生长抑素减轻小鼠胰岛移植过程中胰腺外分泌细胞对移植胰岛损伤的研究

发布时间：2017-04-26 18:06

  本文关键词：生长抑素减轻小鼠胰岛移植过程中胰腺外分泌细胞对移植胰岛损伤的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分小鼠胰岛分离、纯化及功能检测目的：分离纯化小鼠胰岛。方法：采用胆总管逆行灌注胶原酶的方法来分离纯化小鼠胰岛,同时使用双硫腙、台盼蓝以及葡萄糖刺激实验来检验胰岛的功能。结果：每只小鼠可获150左右个胰岛,活性及纯度都大于90%。葡萄糖刺激实验表明胰岛功能正常。结论：采用课题组已经成熟的实验方法,可以获得高纯度、功能良好的胰岛。第二部分糖尿病小鼠左肾被膜下胰岛细胞与胰腺外分泌细胞共同移植动物模型的建立目的：建立糖尿病小鼠左肾被膜下同种异体胰岛细胞与胰腺外分泌细胞共同移植动物模型及探讨胰腺外分泌细胞对胰岛移植物的损伤作用。方法：链脲佐菌素腹腔注射诱导BALB/C小鼠成为糖尿病小鼠。单纯移植组(n=1O)每只小鼠于左肾被膜上极移植胰岛细胞250个,共同移植组(n=1O)每只小鼠于左肾被膜上下极同时移植胰岛细胞250个和等体积的胰腺外分泌细胞,持续观测血糖及生命体征变化,1个月后切除左肾并继续检测血糖。结果：(1)胰岛移植后,单纯移植组及共同移植组血糖均逐步降至正常,共同移植组较单纯移植组血糖恢复正常时间延迟,移植术后第2、3、4、5d,单纯移植组受鼠血糖低于共同移植组,差异有统计学意义(P0.05)切除两组受鼠左肾3d后,两组受鼠血糖均21mmol/L。结论：(1)成功建立糖尿病小鼠左肾被膜下同种异体胰岛细胞与胰腺外分泌细胞共同移植动物模型。(2)胰腺外分泌细胞与胰岛细胞同时移植会延迟植入胰岛功能恢复正常的时间。第三部分：生长抑素减轻小鼠胰岛移植过程中胰腺外分泌细胞对移植胰岛损伤的研究目的：探讨生长抑素如何减轻胰腺外分泌细胞对移植胰岛的损伤及其机制。方法：(1)体外实验：选取20只雄性BALB/C小鼠,随机分为实验组(n=10)和对照组(n=10),麻醉前30分钟实验组按10ug/g腹腔注射生长抑素,对照组注射等量的生理盐水,然后分别收集两组小鼠的胰腺外分泌细胞及胰岛细胞,流式细胞仪检测两种细胞凋亡情况。(2)体内实验：链脲佐菌素腹腔注射诱导BALB/C小鼠成为糖尿病小鼠。实验组(n=20)和对照组(n=20)分别于小鼠左肾被膜上下级同时移植250个胰岛和等体积的胰腺外分泌细胞,术后实验组按10ug/g, tid,腹腔注射生长抑素28天,对照组注射等量生理盐水28天,同时两组小鼠分别按5ug/g, qd,腹腔注射EDU28天,移植术后8天实验组和对照组小鼠分别进行IPGTT实验,移植术后10天及28天两组各随机选取10只小鼠分别切除左肾,免疫组织化学法检测左肾包膜下抗淀粉酶抗体的表达,免疫荧光染色法检测移植胰岛β细胞增殖情况,并继续检测血糖。结果：(1)流式检测结果显示实验组小鼠胰腺外分泌细胞凋亡率明显高于对照组(P0.05),胰岛细胞凋亡率较对照组没有明显差别(P0.05),(2)胰岛移植后,两组小鼠血糖均降至正常,对照组较实验组血糖恢复正常时间延迟(P0.05),对照组的血糖平均水平明显高于实验组；IPGTT实验结果显示移植物血糖调节功能正常；术后10天实验组和对照组移植物周围均可见抗淀粉酶抗体阳性颗粒,但实验组阳性颗粒数较对照组减少(P0.05),免疫荧光检测显示实验组移植胰岛Insulin+/EDU+β细胞数较对照组明显增多(P0.05)。术后28天,实验组抗淀粉酶抗体阳性颗粒数较对照组明显减少(P0.05),但各组数量与移植术后10天相比均无明显差别(P0.05),实验组增值的β细胞数仍明显高于对照组(P0.05),但与移植术后10天相比,各组增殖率均降低(P0.05)。结论：(1)生长抑素可以诱导小鼠胰岛移植过程中损伤的胰腺外分泌细胞凋亡,而对胰岛细胞凋亡没有影响。(2)移植术后早期(10天之内),生长抑素可以明显抑制胰腺外分泌细胞胰淀粉酶的分泌,促进胰岛p细胞增殖,10天至28天,生长抑素仍可抑制胰腺外分泌细胞胰淀粉酶的分泌,但对胰岛β细胞增殖没有影响,(3)在胰岛移植过程中使用生长抑素可以减轻小鼠胰腺外分泌细胞对移植胰岛的损伤。
【关键词】：小鼠 分离 纯化 胰岛 胰岛细胞 胰腺外分泌细胞 糖尿病 共同移植 生长抑素 胰腺外分泌细胞 胰岛移植 凋亡
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R657.5
【目录】：

• 个人简历3-7
• 中文摘要7-11
• 英文摘要11-15
• 前言15-17
• 第一部分：小鼠胰岛分离、纯化及功能检测17-27
• 材料与方法17-23
• 结果23-25
• 讨论25-26
• 结论26-27
• 第二部分：糖尿病小鼠左肾被膜下胰岛细胞与胰腺外分泌细胞共同移植动物模型的建立27-40
• 材料与方法27-32
• 结果32-35
• 讨论35-39
• 结论39-40
• 第三部分：生长抑素减轻小鼠胰岛移植过程中胰腺外分泌细胞对移植胰岛损伤的研究40-52
• 材料与方法40-45
• 结果45-49
• 讨论49-51
• 结论51-52
• 参考文献52-54
• 英文缩略词一览表54-55
• 综述55-64
• 参考文献60-64
• 致谢64-65
• 在校期间发表的有关论文65-66
• 附件66-69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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  本文关键词：生长抑素减轻小鼠胰岛移植过程中胰腺外分泌细胞对移植胰岛损伤的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：328955