新型两亲性低分子量硫酸软骨素的制备及其抑制ApoE -/- 小鼠动脉粥样硬化斑块形成的研究

发布时间：2020-12-05 20:36

　　研究目的硫酸软骨素（chondroitin sulfate, CS）是一类硫酸化的糖胺聚糖,存在于细胞表面和哺乳动物的细胞外基质中,主要分布于软骨、骨、肌腱、神经组织和血管壁中。CS的基本结构是由D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖以1,3糖苷键连接形成的二糖,二糖之间以β-1,4糖苷键连接而成。CS具有抗炎、免疫调节、心脑血管保护、神经保护、抗氧化、细胞黏附调节等多种药理生理学活性与功能,且长期服用毒副作用小或无毒副作用。在欧洲、美国、东南亚、澳大利亚等国家,CS主要作为膳食补充剂或药品,用于心脑血管疾病、骨关节炎等疾病的预防与治疗。但是,由于其分子量大、亲水基团多、脂溶性差,体内吸收不完全,口服生物利用度低；在CS治疗心脑血管疾病的研究中,其降脂、抗动脉粥样硬化（AS）的疗效和量效关系以及其抑制斑块性的分子机制都尚不明确。为了解决这些问题,本研究拟对CS结构进行修饰改造,采用降低分子量、增加亲脂基团、构建两亲性纳米粒子等方法来改善其口服吸收效果,然后通过整体动物法筛选出肠道吸收效果好的CS衍生物,并采用Caco-2细胞模型对其促肠道吸收作用机制进行探讨；构建ApoE-/-小鼠AS... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：160 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 前言
    1. 硫酸软骨素概述
        1.1 CS在治疗炎症疾病方面的研究应用
        1.2 CS在抗氧化方面的应用
        1.3 CS在免疫调节方面的研究应用
        1.4 CS在治疗心脑血管疾病方面的研究应用
    2. 硫酸软骨素存在的问题及改进方法
        2.1 多糖类药物口服给药运载体系的构建
        2.2 多糖类药物化学结构改造
    3. 两亲性多糖口服给药系统的研究现状
    4 课题的提出和研究思路
第二章 两亲性α-亚麻酸-低分子量硫酸软骨素的合成及性能表征
    1 实验材料
        1.1 试剂与材料
        1.2 仪器设备
        1.3 细胞
        1.4 溶液配制
    2 实验方法
        2.1 α-LNA-LMCS的制备
        2.2 α-LNA-LMCS纳米胶束的制备
        2.3 红外光谱（FT-IR）表征
1HNMR）">        2.4 核磁共振氢谱表征（¹HNMR）
        2.5 热分析表征（TGA/DSC）
        2.6 粒径分布和Zeta电势测定
        2.7 α-LNA-LMCS纳米胶束表面形态观察
        2.8 临界聚集浓度的测定
        2.9 纳米胶束的Caco-2细胞及HT29细胞毒性试验
    3 实验结果
        3.1 CS的纯化
        3.2 α-LNA-LMCS的制备
        3.3 α-LNA取代度（DS）的测定
        3.4 热差-热重分析（TGA/DSC）
        3.5 α-LNA-LMCS胶束的粒径和Zeta电位
        3.6 α-LNA-LMCS胶束的形态观察
        3.7 α-LNA-LMCS胶束的临界胶束浓度（CMC）
        3.8 CS及其衍生物的Caco-2细胞及HT29细胞毒性试验
    4 讨论
    5 结论
第三章 大鼠血浆中硫酸软骨素含量测定方法的建立
    1 实验材料
        1.1 试剂与材料
        1.2 仪器设备
        1.3 实验动物
        1.4 溶液配制
    2 实验方法
        2.1 标准曲线的绘制
        2.2 DMMB法测定血浆中CS的含量
        2.3 精密度实验
        2.4 回收率实验
        2.5 提取回收率实验
        2.6 LMCS及α-LNA-LMCS提取回收率实验
    3 实验结果
        3.1 标准曲线的绘制
        3.2 精密度
        3.3 回收率
        3.4 提取回收率
        3.5 LMCS及α-LNA-LMCS的提取回收率
