噻拉嗪对大鼠脑神经系统PKA、ERK1/2/CREB/BDNF信号通路影响的研究

发布时间：2022-10-04 18:23

　　本试验以雄性Wistar大鼠为研究对象,给予噻拉嗪麻醉,通过测定大鼠不同脑区不同麻醉时期的PKA、ERK1/2/CREB/BDNF信号通路中的相关蛋白及基因表达的变化,探讨噻拉嗪麻醉的作用机理。试验选取35只雄性Wistar大鼠,分成对照组（C）和麻醉组（X）,麻醉组又被随机分为6组（n=5）:诱导组（X1）、翻正反射消失0 min组（X2）、翻正反射消失30 min组（X3）、翻正反射消失60 min组（X4）、翻正反射恢复0 min组（X5）和翻正反射恢复30 min组（X6）。对照组大鼠在注射生理盐水8 min后,麻醉组在注射噻拉嗪（70 mg/kg）各个时间点之后,立即断头处死大鼠并取脑组织,利用RT-PCR方法检测GluR1、GluR2、ERK1/2、PKC、PKA、CREB、c-jun、c-fos、fos-B和BDNF的mRNA表达;Western blot方法检测GluR1、GluR2、ERK1/2/p-ERK1/2、PKA/p-PKA、PKC/p-PKC、CREB/p-CREB和BDNF的蛋白表达。利用ATP酶试剂盒测定ATP酶的活性,通过ELISA试剂盒测定cAMP的... 

