不同照射方式下核黄素-A波紫外线交联作用对兔巩膜成纤维细胞MMP-2表达及生物力学变化影响的研究

发布时间：2017-04-07 21:26

  本文关键词：不同照射方式下核黄素-A波紫外线交联作用对兔巩膜成纤维细胞MMP-2表达及生物力学变化影响的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：旨在研究不同照射方式的核黄素A-波紫外线兔巩膜胶原交联实验对兔巩膜成纤维细胞MMP-2表达及细胞生物力学性能的影响,及两种照射方式是否对视网膜造成损伤。方法：将新西兰白兔24只随机分为A、B两组,选取左眼选为实验眼,右眼选为对照眼,麻醉后分离左眼的内外直肌间的球结膜和筋膜,以暴露鼻上方巩膜。在该处巩膜滴加0.1%5-磷酸核黄素5分钟后,用波长为370nm的紫外线的照射,A组照射时间为30分钟,功率为3.0mW/cm2,B组照射时间为9分钟,功率为10.0mW/cm2。术后1周进行全视野视网膜电流图(full-field electroretinogram f-ERG)检测。术后60天,处死实验兔后取实验眼交联部位及对照眼相应部位的巩膜组织提取并培养巩膜成纤维细胞,用免疫细胞化学法鉴定成纤维细胞后,进行细胞微管吸吮实验及MMP-2蛋白表达的western blot实验。实验数据采用SPSS 17.0软件进行分析,t检验,P0.05为有统计学意义。结果：1兔f-ERG检查结果视网膜电流图表明,A、B两组的左(交联眼)右眼(对照眼)间,暗应3.0及明适应3.0的振幅、潜伏期均无统计学差异(P0.05)。2巩膜成纤维细胞免疫细胞化学鉴定结果组织培养法提取的巩膜细胞免疫组织化学法的鉴定法显示：细胞Vimentin染色呈阳性,胞浆内可见清晰的棕黄色阳性反应产物,Desmin染色呈阴性,keratin染色呈阴性,S-100染色也呈阴性,上述观察结果表明所提取并培养的细胞为巩膜成纤维细胞。3巩膜成纤维细胞微管吸吮本实验采用微管吸吮技术测量不同照射方式下,巩膜细胞的杨氏模量、表观粘性发现：A、B两组实验眼(左眼)巩膜细胞的杨氏模量、表观粘性均分别与各自对照眼(右眼)巩膜细胞的杨氏模量、表观粘性有显著统计学差异(P0.05),而A、B两组实验眼间、及对照眼间巩膜细胞的杨氏模量、表观粘性差异无统计学意义(P0.05)。以上结果表明,交联术后巩膜细胞的粘弹性发生了明显的变化,具体表现为粘弹性显著升高。而两种照射方式,巩膜细胞的粘弹性没有显著性的差异。4巩膜成纤维细胞MMP-2的表达经过对所提取并培养的巩膜成纤维细胞中MMP-2的western bolt实验结果显示：A组左眼(照射时间为30分钟,功率为3.0mW/cm2)及B组左眼(照射时间为9分钟,功率为10.0mW/cm2)提取的巩膜成纤维细胞MMP-2表达明显高于两组对照眼提取的巩膜成纤维细胞中MMP-2的表达。对于两种不同的照射方式,A组左眼(照射时间为30分钟,功率为3.0mW/cm2)巩膜成纤维细胞MMP-2的表达显著高于B组左眼(照射时间为9分钟,功率为10.0mW/cm2)巩膜成纤维细胞MMP-2的表达。而A、B两组右眼(对照眼)巩膜成纤维细胞中MMP-2的表达未见明显差异。经图像分析软件扫描,及统计学计算,A、B两组左眼(交联眼)巩膜成纤维细胞中MMP-2的表达量分别为各自组对照眼的1.8倍和1.3倍,差异具有显著性(t检验,P=0.001,0.032)；A、B两组交联眼之间比较,巩膜成纤维细胞中MMP-2的表达量差异具有显著意义(t检验,P=0.041)；而A、B两组右眼(对照眼)间比较,巩膜成纤维细胞MMP-2的表达未见显著性差异(t检验,P0.05)。结论：1核黄素A-波紫外线兔巩膜胶原交联实验中,选用两种不同的照射方式,对视网膜功能均无影响,具有较好的安全性。2两种不同的照射方式,均能使巩膜成纤维细胞的生物力学性能发生显著增强,而两种照射方式之间并未见明显的差别。3两种不同的照射方式均可使巩膜成纤维细胞中基质金属蛋白酶MMP-2的表达量显著升高,并且A、B两组交联眼巩膜成纤维细胞间存在显著性差异,一定程度上可以说明这两种不同的照射方式影响巩膜细胞基质代谢的程度有所不同。
【关键词】：核黄素 A-波紫外线巩膜胶原交联 全视野视网膜电流图 巩膜 成纤维细胞 微管吸吮 MMP-2 western blot
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R778.11
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-11
• 材料与方法11-18
• 结果18-20
• 附图20-27
• 附表27-29
• 讨论29-34
• 结论34
• 参考文献34-39
• 综述 核黄素A-波紫外线巩膜胶原交联治疗高度近视可行性的思考39-48
• 参考文献44-48
• 致谢48-49
• 个人简历49

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本文编号：291359