朊蛋白在阿尔茨海默病和正常小鼠视网膜组织上的表达研究

发布时间：2017-03-31 07:14

  本文关键词：朊蛋白在阿尔茨海默病和正常小鼠视网膜组织上的表达研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过观察细胞型朊蛋白(celular prion protein,Pr Pc)在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠和正常小鼠视网膜组织上的表达情况,分析Pr Pc与AD小鼠视网膜组织改变之间存在的关系,为下一步研究Pr Pc在AD视网膜退行性病变上的发病机制研究奠定实验基础,也为阿尔茨海默病的早期诊断和早期治疗提供一定的研究方向。方法:选取6月龄大小的双转基因(APP/PS1)阿尔茨海默病C57小鼠30只作为实验组,6月龄大小30只正常健康的C57小鼠作为对照组,雌雄各半,相同的饲养环境。将小鼠过量麻醉处死后,暴露眼球,分离睑结膜,剪断视神经取出眼球,在解剖显微下迅速的取出视网膜,将视网膜放入EP管内,液氮冻存。首先通过HE染色技术观察AD小鼠与正常小鼠视网膜组织结构上的差异;免疫荧光检测Pr Pc在AD及正常小鼠视网膜组织上的表达情况,共聚焦显微镜观察Pr Pc的亚细胞定位。通过逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)检测两组小鼠视网膜组织中Pr Pc基因的表达差异;蛋白质印迹法(Western Blot,WB)技术检测两组小鼠视网膜组织中Pr Pc蛋白的表达情况,利用上述的两种实验方法以β-actin作内参因子。分析Pr Pc在阿尔茨海默病的视网膜组织的病理改变中是否存在作用,对进一步研究Pr Pc在阿尔茨海默病视网膜病变中的发病机制提供一定的实验依据。结果:1.通过对AD小鼠及正常小鼠视网膜组织的HE染色,结果显示:在视网膜组织结构中,AD小鼠视网膜组织中的内、外核层细胞数量较正常小鼠视网膜组织明显减少,其视盘盘周神经上皮层厚度较正常小鼠变薄。2.通过对AD小鼠及正常小鼠视网膜组织免疫荧光染色,结果显示:AD小鼠及正常小鼠视网膜组织中均可见Pr Pc表达,但是AD小鼠视网膜组织中Pr Pc的表达明显强于正常小鼠视网膜组织,其平均光密度值(MOD)比较具有统计学差异(P0.05),Pr Pc主要分布于视网膜内外丛状层、光感细胞层及神经节细胞层上,,共聚焦显微镜观察发现Pr Pc主要定位于细胞膜上。3.实验组与对照组小鼠视网膜组织中内参因子β-actin均表达较稳定,证实本实验所用RT-PCR和Western Blot技术可靠,无明显操作误差;4.RT-PCR结果显示:阿尔茨海默病小鼠视网膜组织中Pr Pc基因表达水平较正常小鼠视网膜组织明显增强,差异均有显著的统计学差异(P0.05);Western blot结果显示:阿尔茨海默病小鼠视网膜组织中Pr Pc蛋白表达水平较正常小鼠视网膜组织明显增强,差异均有显著的统计学差异(P0.05)。结论:1.阿尔茨海默病小鼠视网膜和正常小鼠视网膜组织中均存在Pr Pc的表达,且阿尔茨海默病小鼠视网膜的Pr Pc基因和蛋白表达强度均明显强于正常视网膜组织。2.Pr Pc表达主要定位于视网膜内外丛状层、光感细胞层及神经节细胞层上,Pr Pc亚细胞定位于细胞膜上。3.阿尔茨海默病组小鼠视盘盘周神经上皮层厚度较正常组小鼠明显变薄。4.Pr Pc与阿尔茨海默病视网膜病变的发生存在相关性。
【关键词】：细胞型朊蛋白 阿尔茨海默病 视网膜组织 C57小鼠
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R749.16
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 前言10-13
• 第2章 材料与方法13-23
• 2.1 实验材料13-16
• 2.1.1 实验动物来源及鉴定13
• 2.1.2 实验动物分组13
• 2.1.3 实验主要试剂13-15
• 2.1.4 主要仪器与设备15-16
• 2.2 实验方法16-23
• 2.2.1 小鼠视网膜组织标本取材16
• 2.2.2 小鼠视网膜组织冰冻切片HE染色16-17
• 2.2.3 免疫荧光检测小鼠视网膜组织中Pr Pc蛋白表达17-18
• 2.2.4 RT-PCR观察小鼠视网膜组织中Pr Pc基因表达18-20
• 2.2.5 Western Blot检测小鼠视网膜组织中Pr Pc蛋白表达20-22
• 2.2.6 数据处理及统计学方法22-23
• 第3章 结果23-30
• 3.1 HE染色结果23
• 3.2.免疫荧光检测结果23-25
• 3.3 β-actin结果25-26
• 3.4 RT-PCR法检测结果26-27
• 3.5 Western blot法检测结果27-30
• 第4章 讨论30-34
• 4.1 朊蛋白的生物学特性30-31
• 4.2 朊蛋白相关疾病31-32
• 4.3 朊蛋白与阿尔茨海默病的相关性32-34
• 第5章 结论34-35
• 致谢35-36
• 参考文献36-41
• 攻读学位期间的研究成果41-42
• 综述42-51
• 参考文献47-51
• 本学期毕业博士、硕士研究生公开发表学术论文统计表51

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 周琼;刘章;陈娟;;细胞型朊蛋白在不同月龄小鼠视网膜中表达的实验研究[J];眼科新进展;2015年02期

2 刁小龙;吴润;;朊蛋白生理功能研究进展[J];生物技术通讯;2012年02期

3 薛海波;肖世富;孙云;张明园;;脑脊液生物学标志物诊断阿尔茨海默病与血管性痴呆[J];中国现代神经疾病杂志;2007年03期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 于惠敏;大鼠视盘周围神经纤维层厚度的光学相干断层扫描测量与组织学测量的相关性研究[D];中南大学;2012年

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本文编号：279135