基于UPLC/QTOF-MS技术的丹蛭降糖胶囊防治2型糖尿病血管病变的代谢组学研究
发布时间：2021-01-05 12:08
目的:丹蛭降糖胶囊（DJC）是安徽中医药大学第一附属医院内分泌科的临床经验方,本课题在前期实验研究的基础上,通过建立2型糖尿病血管病变大鼠模型,对丹蛭降糖胶囊主要药效学指标进行考察;同时,运用UPLC/QTOF-MS现代技术来研究丹蛭降糖胶囊干预4周后,大鼠尿液、血清代谢图谱的变化,获得相应代谢谱并对其进行模式识别和解析,鉴定可能的潜在生物标志物,研究丹蛭降糖胶囊防治糖尿病血管病变的物质基础以及作用机制,为创新中药复方制剂的研究方法进行积极探索。方法:1、雄性SD大鼠,高脂饲料喂养4周,按35mg/kg剂量,腹腔注射链脲佐菌素（STZ）（0.1mmo L/L柠檬酸缓冲液溶解,p H=4.2）。3天后,以随机血糖≥16.7mmo L/L为标准,筛选2型糖尿病血管病变模型大鼠。造模成功后,灌胃给药丹蛭降糖胶囊,连续给药4周,每周尾静脉取血检测血糖。给药2周时,各组随机选择大鼠6只,腹腔注射3.5%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血5.0m L于肝素抗凝管中。给药4周后,大鼠禁食12h,处死,麻醉腹主动脉取血。动态观察给药2周和4周时的指标物质的含量变化。采集得到的血液,静置2h后,离心取血浆。用双...
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各组HE染色切片结果（×400）
大小来衡量变量对分类的重要程度。VIP 值越大，对应变量对分类的贡越大。本实验选择 VIP 值>1 量及 P<0.05 对应的成分作为差异性生物标。通过 Human Metabolome Database 和 Kegg Compound Database 数据相应标记物的结构鉴定。3 实验结果3.1 系统稳定性以确保保留时间、m/z 的稳定性和质量精度，在 UPLC/QTOF-MS 检程中，随行 QC 检验，每检测 6 个样本，选择进 1 次混合样本（混合样指每个生物样本中取出等份样本混匀后制成的样本，其与待测样本代组成相近）[32]。图 2 为正负离子模式下系统稳定性检测结果，如图所示负离子模式下，系统在检测过程中稳定，得到的检测数据可靠。
3.2 尿液样品的 UPLC/QTOF-MS 分析所有采集的尿液样本经预处理后，用 UPLC/QTOF-MS 进行分离和原始数据的采集，数据采集采用 Masslynx4.1 数据管理软件。并对原始数据进行预处理，包括峰挑选、峰对齐、去噪音、生成标志物表过程。3.2.1 总离子流图样本用正负两种离子模式进行扫描，得到总离子流图，图 3 和图 4 分别为正负离子模式下的总离子流图。正常组大鼠的正离子模式下总离子流图在峰的数量和峰面积方面与模型组大鼠不同。丹蛭降糖胶囊干预后，给药组总离子流图和模型组存在明显差异，与正常组更加接近（见图 3）。正常组、模型组和丹蛭降糖胶囊组的负离子模式下总离子流图在 3 至 7 分钟期间的峰形和峰数量方面存在一定差异（见图 4），说明三组尿液中的内源性代谢物存在显著差异。
【参考文献】：
期刊论文
[1]五味子治疗大鼠糖尿病肾病作用机制的血清代谢组学研究[J]. 皮子凤,门丽慧,张静,周园,宋凤瑞,刘志强. 分析化学. 2015(02)
[2]迈康片对高脂血症大鼠血管保护的作用机制研究[J]. 雷晓林,彭菊,李俊葵,房淼,刘伟. 中国实验方剂学杂志. 2015(02)
[3]中药药效物质基础研究的系统方法学——中医方证代谢组学[J]. 王喜军. 中国中药杂志. 2015(01)
[4]代谢组学方法鉴定大黄对高脂血症大鼠的治疗作用尿液生物标示物[J]. 苗华,张旭. 西北大学学报(自然科学版). 2014(06)
[5]GC/TOF-MS代谢组学技术研究雷公藤甲素在大鼠体内的急性毒性[J]. 邵凤,刘林生,阿基业. 中国药科大学学报. 2014(06)
[6]疏肝健脾方对CCl4诱导的肝纤维化大鼠尿液代谢组学的影响[J]. 姜辉,吴芙蓉,高家荣,陈金锋. 中成药. 2014(12)
[7]丹蛭降糖胶囊治疗2型糖尿病血管病变的作用机制研究[J]. 高家荣,庄星星,魏良兵,韩燕全. 中药药理与临床. 2014(06)
