小檗碱对NAFLD大鼠肝组织Nrf2-ARE信号通路mRNA及蛋白表达的影响

发布时间：2017-03-30 19:09

  本文关键词：小檗碱对NAFLD大鼠肝组织Nrf2-ARE信号通路mRNA及蛋白表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过高脂饮食诱导建立大鼠NAFLD模型,观察小檗碱对NAFLD大鼠肝组织Nrf2-ARE信号通路相关基因及蛋白表达的调控作用,探讨小檗碱防治NAFLD作用机制。方法:将24只SPF级健康成年雄性SD大鼠按随机数字表法随机分为3组,分别为:正常组,模型组,小檗碱组,每组8只。采用高脂饲料喂养复制大鼠NAFLD模型。正常组给予基础饲料,其它两组予以高脂饲料喂养,小檗碱组同时灌饲小檗碱(100mg/kg)干预,正常组和模型组予实验动物饮用水。8周后戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,提取血清检测常规生化指标(AST、ALT、TC、TG、LDL-C、HDL-C),取肝组织进行TC、TG检测,并行HE和油红O染色观察病理变化,比色法检测肝组织GSH-Px、NO;Real-time Q-PCR和Western Blot方法检测各组肝组织Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1 m RNA及相关蛋白表达。结果:1肝组织病理HE染色示:正常组大鼠肝小叶、肝索结构完好清晰,肝索和肝血窦在中央静脉周围大致呈放射状排列,肝细胞结构完整呈多面体形,排列整齐,界限明显,胞质红染均匀,细胞没有或有较少和较小的脂肪空泡,胞核大而圆,位置居中,无明显病变;模型组大鼠肝组织切片肝窦、肝索结构紊乱不清,脂肪变性明显,可见肝细胞肿胀,胞浆内存在大小不一的圆形脂滴,以大泡性脂滴为主,胞核被挤压、靠向边缘;小檗碱组大鼠肝组织脂肪变性情况较模型组显著改善。油红O染色示:正常组大鼠肝细胞核淡蓝居中,肝细胞内未见明显橘红色脂滴,偶见正常散在的小红染脂滴,细胞间间隙清晰,肝窦结构正常,细胞排列整齐;模型组大鼠肝细胞肿胀,核质深蓝染色、靠边,肝细胞内可见大片的红染脂滴,相邻细胞间红染融合,小叶结构破坏,肝索紊乱不清;小檗碱组肝细胞内红染脂滴量介于正常组与模型组之间。2血脂、肝脂含量测定血脂:模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C与正常组比较显著升高(P0.01,P0.05),HDL-C显著降低(P0.01);小檗碱组大鼠血清TC、TG、LDL-C与模型组比较显著降低(P0.05),HDL-C显著升高(P0.05)。肝脂:模型组较正常组大鼠肝组织TC、TG显著升高(P0.01,P0.05),小檗碱组较模型组明显降低(P0.01,P0.05)。提示NAFLD大鼠存在脂质代谢紊乱,小檗碱可以改善NAFLD大鼠血脂。3血清AST、ALT测定模型组大鼠血清AST含量及AST/ALT的比值与正常组比较显著升高(P0.05),小檗碱组与模型组比较AST及AST/ALT的比值有下降趋势但没有统计学意义(P0.05);与正常组相比较,模型组大鼠血清ALT含量无显著性增高(P0.05),小檗碱组与模型组比较没有统计学意义(P0.05)。4氧化应激因子测定与正常组比较,模型组大鼠肝组织及血清GSH-Px活力明显降低(P0.05);与模型组大鼠比较,小檗碱组肝组织及血清GSH-Px活力明显升高(P0.05);说明NAFLD大鼠肝组织中GSH-Px活力低下,而小檗碱可以明显改善GSH-Px的活力起到抗氧化应激的作用。模型组大鼠肝组织及血清NO水平较正常组明显升高(P0.05),而小檗碱组的NO水平较模型组大鼠显著降低(P0.05);提示NAFLD大鼠肝组织中存在NO的高表达,而小檗碱可以降低其水平从而起到保护肝脏的作用。5肝组织Nrf2-ARE信号通路相关基因及蛋白检测模型组大鼠肝组织Nrf2、NQO1、HO-1 m RNA及蛋白表达量较正常组明显上升(P0.05),而Keap1 m RNA及蛋白的表达无显著的统计学差异(P0.05)。与模型组相比较,小檗碱组Nrf2、NQO1、HO-1 m RNA及蛋白表达水平显著上升,Keap1 m RNA及蛋白无显著的统计学差异(P0.05)。结果表明在NAFLD大鼠肝组织中Nrf2、NQO1、HO-1m RNA及蛋白有高表达,小檗碱对NAFLD大鼠肝组织Nrf2、NQO1、HO-1 m RNA及蛋白的表达有上调作用,对Keap1 m RNA及蛋白的表达影响较小。结论:(1)采用高脂饲料连续喂养SD大鼠8周,可以成功诱导NAFLD大鼠模型。(2)NAFLD大鼠存在脂质代谢紊乱、肝组织脂肪变性以及肝组织Nrf2-ARE信号通路的活化。(3)小檗碱可以改善NAFLD模型大鼠肝脏脂肪变性,其机制可能通过调节肝脏Nrf2-ARE信号通路相关基因及蛋白的表达并调控相关氧化应激因子的表达,改善氧化应激而起作用。
【关键词】：小檗碱 NAFLD 氧化应激 Nrf2-ARE信号通路 大鼠
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 主要缩略词英汉对照表3-4
• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-11
• 第一部分 理论研究11-20
• 1 研究现状11-12
• 2 氧化应激与NAFLD12-13
• 3 抗氧化物质13-14
• 4 Nrf2-ARE信号通路与NAFLD14-16
• 5 NAFLD诊断16-17
• 6 中医与NAFLD17-18
• 7 小檗碱与NAFLD18-20
• 第二部分 实验研究20-44
• 1 材料20-22
• 2.实验方法22-31
• 3 结果31-44
• 第三部分 讨论44-46
• 第四部分 结论与展望46-47
• 参考文献47-53
• 附录53-54
• 在校期间发表学术论文及参与科研情况54-55
• 致谢55

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