结节乳状体核在丙泊酚麻醉意识消失和恢复中的作用研究

发布时间：2021-01-19 20:57

　　目的:丙泊酚是广泛应用于临床的静脉麻醉药,是一种GABA_A型受体激动剂,但导致意识消失的确切机制仍未阐明。研究与我们的前期工作发现,丙泊酚麻醉致意识消失和恢复与睡眠-觉醒的过程有一定相似性。结节乳状体核（Tuberomammillary Nucleus,TMN）是睡眠-觉醒环路中的主要组成部分,也是大脑中组胺的唯一来源。组胺的分泌受GABA调控,同时反馈抑制GABA的释放。故本课题旨在研究TMN组胺神经元在丙泊酚麻醉致意识消失和恢复中的作用。方法:1、筛选腹腔注射丙泊酚的最佳剂量:随机选取42只野生型C57小鼠,采用50、60、70、80、90、100（mg/kg）的剂量进行丙泊酚腹腔注射,筛选出小鼠腹腔注射产生翻正反射消失（Loss of right reflex,LORR）的最佳剂量;2、建立损毁模型进行行为学和脑电图检测:将42只野生型C57小鼠随机分为药物损毁组（Saporin）、生理盐水组（NS）和空白对照组（Control）,n=14,采用脑区微注射的方法在前两组小鼠两侧TMN分别注射药物（Orexin2R-Saporin,250ng/μl）或生理盐水... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：41 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

结节乳状体核的神经投射[10]

图 2 滚筒试验小鼠发生 LORR 示意图1.4.2 TMN 脑区微注射模型的建立制备微量注射针：用拉制仪拉制前端尖细的玻璃电极，将整根玻璃电极和0.5 μl 的微量注射针内灌满液体石蜡，将微量注射针插入玻璃电极内，用热熔胶枪进行密封。剪掉玻璃电极前端约 2 mm，确定整个注射针通畅且密闭性良好。将小鼠随机分成三组：药物损毁组（Saporin）、生理盐水组（NS）和空白对照组（Control）,n=14。用 10%的水合氯醛（4 ml/kg）腹腔注射麻醉后，固定于小鼠立体定位仪上。将红霉素眼膏涂抹于眼球表面，以避免强光损害。头皮表面消毒后，头皮下注射利多卡因，5 分钟后剪开头皮，暴露颅骨表面。确定 Bregma（B）点和 Lambda（λ）点位置，进行前后调平和左右调平（高度相差＜0.02mm）。根据第二版小鼠解剖图谱（Paxinos and Watson《The Mouse Brain in StereotaxicCoordinates》），TMN 选取坐标（-2.70 mm，±1.10 mm,-5.25 mm），前额叶皮层(Cg2)

图 3 脑区微注射位置示意图注：左图为解剖图谱示意图：红色区域代表 TMN 位置，黑色加粗实线代表进针位置；图为小鼠微注射示意图。1.4.3 行为学和脑电图记录行为学 LORR 采用腹腔注射测量，药物经腹腔注射后放入滚筒， RORR 则采用尾静脉单次注射丙泊酚进行测量，给药后小鼠很快进入麻醉状态，记录此时到 RORR 的时间。记录流程如图 4 和图 5。分别记录丙泊酚麻醉下三组小鼠的脑电图，从 LORR 到 RORR，采用 CEDPower1401 收集脑电信号，滤波范围（0.1 Hz – 0.1 kHz, gain: 1000 ×），用 Spike 2软件处理分析 EEG 数据。


本文编号：2987700