Barrett食管和腺癌动物模型不同术式的建立与评价

发布时间：2017-03-28 12:15

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【摘要】：背景:在欧洲和美国,常见的胃食管反流病(Gastroesophageal reflux disease,GERD)相关的Barrett食管(Barrett?s esophagus,BE)和食管腺癌(Esophageal adenocarcinoma,EAC)具有较高的发生率。随着我国经济的快速发展,城乡居民的生活方式和饮食结构的巨大变化,近年来其发病率在我国也有上升趋势,Barrett食管作为食管腺癌的重要危险因素,日益受到人们的关注。动物模型是研究人类疾病的重要工具之一,可用于研究病因学、病理表型、发病学、发病机制以及预防和治疗手段。为此,我们以不同术式建立Barrett食管和食管腺癌模型,评价其优劣性及其对人类研究的价值。不同动物模型服务于不同的研究目的,但任何一个动物模型均有其内在的局限性。因此建立并选择合适的动物模型对Barrett食管和食管腺癌的研究非常重要。大鼠是研究Barrett食管和食管腺癌最常用的模型动物之一。大鼠食管大小适中,手术操作相对较易;对Barrett食管和食管腺癌的易感性较大,在胃食管反流液的刺激下可诱导出多层上皮、Barrett食管和食管腺癌。目的:通过不同术式构建Barrett食管动物模型以评价研究Barrett食管发生发展过程,为今后Barrett食管的防治提供理论依据。方法:1实验动物健康清洁级雄性SD大鼠160只,体重(200±10)g,采用架式笼养,每笼5只。饲养前,饲养室进行紫外线照射消毒,饲养笼给予过氧乙酸消毒。室内保持恒温为(22±2)C,湿度为50%~60%,光照黑暗各12 h交替。大鼠购入适应环境1周,饲料为标准颗粒饲料,饮水为自来水。2实验分组将160只雄性SD大鼠,随机分为A、B、C、D、E、F组。A组:假手术组(简称SO组,n=10);B组:食管空肠吻合术组(简称EJA组n=30);C组:食管十二指肠端侧吻合术组(简称EDA组n=30只);D组:食管十二指肠端侧吻合术加铁剂组(简称EDA+Fe组n=30只);E组:食管胃十二指肠侧侧吻合术组,(简称EGDA组n=30只);F组:食管十二指肠侧侧吻合加铁剂组(简称EGDA+Fe组n=30只)。3动物模型制作术前禁食24h,禁水12h。以10%水合氯醛0.3ml/100g腹腔注射麻醉之后,取上腹正中切口进入腹腔,分别采用食管空肠吻合、食管十二指肠端侧吻合和食管胃十二指肠侧侧吻合三种术式建立大鼠胃空肠食管反流、胃十二指肠食管反流、空肠食管反流动物模型,对照组为假手术组。术后2周EDA+Fe和EGDA+Fe组大鼠腹腔注射右旋糖酐铁注射液(30mg/kg每周2次,共30周),术后12周每组各处死5只大鼠,其余大鼠术后32周全部处死,取食管中下段行大体观察及HE染色后光镜下病理学检查。结果:1大鼠食管大体形态改变术后12周SO组、EJA组、EDA组、EDA+Fe组、EGDA组、EGDA+Fe组各处死5只。SO组大鼠腹腔无粘连,食管外观正常,纵行剖开食管,观察食管黏膜光滑,无红肿糜烂及溃疡等;实验各组均出现炎症表现,食管中下段黏膜充血、糜烂,散在浅表溃疡及纵深溃疡,加铁剂组较严重,且腹腔有不同程度粘连。术后32周实验各组食管病变较12周明显加重。食管外观明显增粗加铁剂者尤甚,腹腔粘连严重,胃体积较前缩小,胃底部可见白色鹅卵石样肿块。2大鼠模型组织病理学改变实验各组术后12周食管均可见炎症,急性和/或慢性炎症,以急性炎症为主,多为中性粒细胞浸润同时伴有组织水肿。食管鳞状上皮异型增生,呈乳头瘤样,食管壁增厚,基底层细胞不同程度增生。术后32周食管病变,炎症及溃疡均较前进一步加重。实验各组炎症发生率均为100%,上皮基底细胞层较前增厚,上皮乳头延长,基底层细胞增生。EJA组、EDA组、EDA+Fe组、EGDA组及EGDA+Fe组,鳞状上皮异型增生发生率分别为52.3%、35.2%、75.0%、43.5%、73.9%;Barrett食管发生率分别为23.8%、23.5%、62.5%、26.1%、56.5%。化生的柱状上皮呈绒毛状结构,由杯状细胞和柱状细胞构成。实验组EJA组、EDA+Fe组、EGDA+Fe组发生有EAC。3大鼠模型存活和死亡情况术后大鼠3 h左右开始清醒,可翻身爬动,但行动迟缓,精神较差,无目标性,对外界刺激反应淡漠。术后24h禁食不禁水。一般于3 d后精神、饮食和饮水量基本恢复至正常,行动逐渐自如。造模术中死亡6只、围手术期死亡14只及第12周试验结束前死亡11只,共死亡35只,死亡率23.3%(35/150),其中吸入性肺炎8只,占22.8%(8/35),吻合口狭窄7只,占20.0%(6/35),麻醉意外死亡5只,占14.3%(5/35),不明原因死亡6只,占17.1%(6/35)。死亡原因多为吻合口瘘、肺部和腹腔感染等。假手术对照组无死亡。结论:1采用食管空肠吻合、食管十二指肠端侧吻合和食管十二指肠侧侧吻合三种术式均可成功形成大鼠Barrett食管模型,在构建中加用铁剂可以明显加重大鼠食管的损伤,并加速Barrett食管和腺癌的发生。2成功建立大鼠Barrett食管和腺癌模型,需要研究者和术者具有良好的麻醉、解剖生理知识以及熟练的手术基本功,及时处理并发症和必要的术后护理是减少死亡率的关键。
【关键词】：反流性食管炎 动物模型 Barrett食管 食管腺癌 铁剂
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1;R-332
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文缩写11-12
• 前言12-13
• 材料与方法13-17
• 结果17-21
• 附图21-22
• 附表22-24
• 讨论24-25
• 结论25-26
• 参考文献26-30
• 综述 Barrett食管:小鼠模型对人类疾病研究有什么意义30-47
• 参考文献38-47
• 致谢47-48
• 个人简历48

【参考文献】

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1 Tomoyuki Akiyama;Masahiko Inamori;Hiroshi Iida;Hiroki Endo;Kunihiro Hosono;Yasunari Sakamoto;Koji Fujita;Masato Yoneda;Hirokazu Takahashi;Tomoko Koide;Chikako Tokoro;Ayumu Goto;Yasunobu Abe;Takeshi Shimamura;Noritoshi Kobayashi;Kensuke Kubota;Satoru Saito;Atsushi Nakajima;;Shape of Barrett's epithelium is associated with prevalence of erosive esophagitis[J];World Journal of Gastroenterology;2010年04期

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本文编号：272254