无创肢体缺血预处理延迟相中心肌差异表达蛋白质的分离和鉴定

发布时间：2017-04-29 18:06

  本文关键词：无创肢体缺血预处理延迟相中心肌差异表达蛋白质的分离和鉴定，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：【目的】采用同位素相对标记与绝对定量(isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation,i TRAQ)技术来研究无创肢体缺血预处理(Noninvasive Limb Ischemic Preconditioning,NLIP)延迟相阶段心肌全部蛋白质表达谱的变化,观察NLIP延迟相对正常大鼠心肌蛋白质表达的影响,探索NLIP内源性效应的分子机制。【方法】将12只雄性SD大鼠随机分入预处理组(NLIP组)和对照组(C组),每组6只。NLIP组用橡皮筋环扎大鼠右后肢根部,阻断血流5min,开放再灌注5min,共循环3次,建立NLIP模型;C组大鼠麻醉后不作预处理。于NLIP延迟相即24小时后,分别取两组大鼠左心室心尖部组织50-100mg,液氮保存。每组6个样本取等质量混合为一个起始材料进行蛋白抽提。采用i TRAQ技术经蛋白酶解、肽段标记、高PH反向分离、反向液相色谱串联质谱分析等步骤检测NLIP组和C组蛋白表达谱的差异。质谱分析数据用Mascot搜索引擎在Uniprot数据库进行肽段和蛋白质的鉴定。用Protein Pilot软件对报告离子峰强度值进行计算得出蛋白质的定量信息。以组间表达差异Ratio1.2或Ratio1/1.2(0.833)且统计学P-Value0.05为标准筛选差异表达蛋白。利用基因本体论(Gene Ontology,GO)数据库分析差异表达蛋白的生物学功能,用Wolfpsort软件预测差异表达蛋白的亚细胞结构定位。最后用Western blot验证部分差异表达蛋白在两组样本中的表达水平。【结果】经i TRAQ检测和数据库搜索,共鉴定得到3280个蛋白质,其中55个蛋白质被认定为显著差异表达蛋白。NLIP组与C组相比,表达上调的蛋白有35个,表达下调的蛋白有20个。通过对差异表达蛋白的GO注释及亚细胞结构定位分析发现,这些蛋白主要存在细胞质、细胞核及线粒体中,广泛参与代谢、生物调节、应激反应及信号传导等过程,具有分子结合、催化、抗氧化及调节酶活性等功能。对差异表达蛋白ACOX1、PDK4和PRDX2的Western blot检测证实其蛋白表达趋势与i TRAQ相对定量结果基本一致,均在NLIP组中表达上调。【结论】NLIP延迟相中大鼠心肌蛋白质表达谱发生了改变,对差异表达蛋白质的功能分析提示NLIP的延迟相效应可能与这些蛋白质改善能量代谢、调节氧化应激水平、参与基因表达调控及蛋白质折叠与降解等过程有关。
【关键词】：肢体缺血预处理 i TRAQ 蛋白质组学 GO分析
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R654.2
【目录】：

• 英文缩略语4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-23
• 结果23-32
• 讨论32-42
• 结论42-43
• 参考文献43-54
• 综述54-79
• 参考文献66-79
• 致谢79

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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  本文关键词：无创肢体缺血预处理延迟相中心肌差异表达蛋白质的分离和鉴定，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：335340