反式阿魏酸对大鼠离体冠状动脉的舒张作用及机制探讨

发布时间：2017-04-02 02:02

  本文关键词：反式阿魏酸对大鼠离体冠状动脉的舒张作用及机制探讨，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:(1)观察反式阿魏酸(trans-Ferulic acid,1~3 mmol/L)对离体大鼠冠状动脉(rat coronary artery,RCA)静息张力的影响。(2)在离体RCA上,观察反式阿魏酸对KCl(60 mmol/L)、血栓素A2类似物U46619(1μmol/L)、内皮素-1(ET-1,0.01μmol/L)引起RCA收缩的抑制作用及舒张作用。(3)通过观察血管内皮、四种不同的选择性钾通道阻断剂(4-AP、Gli、Ba Cl2和TEA)、NOS抑制剂(L-NAME)、COX-2环氧合酶抑制剂(Indo)对反式阿魏酸舒张离体RCA的影响,并探讨其作用机制。(4)通过去钙-复钙的方法,探究反式阿魏酸舒张RCA与细胞外钙内流和内钙释放的关系。方法:(1)离体RCA的制作方法:将SD雄性青年大鼠(200~250g)麻醉后立即断头、取出心脏,置于4℃、p H 7.40、O2饱和的生理盐溶液(Physiological saline solution,PSS)中,并用若干大头针固定。在解剖显微镜下迅速钝性分离出冠状动脉的室间隔支、室壁支和前降支,剪成长度约为2mm,内径200~300μm的血管环,固定于微血管张力记录仪(Multi Myograph System-610M,DMT)。采用Power Lab微血管环张力系统记录不同浓度的反式阿魏酸(1,1.5,2,2.5,3 mmol/L)对离体RCA静息张力的影响,以KCl(60 mmol/L)所致离体RCA的最大收缩幅度为100%,计算加入上述浓度的反式阿魏酸后离体RCA静息张力的变化。(2)在DMT浴槽内加入KCl、U46619或ET-1,使其浴槽内终浓度分别为60mmol/L、1μmol/L、0.01μmol/L,预收缩离体RCA。当收缩曲线再次回到基线时,向浴槽中加入终浓度为1,1.5,2 mmol/L的反式阿魏酸,预孵15~20 min,分别以加入反式阿魏酸前KCl(60 mmol/L)、U46619(1μmol/L)或ET-1(0.01μmol/L)预收缩达到的最大收缩幅度为100%,计算加入上述浓度的反式阿魏酸后离体RCA的收缩百分比。(3)用KCl(60 mmol/L)、U46619(1μmol/L)或ET-1(0.01μmol/L)预收缩离体RCA达到坪台后,向内皮完整组和去内皮组分别累积加入反式阿魏酸(1,1.5,2,2.5,3 mmol/L)。以预收缩达到坪台时的收缩幅度为100%,计算加入上述浓度的反式阿魏酸后离体RCA的舒张百分比。(4)当KCl(60 mmol/L)、U46619(1μmol/L)或ET-1(0.01μmol/L)预收缩离体RCA达到坪台后,向浴槽中分别加入工具药—钾通道阻断剂(TEA、Gli、Ba Cl2、4-AP)、NOS抑制剂(L-NAME)和COX-2环氧合酶抑制剂(Indo),预孵15min后血管再次收缩达到坪台,累积加入反式阿魏酸(1,1.5,2,2.5,3 mmol/L)。以预收缩达到坪台时的收缩幅度为100%,观察加入工具药后反式阿魏酸对离体RCA舒张作用的变化,并计算其舒张百分比。(5)KCl(60 mmol/L)和U46619(1μmol/L)预收缩离体RCA达到坪台后,采用去钙-复钙的实验方法,以预收缩达到坪台时的收缩幅度为100%,记录预孵反式阿魏酸前后无钙液中KCl(60 mmol/L)和U46619(1μmol/L)的收缩幅度以及复钙(Ca Cl2 2.5 mmol/L)后的幅度变化。结果:(1)在静息状态时,反式阿魏酸(1,1.5,2,2.5,3 mmol/L)对离体RCA张力无明显影响。以KCl(60 mmol/L)所致离体RCA收缩的最大幅度为100%,随着浴槽内反式阿魏酸浓度的不断升高,血管环收缩百分比依次为(0.11±0.02)%、(0.14±0.09)%、(0.23±0.12)%、(0.37±0.15)%、(0.58±0.24)%,实验组与溶剂对照组相比,差异无统计学意义(P0.05)。