急性大鼠脊髓损伤的蛋白组学初步研究

发布时间：2017-04-07 17:23

  本文关键词：急性大鼠脊髓损伤的蛋白组学初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：【目的】通过比较裂解液法、TCA-丙酮法和酚抽提取法提取大鼠脊髓蛋白的效率,选择最适合的大鼠脊髓蛋白提取方法;研究大鼠急性脊髓损伤前后差异表达的蛋白质,分析这些蛋白质生物学功能,为更加深入的了解脊髓损伤后复杂的病生理过程提供理论依据。【材料和方法】本实验提取正常雌性Wistar大鼠T10前后1cm的脊髓组织,分别采用裂解液提取法、TCA-丙酮提取法和酚抽提取法提取脊髓蛋白,通过比较Bradford法测量蛋白质的浓度,SDS-PAGE电泳和双向电泳分析提取蛋白的种类和数量,选择适合大鼠脊髓蛋白提取的最佳方案。成年雌性大鼠9只,随机分成3组,每组3只。对照组不进行脊髓打击,仅采用同等剂量进行麻醉,椎板切除后直接取材。实验组采用IMPACTOR MODEL-Ⅱ打击器建立T10脊髓损伤模型(打击力度为10g×25mm),根据取材时间的不同分成3h组和8h组。采用已经建立的大鼠脊髓蛋白提取方案提取蛋白,通过双向电泳技术分离各组提取的蛋白;采用PDQuest软件分析和比较对照组和实验组的胶图,寻找上调或者下调差异表达的蛋白;采用MALDI-TOF/TOF对这些蛋白质进行肽质量指纹图谱和二级质谱鉴定;通过NCBI和Uni Prot KB数据库对这些蛋白进行亚细胞定位和功能注解;STRING软件对差异蛋白进行通路分析。根据已建立的大鼠脊髓蛋白提取方案提取对照组,3h组和8h组蛋白质,通过Western Blot技术对已鉴定的关键差异蛋白进行验证。【结果】1.与裂解液法和酚抽提取法相比,TCA-丙酮提取法提取蛋白在SDS-PAGE电泳上有更多清晰的条带,在双向电泳上有这更多的蛋白斑点,所以本实验采用TCA-丙酮提取法为最佳大鼠脊髓蛋白提取方法。2.实验组和对照组相比,共有30个差异表达的蛋白。包括9个代谢相关蛋白,6个氧化应激蛋白,5个神经纤维束蛋白,3个骨架蛋白,3个能量相关酶,1个细胞转导蛋白,3个其它。其中11个上调,19个下调。3.GFAP蛋白在损伤后3h表达明显下降,8h表达量开始回升,与双向电泳的实验结果相符。结论本研究发现TCA-丙酮蛋白提取法最适合大鼠脊髓蛋白提取,应用蛋白组学技术筛选急性大鼠脊髓损伤前后的蛋白,绘制差异表达的蛋白谱,寻找潜在的与脊髓损伤相关的特异分子标志物和探索脊髓损伤后复杂级联病生理机制,为将来进一步脊髓损伤的治疗提供可靠的实验依据。
【关键词】：脊髓损伤 蛋白提取 蛋白组学 wistar大鼠 GFAP
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R651.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-15
• 研究现状、成果11-14
• 研究目的、方法14-15
• 一、大鼠脊髓蛋白提取方法的选择15-27
• 1.1 对象和方法15-22
• 1.1.1 实验材料15-18
• 1.1.2 实验方法18-22
• 1.2 结果22-25
• 1.2.1 三种提取方法的蛋白浓度22
• 1.2.2 三种提取方法的SDS-PAGE结果分析22-23
• 1.2.3 三种提取方法的双向电泳图结果23-25
• 1.3 讨论25-26
• 1.4 小结26-27
• 二、急性大鼠脊髓损伤后蛋白组学研究27-40
• 2.1 对象和方法27-29
• 2.1.1 实验材料27
• 2.1.2 实验方法27-29
• 2.2 结果29-37
• 2.2.1 不同时间点的双向电泳图29-31
• 2.2.2 差异蛋白的质谱鉴定31-35
• 2.2.3 差异蛋白的分类35-37
• 2.3 讨论37-39
• 2.4 小结39-40
• 三、GFAP表达的Western blot组学研究40-45
• 3.1 对象和方法40-42
• 3.1.1 实验材料40-41
• 3.1.2 实验方法41-42
• 3.2 结果42-43
• 3.3 讨论43-44
• 3.4 小结44-45
• 结论45-46
• 参考文献46-54
• 发表论文和参加科研情况说明54-55
• 附录55-62
• 综述 脊髓损伤的蛋白质组学研究进展62-72
• 综述参考文献67-72
• 致谢72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 徐蓉;卢明;;铜及铜锌超氧化物歧化酶对神经保护作用的研究进展[J];国际神经病学神经外科学杂志;2011年05期

  本文关键词：急性大鼠脊髓损伤的蛋白组学初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：290969