亚麻醉剂量氯胺酮调控NMDA-NO信号通路在小鼠术后认知功能障碍机制中的研究

发布时间：2020-10-21 03:36

　　 目的:探究亚麻醉剂量氯胺酮调控的N-甲基-D-天冬氨酸受体一氧化氮(NMDA-NO)通路在小鼠术后认知功能障碍(POCD)中的作用机制。方法:30只昆明小鼠随机分为空白对照组(A组)、手术组(B组)、手术+亚麻醉剂量氯氨酮酮组(C组)三组,A组不做任何处理,B、C两组行左颈动脉分离术,C组术中腹腔注射亚麻醉剂量氯胺酮0.1mg,术毕缝合并消毒伤口,待小鼠完全清醒并可以自由活动后放回动物中心继续喂养,分别于术后第1d、3d、5d、7d进行水迷宫实验。另30只昆明小鼠以同样分的组和实验处理进行操作,于术后九小时断头取海马组织,制得海马匀浆,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测NMDAR1、NMDAR2A和NMDAR2B蛋白的表达情况,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组小鼠海马匀浆中炎性因子TNF-α和IL-6的表达,免疫组化(IHC)分析NMDAR2B阳性表达强度同时进行蛋白定位以及用一氧化氮合酶试剂盒检测各组小鼠海马匀浆中一氧化氮合酶(NOS)的相对活力。结果:免疫组化镜下结果显示,A组NMDAR2B蛋白染色较深呈中等阳性(++),B组NMDAR2B蛋白染色很深呈强阳性(+++),C组NMDAR2B蛋白染色很浅呈弱阳性(+)。另外观察到NMDAR2B蛋白主要集中在海马CA1区表达且三组小鼠表达差异有统计学意义,而在CA3区的表达三组小鼠无明显差异。B组小鼠潜伏期于术后第1d、3d明显延长(63.54±32.25比15.42±7.47、35.37±39.34,51.5±25.36比13.1±6.15、25.8±34.53,均P0.01),A、C两组潜伏期差别无统计学意义。B组小鼠目标象限百分比于术后第1d明显降低(21.94±9.64比37.51±9.52、48.47±20.32,P0.01)。C组小鼠海马匀浆中IL-6、TNF-α含量明显降低[IL-6(ng/ml):1.95±0.95比2.06±0.46、5.36±0.49,TNF-α(pg/ml):21.84±6.54比25.73±13.84、94.48±35.72,均P0.05)]。Western Blot结果提示:C组小鼠海马的匀浆中NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B的蛋白表达量和NOS相对活力均较空白对照组和手术组明显降低,C组小鼠NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B的蛋白灰度值比分别较手术组降低(1.39±0.23)、(2.32±3.13)、(3.24±0.46)倍,NOS的相对活力RFU值较手术组降低(2.99±1.96)倍,较空白对照组降低(1.11±1.17)倍,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:亚麻醉剂量氯胺酮能拮抗NMDA受体,抑制NOS活性,减少信号通路下游的炎症因子释放,从而降低POCD的发病率。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R614
【部分图文】：

图 2-1 一氧化氮合酶活性检测原理图【49】(Fig.2-1) Nitric oxide synthase activity detection principle试剂的准备ADPH 溶液的配制首先往 NADPH 粉剂里加入 1 毫升的 Milli-Q 级纯水，轻匀，由此而得到 2.5mM 的 NADPH 溶液。将配制好的溶如果在当日实验不使用的溶液请及时放于-70℃保存。最M 的 NADPH 溶液用 NOS 检测缓冲液稀释五倍，最终可以ADPH 溶液以备后续实验使用。OS 检测缓冲液的配制将 NOS 检测缓冲液（2X）稀释一倍，即加入等体积的 M吹打，充分混匀，便可以得到所需要的 NOS 检测缓冲液

亚麻醉剂量氯胺酮调控NMDA-NO信号通路在小鼠术后认知功能障碍机制中的研究 2015级硕士研究生毕业论文三、实验结果1.各组小鼠术后七天水迷宫（Morris Maze）变化趋势B 组小鼠的潜伏期在术后第 1、第 3 天明显延长，此后又逐渐降低；目标象限百分比在术后的第 1、第 3 天明显降低，此后逐渐增加，与 A 组和 C组的小鼠结果相比较差异具有统计学意义（P<0.05）；A 组和 C 组小鼠术后 7 天的潜伏期及目标象限百分比比较差异无统计学意义（P>0.05），结果见图 3-1。

各组小鼠NMDAR2B的IRS评分(Fig.3-2)IRSscoresofmouseNMDAR2Bineachgroup
【参考文献】

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5 刘春华;林霓阳;;谷氨酸受体联合拮抗在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的全脑保护机制研究[J];汕头大学医学院学报;2014年03期

6 胡维;周明全;谭祖键;贾小林;甘强;;高龄髋部骨折患者术后谵妄的高危因素分析[J];创伤外科杂志;2014年04期

7 陈晨;田乃元;吴旭;;氯胺酮导致小鼠认知功能障碍及其与NMDA表达的研究进展[J];实用药物与临床;2014年05期

8 万利芹;陈宇;周巧林;;亚麻醉剂量氯胺酮临床应用的研究进展[J];齐齐哈尔医学院学报;2014年01期

9 孙剑冰;;氯胺酮(K粉)引发泌尿系损害的诊治方法及可能机制[J];内蒙古中医药;2013年12期

10 张晓栋;朴美花;王艳姝;冯春生;;亚麻醉剂量氯胺酮与右美托咪定对老年骨科全麻患者早期术后认知功能障碍的影响[J];吉林大学学报(医学版);2013年01期

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2 刘英涛;一种NMDA受体显像剂—~（99）Tc~m-N-ethyl-N_2S_2-Memantine的研究[D];江南大学;2010年

3 朱耀祖;氯胺酮对构建6-OHDA诱导的帕金森氏病大鼠模型的影响机制研究[D];华中科技大学;2010年

4 贺海霞;NMDA谷氨酸受体NR1亚基在大鼠前庭终器的表达[D];华中科技大学;2008年

本文编号：2849585