    4 讨论
    5 结论
第四章 α-LNA-LMCS肠道吸收效果及作用机制研究
    1 实验材料
        1.1 试剂与材料
        1.2 仪器设备
        1.3 实验动物及细胞
        1.4 溶液配制
    2 实验方法
        2.1 CS及其衍生物的大鼠体内药物动力学研究
        2.2 CS及其衍生物在Caco-2细胞模型上的摄取、转运及其机制探讨
        2.3 CS及其衍生物对Caco-2单层细胞膜电阻的影响
        2.4 α-LNA-LMCS跨膜转运机制研究
    3 实验结果
        3.1 CS及其衍生物的大鼠体内药物动力学研究
        3.2 CS及其衍生物的跨膜转运实验
        3.3 CS及其衍生物对Caco-2细胞模型跨膜电阻TEER的影响
        3.4 α-LNA-LMCS跨膜转运机制研究
    4 讨论
    5 结论
-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成的实验研究">第五章 LNA-LMCS2抑制ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化斑块形成的实验研究
    1 实验材料
        1.1 试剂与材料
        1.2 仪器设备
        1.3 实验动物
        1.4 溶液配制
    2 实验方法
        2.1 实验动物的饲养、分组以及标本的留取
        2.2 血脂水平的检测
        2.3 ELISA法测定血浆中TNF-α、CRP、IL-6水平
        2.4 real-time PCR步骤
        2.5 主动脉表面AS病变大体油红O染色
        2.6 主动脉根部AS病灶分析
-/-小鼠主动脉ERK1/2、p-ERK1/2、t-JNK、p-JNK、NF-κB、p-NF-κB、VCAM-1、MCP-1和ICAM-1的表达">        2.7 Western blot测定ApoE^-/-小鼠主动脉ERK1/2、p-ERK1/2、t-JNK、p-JNK、NF-κB、p-NF-κB、VCAM-1、MCP-1和ICAM-1的表达
    3 实验结果
        3.1 体重及血液生化指标检测
        3.3 AS病变严重程度分析
        3.4 荧光定量PCR技术分析各组小鼠主动脉炎性因子mRNA的表达变化
        3.5 Western blot法分析各组小鼠主动脉炎症相关蛋白表达的变化
    4 讨论
    5 结论
总结与展望
    1. 全文总结
    2. 创新点
    3. 论文的不足之处
    4. 展望
参考文献
致谢
博士期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]黄鳝骨硫酸软骨素多糖降血脂功能研究[J]. 姚晓燕.  中国医药导报. 2011(30)
[2]亚麻籽中α-亚麻酸的保健功能及提取技术[J]. 吴素萍.  中国酿造. 2010(02)
[3]软骨多糖对荷瘤小鼠体液免疫功能的影响[J]. 张国蓉,张程,刘安军,车伟.  现代食品科技. 2009(05)
[4]鲨鱼软骨素联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察[J]. 刘克为,迟·依荷巴丽,吕静.  中国肿瘤临床与康复. 2009(02)
[5]心脑血管疾病的预防[J]. 田凤华.  中国自然医学杂志. 2008(03)
[6]咔唑法测定鲨鱼硫酸软骨素含量的方法学研究[J]. 傅应华.  中国生化药物杂志. 2007(01)
[7]大分子药物肠道吸收促进剂的研究进展[J]. 林晓,徐德生,冯怡.  中国药学杂志. 2003(10)
[8]天青A分光光度法测定硫酸软骨素含量的研究[J]. 高贵珍,焦庆才,丁一磊,陈雷.  光谱学与光谱分析. 2003(03)
[9]NF-κB的活性和iNOS基因表达在低氧性肺动脉高压中的变化[J]. 敖启林,熊密,郝春荣,王迪浔.  中国病理生理杂志. 2002(08)
[10]补体旁路激活对内皮细胞表达IL-8的影响[J]. 汪正清,郝进,鲜尽红,黎庶.  中国病理生理杂志. 2002(06)

硕士论文
[1]鲨鱼硫酸软骨素及其多硫酸化衍生物抗炎和抗肿瘤活性的研究[D]. 林洪.山东大学 2006



本文编号：2900053