基于PI3K/AKT信号通路的电针傍剌促进皮肤创伤修复的作用机制研究

发布时间：2021-01-08 03:12

　　目的：明确电针傍刺促进小鼠皮肽创伤组织愈合的作用；阐明电针傍刺对皮肤创伤修复促进作用的调控机制。方法：本研究采用小鼠背部皮肤切除伤模型,将C57BL／6小鼠随机分为正常组,模型组、电针傍刺组、电针抑制剂组,抑制剂组五组。每组干预前,先给予碘伏消毒。模型组只给予碘伏常规治疗；电针治疗组,模型处理后即开始给予电针傍刺治疗；电针方法：造模后当日即开始针刺；针刺前稍给异氟烷吸入麻醉,然后将动物固定于针刺操作台上,选取创面中心和正常皮肽距离创面边缘0.5cm处各一点给予毫针（0.20mm×13mm）针刺并连接微电流电刺激仪（MICRO PlUSTM,BioMedical Life Systems,Inc）,正极在外,负极在内,采用电流500 1a A,频率0.5Hz,持续30分钟,每日1次。电针抑制剂组和抑制剂组,造模前及每次电针治疗前,给予腹腔注射PI3K特异性阻断剂WOrtmannin 1.4mg.kg-1[1-4].实验一,我们用求积仪透绘法检测了模型组、电针傍刺组、电针抑制剂组皮肤创伤小鼠在1d,3d,7d,10d,14d时的愈合率；并记录、比较了创面愈合时间；实验二,对五组皮肤创伤小鼠... 

【文章来源】：黑龙江中医药大学黑龙江省

【文章页数】：100 页

【学位级别】：博士

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缩略语表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文献综述
    1 皮肤创伤修复的研究进展
        1.1 现代医学关于皮肤创伤修复的研究进展
            1.1.1 皮肤的构造及功能
            1.1.2 皮肤创伤修复的病理生理学
            1.1.3 皮肤创伤修复的分子生物学
            1.1.4 现代医学对创伤的治疗
        1.2 中医学对于皮肤创伤修复的研究进展
            1.2.1 中医学关于皮肤创伤修复认识的历史沿革
            1.2.2 皮肤创伤修复的中医治疗研究进展
    2 PI3K/AKT信号通路的研究进展
        2.1 PI3K/AKT信号通路总述
        2.2 PI3K/AKT信号通路各信号分子的结构与作用
        2.3 PI3K/AKT信号通路抑制剂
        2.4 PI3K/AKT信号通路与损伤修复血管再生的关系
实验一 电针对皮肤创伤愈合率和愈合时间的观察
    1 实验材料
        1.1 主要材料及试剂
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 主要实验试剂
        1.2 主要仪器设备
    2 实验方法
        2.1 动物分组情况
        2.2 动物造模方法
        2.3 动物电针傍刺治疗方法
        2.4 透绘法求积仪测定皮肤创伤愈合率
        2.5 皮肤创伤愈合时间的测定
    3 统计学处理
    4 实验结果
        4.1 皮肤创伤愈合率变化
        4.2 皮肤创伤愈合时间变化
    5 实验小结
实验二 电针影响皮肤损伤组织eNOS,p-caspase-9表达的免疫组化实验
    1 材料
        1.1 主要材料及试剂
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 实验试剂
        1.2 主要仪器设备
    2 实验方法
        2.1 动物造模方法
        2.2 实验动物分组及取材
        2.3 PV两步法免疫组化法检测
    3 统计学处理
    4 实验结果
        4.1 小鼠皮肤创缘组织中eNOS的表达
        4.2 小鼠皮肤创缘组织中p-caspase-9的表达
    5 实验小结
实验三 电针傍刺对皮肤创伤组织Akt,eNOS,caspase-9mRNA表达的影响
    1 实验材料
        1.1 主要材料及试剂
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 实验试剂
        1.2 主要仪器设备
    2 实验方法
        2.1 实验动物造模方法
        2.2 实验动物分组情况
        2.3 提取总RNA
        2.4 引物设计
        2.5 逆转录反应
        2.6 Real-time PCR反应
    3 数据处理
    4 统计分析
    5 实验结果
        5.1 小鼠皮肤创缘组织中Akt mRNA的表达
        5.2 小鼠皮肤创缘组织中eNOS mRNA的表达
        5.3 小鼠皮肤创缘组织中caspase9 mRNA的表达
    6 实验小结
实验四 电针傍刺对皮肤创伤组织Akt,p-Akt,eNOS,p-CASPASE9蛋白表达的影响
    1 实验材料
        1.1 主要材料及试剂
            1.1.1 实验动物
            1.1.2 实验试剂
        1.2 主要仪器设备
    2 实验方法
        2.1 动物造模
        2.2 分组情况
        2.3 溶液的配置
        2.4 提取蛋白样品
        2.5 检测样品蛋白浓度
        2.6 SDS-PAGE电泳
        2.7 转膜
        2.8 免疫反应
        2.9 化学发光压片曝光
        2.10 数据处理
    3 统计学处理
    4 实验结果
        4.1 小鼠皮肽创缘组织中p-Akt,Akt蛋白的表达
        4.2 小鼠皮肤创缘组织中eNOS蛋白的表达
        4.3 小鼠皮肤创缘组织中p-caspase9蛋白的表达
    5 实验小结
讨论
    1. 选题依据
    2. 傍刺法对皮肤创伤愈合的影响
    3. 电刺激参数的选择
    4. 实验动物及造模方法的选择
    5. 研究成果
    6. 不足与展望
结论
参考文献
个人简历
致谢



本文编号：2963792