尿病SD大鼠合并心肌缺血再灌注损伤模型的建立。210~260g雄性SD大鼠45只,分为3组(n=15):正常对照组(NC组)15只,糖尿病对照组(DMS组)15只,糖尿病合并心肌缺血再灌注损伤组(DMIR组)15只。DMIR组选用大鼠腹腔给与链脲佐菌素(STZ,60mg/kg)并在心脏结扎冠状动脉左前降支(LAD)30min后,再灌注120min的方法建造模型;NS组大鼠则要腹腔给与等量的枸橼酸钠缓冲液以做对照;DMS组大鼠给与链脲佐菌素(STZ,60mg/kg)并在LAD下穿线。各组大鼠在造模前,给与STZ后1、2、3和4周后测大鼠空腹血糖值、体重(包括心脏湿重和左心室质量)、尿量还有饮水量,造模成功后测定心梗面积,HE染色观察心脏的心肌病理学损伤是否严重。(2)Mfn2重组腺病毒(Adv-Mfn2)过表达后是否对七氟醚后处理对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤及细胞凋亡有影响。这部分实验要模仿第一部分制造糖尿病大鼠心脏缺血再灌注损伤模型的造模过程,并选用随机数字表法将大鼠分为5组(n=9):糖尿病对照组(C组),糖尿病合并心肌缺血再灌注组(I组),糖尿病心肌缺血再灌注后加七氟醚后处理组(IS组),糖尿病心肌缺血再灌注后给与空载体再加七氟醚后处理组(IAS组),糖尿病心肌缺血再灌注加Mfn2重组腺病毒再加七氟醚后处理组(IMS组)。C组大鼠只在LAD下穿线不结扎;I组大鼠结扎lad30min,再灌注120min制造模型;is组大鼠要在灌注前5min吸入麻醉药七氟醚,吸入5min后松开lad选择再灌注120min的方法制造模型;ias组大鼠在制造糖尿病模型的同时,先麻醉好大鼠,经舌下静脉给予空载体(adv),其余处理同is组;ims组大鼠在制造糖尿病模型的同时,先麻醉大鼠,然后经舌下静脉给予adv-mfn2腺病毒,其余处理同is组。每组大鼠选择在灌注120min后经腹主动脉取血,检测肌酸激酶同工酶(ck-mb)和肌钙蛋白(ctni)的含量;处理死大鼠后,取下心脏,采用tunel方法检测心肌凋亡指数(ai)是否变化,he染色后观察心脏的心肌病理学损伤,观察其是否损伤,选用western-blot法测定心肌mfn2表达,观察其是否上调。结果:(1)nc组大鼠随着时间的推移体重慢慢增加,活动也活跃,毛发光亮还比较洁白。糖尿病大鼠(dms组和dmir组)模型1周后,2周后及3、4周后空腹的血糖值都16.7mmol/l,而且在造模后1、2、3和4周后稳定在比较高的水平,糖尿病大鼠(dms组和dmir组)的空腹血糖值、体重、还有尿量与饮水量与相同时间点nc组的空腹血糖值、体重值、尿量与饮水量值相比差异有统计学意义(p0.05)。随着糖尿病程延长,大鼠活动减少,出现消瘦,皮下脂肪明显减少,皮毛松散,暗黄无光泽。与nc组对比,dms组和dmir组大鼠体重值、心脏湿重值和左心室质量明显出现了降低,dmir组心梗面积也增加(p0.05);与dms组比较,dmir组老鼠体重值、心脏湿重值和左心室质量相比差异没有统计学意义(p0.05),心梗面积相应增加(p0.05)。数字病理切片扫描器下nc组心肌纤维结构清晰光整,染色很均匀,细胞形态结果也正常;dms组心肌纤维顺序基本完整,细胞有轻度的水肿,能看见少量的炎症细胞局部侵润;dmir组心肌细胞肿胀明显,心肌细胞弥漫性缺血和坏死,排列很不规则、无序,断裂明显,形态别扭,边界看不清。(2)与c组比较,i组、is组、ias组、ims组大鼠血清ck-mb、ctni均升高,心肌细胞ai均增加(p0.05),心肌纤维病理学伤害都严重,并且i组、is组和ias组三组大鼠心肌细胞的mfn2表达也下调了(p0.05),而ims组的大鼠心肌mfn2上调(p0.05)。与i组比较,ims组的大鼠血清中ck-mb、ctni、心肌细胞AI降低(P0.05),心肌病理学伤害减轻,心肌细胞Mfn2表达上升(P0.05)。与IS组比较,IMS组大鼠血清中CK-MB、cTnI、心肌细胞AI都降低(P0.05),心肌病理学伤害减轻,心肌Mfn2表达上升(P0.05)。与IAS组比较,IMS组大鼠的血清中CK-MB活性、cTn I浓度、心肌细胞AI值降低(P0.05),心肌病理学伤害减轻,心肌Mfn2表达上升(P0.05)。I组、IS组和IAS组大鼠的血清中CK-MB活性、cTnI浓度、心肌细胞AI值及心肌Mfn2表达量差异没有统计学意义(P0.05),心肌病理学损伤变化不是特别明显。结论:(1)糖尿病心肌缺血再灌注的造模采选用大鼠腹腔给予STZ(60mg/kg)还结扎LAD的方法造模。这种方法造模方式简单、可靠、易行,造模成功率非常高,稳定性也好,是糖尿病心肌缺血有关研究动物的理想模型。糖尿病大鼠造模后四周的血糖值及尿量都基本稳定,是实验进行心脏IR造模的最好时期。(2)糖尿病因素可以消除七氟醚后处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用,它的机制可能与糖尿病大鼠心肌IRI时Mfn2表达下降有关系。Mfn2重组腺病毒过表达后能恢复七氟醚后处理对糖尿病心肌IRI的保护作用,它的机制可能跟Mfn2可以增加线粒体膜的融合,保证线粒体处于动态平衡之中,减少心肌细胞的凋亡有关。
【关键词】：糖尿病 麻醉药 吸入 心肌保护 细胞凋亡 融合蛋白质类
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 常用缩写词中英文对照表13-14
• 前言14-15
• 第一部分 糖尿病大鼠合并心肌缺血再灌注损伤模型的建立15-27
• 1 材料与方法15-19
• 1.1 实验材料15-16
• 1.2 实验方法16-18
• 1.3 统计学处理18-19
• 2 结果19-24
• 2.1 大鼠血糖、体重、饮水量、尿量及一般情况的变化19-21
• 2.2 大鼠心电图变化21-22
• 2.3 大鼠心肌梗死面积结果22-23
• 2.4 心肌HE染色23-24
• 3 讨论24-26
• 4 结论26-27
• 第二部分 Mfn2过表达对七氟醚后处理糖尿病大鼠心肌损伤及细胞凋亡的影响27-44
• 1 材料和方法28-36
• 1.1 实验材料28-29
• 1.2 实验方法29-35
• 1.3 统计学处理35-36
• 2 结果36-41
• 2.1 肌酸激酶（CK-MB）活性36
• 2.2 肌钙蛋白（cTn I）浓度36-37
• 2.3 心肌HE染色37-38
• 2.4 细胞凋亡实验结果38-39
• 2.5 Western-Blot实验结果39-41
• 3 讨论41-43
• 4 结论43-44
• 参考文献44-48
• 综述48-57
• 参考文献53-57
• 致谢57-58
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果58-59
• 个人简介59

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