(2)KCl(60 mmol/L)、U46619(1μmol/L)、ET-1(0.01μmol/L)预收缩离体RCA,最大收缩幅度分别是(2.69±0.16)m N、(4.48±0.42)m N、(6.74±0.35)m N。当预孵反式阿魏酸的浓度为1.5 mmol/L时,KCl、U46619、ET-1组的收缩幅度与溶剂对照组相比无显著性差异(P0.05);预孵浓度为2 mmol/L时,KCl、U46619、ET-1的最大收缩幅度分别降低了50.12%、43.38%和36.25%,与溶剂对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05);预孵浓度为2.5 mmol/L时,KCl、U46619、ET-1的最大收缩幅度分别降低了94.19%、95.97%和97.23%,与溶剂对照组相比,具有显著性差异(P0.05)。(3)反式阿魏酸(1,1.5,2,2.5,3 mmol/L)能够浓度依赖性地舒张内皮完整组和去内皮组离体RCA血管环。在内皮完整组与去内皮组之间,反式阿魏酸的舒张作用无显著性差异(P0.05)。反式阿魏酸舒张KCl、U46619或ET-1预收缩的离体RCA,最大舒张率分别为(98.39±2.92)%;(95.03±2.86)%;(91.58±2.10)%。(4)预孵TEA、Gli、Ba Cl2、L-NAME或Indo对反式阿魏酸引起的离体RCA舒张作用均无显著性影响(P0.05);但是预孵4-AP能使KCl(60 mmol/L)、U46619(1μmol/L)、ET-1(0.01μmol/L)预收缩离体RCA的最大舒张幅度分别降低了16.36%、20.46%和17.55%,与溶剂对照组相比,均具有统计学意义(P0.05)。(5)预孵反式阿魏酸(1,1.5,2 mmol/L)能够明显抑制KCl(60 mmol/L)在无钙PSS液中复钙后诱导的外钙依赖性血管收缩,收缩率分别为(58.35±1.61)%、(32.90±1.63)%、(2.95±0.59)%;能够抑制U46619(1μmol/L)在无钙PSS液中引起的一过性小幅度收缩(phasic收缩)以及复钙后的收缩(tonic收缩),收缩率分别为(69.35±1.52)%、(40.10±1.02)%、(6.74±0.36)%;(40.89±0.91)%、(13.74±0.43)%、(5.43±0.17)%。结论:(1)反式阿魏酸对静息状态的离体RCA无作用,但能够抑制KCl(60 mmol/L)、U46619(1μmol/L)、ET-1(0.01μmol/L)引起的收缩作用。(2)反式阿魏酸能够浓度依赖性的舒张KCl(60 mmol/L)、U46619(1μmol/L)、ET-1(0.01μmol/L)预收缩的离体RCA,其RCA血管舒张作用与内皮的完整性无关,也与NO及PGI2合成途径无关。(3)反式阿魏酸对离体RCA的舒张作用可能与激活血管平滑肌细胞上KV通道、抑制细胞内钙释放和外Ca2+内流有关,与KCa通道、KATP通道、KIR通道无关。
【关键词】：反式阿魏酸 RCA 舒张作用 电压依赖性钾通道 钙通道
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285
【目录】：

• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-13
• 常用缩写词中英文对照表13-14
• 前言14-16
• 1 材料与方法16-25
• 1.1 实验材料16-17
• 1.2 实验方法17-25
• 2 结果25-36
• 2.1 反式阿魏酸对离体大鼠冠状动脉静息状态及预收缩血管环张力的影响25-27
• 2.2 预孵反式阿魏酸对离体RCA收缩作用的影响27-29
• 2.3 内皮对反式阿魏酸舒张预收缩冠脉血管作用的影响及L-NAME和Indo对其舒张作用的干预29-30
• 2.4 预孵反式阿魏酸对外钙内流和内钙释放引起冠脉收缩的影响30-32
• 2.5 四种钾通道阻断剂对反式阿魏酸舒张KCl/U46619/ET-1 预收缩冠脉血管环作用的影响32-36
• 3 讨论36-39
• 4 结论39-40
• 参考文献40-43
• 综述43-53
• 参考文献49-53
• 致谢53-55
• 在学期间研究成果55-56
• 个人简历56

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本文编号：281661