益气养阴清热利湿方对IgA肾病大鼠肾脏组织NF-κB和MCP-1的影响

发布时间：2017-04-16 11:14

  本文关键词：益气养阴清热利湿方对IgA肾病大鼠肾脏组织NF-κB和MCP-1的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过构建Ig A肾病大鼠模型,予以益气养阴清热利湿方进行干预,观察Ig A肾病大鼠病理组织的变化,检测24小时尿蛋白定量、肾功能,用免疫组化法、RT-PCR法测定核因子-κB(NF-κB)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在大鼠肾脏组织中的表达,探求益气养阴清热利湿方治疗Ig A肾病的作用机制,为临床治疗Ig A肾病提供新的思路和方法。方法:雄性6周龄SD大鼠,40只,健康、清洁,重量在140~160g左右,在温度:20℃~24℃,相对湿度:40%-60%的环境中,适应性饲养7天,第7天末检测尿蛋白阴性、潜血阴性者,依据体重随机分为4组:正常组:10只、模型组10只、贝那普利组10只、益气养阴清热利湿组10只。正常组予蒸馏水灌胃,以4ml/kg计算,隔日1次,连用6周;皮下注射蓖麻油0.6 ml,1次/周,连用9周;于第6、8周末Na Cl注射液注入尾静脉,每只用量0.2ml。模型组、贝那普利组、益气养阴清热利湿组均用浓度为100 g/L免疫原BSA灌胃,每只大鼠用量以400mg/kg(4ml/kg)计算,连用6周;0.1ml CCl4+0.5ml蓖麻油皮下注射,1次/周,连用9周;于第6、8周末用浓度为0.25g/L脂多糖注射液注入尾静脉,每只注射0.05mg(0.2ml)。第10周起开始给药,益气养阴清热利湿组用益气养阴清热利湿中药药液灌胃,贝那普利组用贝那普利混悬液灌胃,正常组、模型组用纯净水灌胃,用药8周。分别于造模前、第7、第9、第13、第17周末检测24h尿蛋白定量。18周末将大鼠禁食水12h,称重,按照3.50ml/kg用量将10%水合氯醛注入腹腔,进行麻醉,于腹主动脉取血,测定肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平。观察大鼠肾组织病理变化。分别用免疫组化法、RT-PCR法测定NF-κB、MCP-1在肾组织的表达情况。结果:1 24h尿蛋白定量24h尿蛋白定量:用药干预后,于第17周末,两个治疗组(即贝那普利组与益气养阴清热利湿组)间相比较,无显著性差异(P0.05)。两治疗组与模型组进行比较,尿蛋白均明显降低,有显著性差异(P0.05)。2肾功能正常组、模型组及两治疗组(贝那普利组与益气养阴清热利湿组)之间差异均不明显(P0.05)。3肾组织病理改变光学显微镜观察:在正常组,大鼠肾小球结构完整;在模型组观察到系膜细胞增生、系膜基质增多;两治疗组(即贝那普利组、益气养阴清热利湿组)大鼠系膜细胞轻度增生和系膜基质增多,相对于模型组,病变减轻。免疫荧光观察:主要观察免疫复合物沉积在大鼠肾小球系膜区有无沉积。正常组大鼠肾小球系膜区未见免疫复合物沉积,在模型组观察到有荧光绿色免疫复合物沉积,两治疗组(即贝那普利组、益气养阴清热利湿组)大鼠也有不同程度的免疫复合物沉积,但较模型组减轻。4免疫组化染色法检测,NF-κB、MCP-1在肾脏组织的表达NF-κB阳性表达情况:正常组弱,其余三组明显增强(P0.05);相对于模型组,两治疗组(即贝那普利、益气养阴清热利湿组)表达减弱(P0.05);贝那普利组、益气养阴清热利湿组两治疗组间相比较,无明显差异(P0.05)。MCP-1阳性表达情况:正常组弱,其余三组明显增强(P0.05);模型组高于两治疗组(即贝那普利组、益气养阴清热利湿组),差异明显(P0.05);贝那普利组、益气养阴清热利湿组两治疗组间相比较,无明显差异(P0.05)。通过免疫组化法检测发现,NF-κB与MCP-1在肾组织的表达呈正相关。5 RT-PCR法检测,NF-κB、MCP-1在肾脏组织的表达相对于正常组,模型组、两治疗组(即益气养阴清热利湿组与贝那普利组)大鼠NF-κB、MCP-1在肾脏组织的表达均明显增强(P0.05);与模型组比较,益气养阴清热利湿组、贝那普利组两治疗组大鼠NF-κB、MCP-1在肾脏组织的表达均减弱(P0.05);但益气养阴清热利湿组与贝那普利组进行组间比较,无明显差异(P0.05)。RT-PCR法检测结果显示,NF-κB与MCP-1在肾组织的表达呈正相关。结论:1益气养阴清热利湿方能明显降低Ig A肾病大鼠的尿蛋白,进而保护肾功能;2益气养阴清热利湿方能改善Ig A肾病大鼠肾组织的病理损伤情况,延缓Ig A肾病的进展;3益气养阴清热利湿方可能通过降低NF-κB、MCP-1在Ig A肾病大鼠肾脏组织的表达,降低炎症反应,进而防止肾小球系膜增生、系膜硬化、基质沉积,延缓Ig A肾病的发展。
【关键词】：IgA肾病 核因子-κB 单核细胞趋化蛋白-1 益气养阴清热利湿 动物模型 系膜增生
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文缩写11-12
• 前言12-13
• 材料与方法13-19
• 结果19-22
• 附图22-32
• 附表32-34
• 讨论34-40
• 结论40
• 参考文献40-44
• 综述 中医对IgA肾病的认识与研究现状44-52
• 参考文献50-52
• 致谢52-53
• 个人简历53

【参考文献】

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本文编号：310693