[8]糖尿病血管病变的分子机制研究进展[J]. 闫双群,肖乐,薛双亮,龚昆梅. 陕西医学杂志. 2014(12)
[9]灵芝多糖联合二甲双胍对糖尿病大鼠胸主动脉晚期糖基化终末产物与结缔组织生长因子的干预作用[J]. 乔进,窦志华,吴锋,陈惠,郑惠华. 中草药. 2014(20)
[10]灵芝多糖对糖尿病大鼠胸主动脉氧化应激的影响[J]. 冯艳,乔进,陈惠,郑惠华. 药学与临床研究. 2014(05)
博士论文
[1]麻黄—白术药对主要化学成分、药效及尿液代谢物研究[D]. 邢学锋.南方医科大学 2013
本文编号：2958635
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
各组HE染色切片结果（×400）
大小来衡量变量对分类的重要程度。VIP 值越大，对应变量对分类的贡越大。本实验选择 VIP 值>1 量及 P<0.05 对应的成分作为差异性生物标。通过 Human Metabolome Database 和 Kegg Compound Database 数据相应标记物的结构鉴定。3 实验结果3.1 系统稳定性以确保保留时间、m/z 的稳定性和质量精度，在 UPLC/QTOF-MS 检程中，随行 QC 检验，每检测 6 个样本，选择进 1 次混合样本（混合样指每个生物样本中取出等份样本混匀后制成的样本，其与待测样本代组成相近）[32]。图 2 为正负离子模式下系统稳定性检测结果，如图所示负离子模式下，系统在检测过程中稳定，得到的检测数据可靠。
3.2 尿液样品的 UPLC/QTOF-MS 分析所有采集的尿液样本经预处理后，用 UPLC/QTOF-MS 进行分离和原始数据的采集，数据采集采用 Masslynx4.1 数据管理软件。并对原始数据进行预处理，包括峰挑选、峰对齐、去噪音、生成标志物表过程。3.2.1 总离子流图样本用正负两种离子模式进行扫描，得到总离子流图，图 3 和图 4 分别为正负离子模式下的总离子流图。正常组大鼠的正离子模式下总离子流图在峰的数量和峰面积方面与模型组大鼠不同。丹蛭降糖胶囊干预后，给药组总离子流图和模型组存在明显差异，与正常组更加接近（见图 3）。正常组、模型组和丹蛭降糖胶囊组的负离子模式下总离子流图在 3 至 7 分钟期间的峰形和峰数量方面存在一定差异（见图 4），说明三组尿液中的内源性代谢物存在显著差异。
【参考文献】：
期刊论文
[1]五味子治疗大鼠糖尿病肾病作用机制的血清代谢组学研究[J]. 皮子凤,门丽慧,张静,周园,宋凤瑞,刘志强. 分析化学. 2015(02)
[2]迈康片对高脂血症大鼠血管保护的作用机制研究[J]. 雷晓林,彭菊,李俊葵,房淼,刘伟. 中国实验方剂学杂志. 2015(02)
[3]中药药效物质基础研究的系统方法学——中医方证代谢组学[J]. 王喜军. 中国中药杂志. 2015(01)
[4]代谢组学方法鉴定大黄对高脂血症大鼠的治疗作用尿液生物标示物[J]. 苗华,张旭. 西北大学学报(自然科学版). 2014(06)
[5]GC/TOF-MS代谢组学技术研究雷公藤甲素在大鼠体内的急性毒性[J]. 邵凤,刘林生,阿基业. 中国药科大学学报. 2014(06)
[6]疏肝健脾方对CCl4诱导的肝纤维化大鼠尿液代谢组学的影响[J]. 姜辉,吴芙蓉,高家荣,陈金锋. 中成药. 2014(12)
[7]丹蛭降糖胶囊治疗2型糖尿病血管病变的作用机制研究[J]. 高家荣,庄星星,魏良兵,韩燕全. 中药药理与临床. 2014(06)
[8]糖尿病血管病变的分子机制研究进展[J]. 闫双群,肖乐,薛双亮,龚昆梅. 陕西医学杂志. 2014(12)
[9]灵芝多糖联合二甲双胍对糖尿病大鼠胸主动脉晚期糖基化终末产物与结缔组织生长因子的干预作用[J]. 乔进,窦志华,吴锋,陈惠,郑惠华. 中草药. 2014(20)
[10]灵芝多糖对糖尿病大鼠胸主动脉氧化应激的影响[J]. 冯艳,乔进,陈惠,郑惠华. 药学与临床研究. 2014(05)
博士论文
[1]麻黄—白术药对主要化学成分、药效及尿液代谢物研究[D]. 邢学锋.南方医科大学 2013
本文编号：2958635
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