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 噻拉嗪的概述
        1.1.1 噻拉嗪的镇静、镇痛作用
        1.1.2 噻拉嗪的麻醉作用
        1.1.3 噻拉嗪复合麻醉剂的应用
    1.2 动物全身麻醉
        1.2.1 全身麻醉概念
        1.2.2 全身麻醉的研究进展
        1.2.3 全身麻醉对神经系统的作用
        1.2.4 全麻药与相关信号通路的关系
    1.3 CREB信号通路与麻醉
        1.3.1 GluR1、GluR2与麻醉的关系
        1.3.2 ATP酶与麻醉的关系
        1.3.3 cAMP与麻醉的关系
        1.3.4 ERK1/2与麻醉的关系
        1.3.5 PKC与麻醉的关系
        1.3.6 PKA与麻醉的关系
        1.3.7 CREB与麻醉的关系
        1.3.8 c-fos、c-jun和fos-B与麻醉的关系
        1.3.9 BDNF与麻醉的关系
    1.4 试验目的及意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验动物
        2.1.2 试验仪器设备
        2.1.3 试验试剂和药品
    2.2 试验方法
        2.2.1 试验技术路线图
        2.2.2 噻拉嗪麻醉剂量的确定
        2.2.3 试验动物分组
        2.2.4 脑组织采集
        2.2.5 PC12细胞的培养
        2.2.6 细胞中噻拉嗪给药剂量的测定
        2.2.7 细胞转染
        2.2.8 ATP酶活性检测
        2.2.9 cAMP含量的测定
        2.2.10 实时定量PCR
        2.2.11 蛋白免疫印迹技术
        2.2.12 数据分析统计
3 结果
    3.1 噻拉嗪麻醉大鼠最佳剂量的筛选
    3.2 细胞中噻拉嗪给药剂量的筛选
    3.3 噻拉嗪麻醉对大鼠不同脑区内ATP酶活性的影响
        3.3.1 对大鼠不同脑区Na~+-K~+-ATP酶活性的影响
        3.3.2 对大鼠不同脑区Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性的影响
    3.4 噻拉嗪麻醉对大鼠不同脑区内cAMP含量的影响
    3.5 噻拉嗪对大鼠同脑区基因表不达的影响
        3.5.1 对大脑内基因表达水平的影响
        3.5.2 对小脑内基因表达水平的影响
        3.5.3 对海马内基因表达水平的影响
        3.5.4 对丘脑内基因表达水平的影响
        3.5.5 对脑干内基因表达水平的影响
    3.6 对PC12细胞内基因表达水平的影响
    3.7 噻拉嗪麻醉对大鼠不同脑区内蛋白表达的影响
        3.7.1 对大脑内蛋白表达水平的影响
        3.7.2 对小脑内蛋白表达水平的影响
        3.7.3 对海马内蛋白表达水平的影响
        3.7.4 对丘脑内蛋白表达水平的影响
        3.7.5 对脑干内蛋白表达水平的影响
    3.8 对PC12细胞内相关蛋白表达的影响
4 讨论
    4.1 噻拉嗪麻醉对ATP酶活性的影响
        4.1.1 对大鼠不同脑区内Na~+-K~+-ATP酶活性的影响
        4.1.2 对大鼠不同脑区内Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性的影响
    4.2 噻拉嗪麻醉对大鼠不同脑区内cAMP含量的影响
    4.3 噻拉嗪麻醉对相关信号通路的影响
        4.3.1 对GluR1和GluR2的影响
        4.3.2 对ERK1/2的影响
        4.3.3 对PKA的影响
        4.3.4 对PKC的影响
        4.3.5 对CREB的影响
        4.3.6 对c-jun、c-fos和fos-B的影响
        4.3.7 对BDNF的影响
5 结论
致谢
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]七氟醚对老龄大鼠海马CaMKⅡ/CREB信号通路的影响[J]. 王莹,王晓冬,王彩霞,邱颐.  中华麻醉学杂志. 2017 (02)
[2]p-ERK1/2在17β雌二醇抑制丙泊酚致新生大鼠海马神经细胞凋亡中的作用[J]. 吴晓倩,李建立,容俊芳.  中华麻醉学杂志. 2017 (02)
[3]有氧运动调节APP/PS1小鼠海马CaMKⅡα、AMPAR活性,增加突触可塑性[J]. 於来康,顾博雅,李岩,赵丽.  北京体育大学学报. 2017(01)
[4]氯胺酮与咪达唑仑对巴马猪脑组织cAMP信号通路的影响[J]. 陈蕊,师铭咸,郭岑,曹馨方,张宇,周彤,李欣然,于东旭,魏成威,高利.  中国兽医杂志. 2016(10)
[5]Anesthesia-induced neurotoxicity in an animal model of the developing brain:mechanism and therapies[J]. Maiko Satomoto,Koshi Makita.  Neural Regeneration Research. 2016(09)
[6]鹿复合麻醉剂对大鼠小脑和海马突触体Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的影响[J]. 李虹瑾,付连军,王秋竹,沙万里,李雨航,郑洪娟,尹柏双.  畜牧与兽医. 2016(06)
[7]鹿特异性复合麻醉剂对大鼠大脑皮层Na+-K+-ATP酶活性的影响[J]. 冯雪,付连军,林博,常乃元,李京乘,李闻轩,尹柏双.  湖北农业科学. 2016(04)
[8]间隔联合应用BAM8-22增强慢性吗啡抑制c-Fos表达的作用[J]. 江剑平,付艳,胡粉娟.  福建师范大学学报(自然科学版). 2015(04)
[9]温胆汤含药血清对谷氨酸条件下原代星形胶质细胞P38MAPK及PKC的影响[J]. 刘丹丹,魏妍妍,熊怀亮,戎文娟,朱金华,万红娇.  中药药理与临床. 2015(01)
[10]噻拉嗪对山羊不同脑区ATP酶活性的影响[J]. 高利,张宇,魏成威,刘子睿,吴越,于东序,刘沫,姜仁礼,李欣然,王冠颖.  中国兽医杂志. 2014(11)

博士论文
[1]SIRT1-p53、cAMP/CREB信号通路参与老年大鼠吸入麻醉致学习与记忆损害的机制研究[D]. 熊万霞.复旦大学 2014
[2]采用遗传药理学方法激活中脑多巴胺神经元导致DAT-Cre小鼠高活动性的研究[D]. 王淑杰.吉林大学 2013

硕士论文
[1]小鼠脑缺血后血脑屏障通透性的改变对小胶质细胞的影响[D]. 成晓峰.兰州大学 2017
[2]丁香酚对鲤鱼中枢神经NO-cGMP等信号转导影响的研究[D]. 孙文渊.贵州大学 2015
[3]氯氮平与利培酮对精神分裂症患者社会认知的影响[D]. 赵彩荣.安徽医科大学 2013
[4]右美托咪定在高血压脑出血术后镇静的应用[D]. 阎龙.吉林大学 2013
[5]山羊用隆朋合剂研制及其药代动力学的研究[D]. 韩光.东北农业大学 2011
[6]山羊复合麻醉剂对山羊中枢NO信号转导通路的影响[D]. 贾冰.东北农业大学 2011



本文编号：3685537