Erk 1/2/CREB/BDNF信号通路在右美托咪定减轻异丙酚诱导原代海马神经元毒性中的作用

发布时间：2021-07-12 16:36

　　目的:研究Erk 1/2/CREB/BDNF信号通路在右美托咪定减轻异丙酚诱导神经元毒性中的作用。方法:体外培养原代海马神经元至第8天（DIV 8）,随机分为C组、I组、DMSO组、P组（100μM异丙酚组）、D组（10μM右美托咪定组）、PD组（10μM右美托咪定+100μM异丙酚组）、PDP组（25μM PD98059+10μM右美托咪定+100μM异丙酚组）、HDP组（10μM H89+10μM右美托咪定+100μM异丙酚组）和KDP组（25μM KG501+10μM右美托咪定+100μM异丙酚组）。C组、I组、DMSO组和D组细胞分别用新鲜培养基、脂肪乳剂、0.25%DMSO或10μM右美托咪定孵育;P组细胞用100μM异丙酚孵育3 h;PD组细胞先用10μM右美托咪定预孵育30 min后,再加入异丙酚至终浓度为100μM,继续孵育3 h;PDP组,HDP组和KDP组细胞先分别用25μM PD98059（p-Erk1/2抑制剂）、10μM H89（p-CREB抑制剂）或25μM KG501（CREB抑制剂）预孵育30min后,再加入右美托咪定至终浓度为10μM孵育30 min,... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

海马神经元培养Figure1-2Primaryhippocampalneuronculture

图 2-1 实验分组以及干预方法Figure 2-1 Experimental groups and processing.2.4 CCK-8 检测海马神经元生长曲线将海马神经元细胞以 1 ~ 2×106的密度接种于包被有 L-左旋多聚赖氨酸的 96 孔板中，200 μl / 孔，分别设 6 个复孔。采用 CCK-8 的方法检测细胞活力，接种后每 2 d 测定一次吸光度（OD），记录至第 16 天。（1）在每孔更换 200 μl 新鲜维持培养基后加入 10 μl 的 CCK-8 反应液，然后将 96 孔板放回含恒温培养箱中继续培养 1 ~ 4 h；（2）用酶标仪检测 450 nm 下的 OD 值；（3）以 OD 值为纵轴，培养时间为横轴，绘制生长曲线。2.5 CCK-8 检测细胞活力（1）将海马神经元以 1 ~ 2×106的密度接种于包被过 L-左旋多聚赖

图 3-1 光镜下海马神经元培养形态学变化Figure 3-1 Changes in the morphology of primary hippocampal neurons viewed underlight microscope.2 免疫细胞化学结果免疫细胞化学鉴定结果显示，镜下海马神经元胞体饱满，且有典型的轴突和树突出并形成一定的突触连接；神经元胞体，树突和轴突染成棕色，而相应的阴性对组未见相应的免疫反应。通过计算 10 个视野内海马神经元阳性细胞数得到纯度为95.2 ± 3.6％，表明海马神经元培养成功（见图 3-2）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]异丙酚对胎鼠离体海马神经元钙离子浓度和NF-κB活性的影响[J]. 陈静,利莉,梁羽冰,谢玉波.  中华麻醉学杂志. 2014 (03)



本文编号：3280267