中药肾络通对UUO大鼠肾小管上皮细胞表型转化机制的研究

发布时间：2017-04-16 13:03

  本文关键词：中药肾络通对UUO大鼠肾小管上皮细胞表型转化机制的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察单侧输尿管结扎(UUO)模型大鼠肾小管上皮细胞表型转化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)的表达,检测与其调控相关的信号通路因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、核因子-κB(nuclear factor,NF-κB)的改变,探讨益气活血通络中药肾络通抑制UUO大鼠肾小管上皮细胞表型转化的作用及机制,为该方的临床应用提供实验依据。方法:选用健康雌性清洁级Wistar大鼠48只,体重180±20克,实验动物自由进食和饮水,温度条件控制在(22±2)℃。适应性饲养1周后,48只大鼠随机分为假手术组(Sham group)、UUO组(UUO group)、依普利酮组(EPL group)、肾络通组(SLT group),每组12只。各组大鼠UUO造模方式如下:10%水合氯醛注射麻醉后,于左侧中腹部切开皮肤,游离左侧输尿管,分别在输尿管上1/3处和中1/3处用丝线结扎,随后切断输尿管,逐层缝合皮肤。假手术组仅将输尿管游离但不结扎离断。术后开始给药,依普利酮组以100 mg/(kg.d)依普利酮药物加入饲料中;肾络通组以肾络通煎剂26g/(kg.d)入水瓶饮用,假手术组及UUO组给予等容量生理盐水饮用,均每天1次。连续干预10天。10天后,各组大鼠称重后断头处死,留取血液标本,备检;切取梗阻侧肾脏,除去被膜后称重,部分肾组织置于4%多聚甲醛固定,部分肾组织-70℃保存用于提取RNA及蛋白。免疫组化及Western Blot方法检测TNF-α、NF-кB、α-SMA的表达。结果:1各组大鼠一般情况比较假手术组大鼠一般情况良好:每日饮食、饮水量稳定,体重逐步增长,毛发有光泽,活动敏捷,对外界刺激反应灵敏。UUO组动物的进食量、饮水量、体重均有所下降,与UUO组相比,依普利酮组及肾络通组大鼠梗阻侧肾重、肾重/体重明显下降(P0.01,P0.05)。2各组大鼠肾组织病理形态学改变HE染色显示,假手术组结构正常,肾小管上皮细胞排列整齐,肾间质有少量炎性细胞浸润;UUO组肾小管明显扩张,肾间质大量炎性细胞浸润,上皮细胞变性、浊肿、坏死、脱落;肾络通组及依普利酮组亦可见肾小管扩张及上皮细胞变性坏死等,但炎性细胞浸润明显减少。Masson染色显示,假手术组可见少量胶原成分表达,主要位于肾小球、肾间质及肾小管基底膜;UUO组肾脏结构紊乱,肾间质胶原成分明显增多;肾络通组及依普利酮组与假手术组相比胶原纤维显著增多,但较UUO组显著减少。3免疫组化检测各组大鼠TNF-α、NF-кB、α-SMA表达检测TNF-α、NF-κB表达,结果显示假手术组TNF-α、NF-κB呈弱表达,主要见于肾小管上皮细胞;UUO组表达明显增强;依普利酮组及肾络通组表达范围及强度较UUO组均明显减弱。假手术组检测α-SMA显示假手术组仅在血管有阳性表达;UUO组表达明显增强,见于肾小管上皮细胞及肾间质;依普利酮组及肾络通组表达较假手术组增强但明显弱于UUO组。4肾组织TNF-α的m RNA表达Real time-PCR测定TNF-αm RNA表达结果显示,与假手术组比较,UUO组中TNF-αm RNA表达明显增强;与UUO组相比,依普利酮组与肾络通组均明显下调。5 Western Blot检测各组大鼠TNF-α、NF-кB、α-SMA表达采用Western Blot方法检测TNF-α、NF-кB信号通路,结果显示UUO组TNF-α、NF-кB蛋白表达明显上调,差异有统计学意义(P0.01);与UUO组比较,依普利酮组及肾络通组表达均下调,差异有统计学意义(P0.01)。检测α-SMA的表达,结果显示UUO组表达显著上调,与假手术组比较,有显著差异(P0.01);依普利酮组及肾络通组α-SMA表达较假手术组增强但明显弱于UUO组。结论:1梗阻性肾病可诱导炎性介质的分泌,刺激肾小管上皮细胞表型转化,参与肾间质纤维化的形成。2依普利酮通过阻断醛固酮的作用,可减轻梗阻性肾病导致的肾脏损伤。3肾络通抑制肾小管上皮细胞表型转化减缓肾间质纤维化的进展,其机制与下调TNF-α、NF-κB的表达有关。
【关键词】：中药 肾间质纤维化 肾小管上皮细胞表型转化 炎性介质 肿瘤坏死因子-α 核因子-κB α-平滑肌肌动蛋白
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-15
• 1 材料12-13
• 2 方法13-15
• 结果15-18
• 1 各组大鼠一般情况比较15-16
• 2 各组大鼠肾组织病理形态学改变16
• 3 免疫组化检测各组大鼠 α-SMA、TNF-α、NF-κB(p65)表达16
• 4 Real time -PCR 测定 TNF-α m RNA 表达16
• 5 Western Blot 检测各组大鼠 TNF-α、NF-кB、α-SMA 表达16-18
• 附图18-24
• 附表24-25
• 讨论25-33
• 结论33
• 参考文献33-39
• 综述 肾小管上皮细胞表型转化的研究进展39-53
• 参考文献45-53
• 致谢53-55
• 个人简历55-56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 许庆友;韩琳;秦建国;丁英钧;盖银玲;王月华;潘莉;谷艳丽;张磊磊;王筝;;赵玉庸“肾络瘀阻”病机学说及临床应用[J];中华中医药杂志;2010年05期

2 闫U

本文编号：310855