藤茶活性成分二氢杨梅素干预兔WAMD的实验研究

发布时间：2017-05-17 17:25

  本文关键词：藤茶活性成分二氢杨梅素干预兔WAMD的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:评价激光诱导日本大耳白兔湿性年龄相关性黄斑变性(Wet age-related maculardegeneration,WAMD)的可行性;探讨藤茶活性成分二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DMY)对WAMD的影响。方法:532nm激光对成年日本大耳白兔眼底进行光凝,创建WAMD模型。光凝后4-12周麻醉动物,行眼底荧光血管造影(FFA),光凝区光学相干断层扫描检查(OCT),酶联免疫法(ELISA)检测兔外周血中血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。DMY(100 mg DMY?kg-1?d-1)灌胃给药,ELISA检测外周血和房水中VEGF和PEDF水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)和色素上皮细胞衍生因子(Pigment epithelium-derived factor,PEDF)mRNA表达情况;HE染色检测脉络膜新生血管(Choroidal neovascularization,CNV);实验结束时,解剖实验动物,分别计算肝脏、肾脏和脾脏指数。结果:光凝4-12周后,FFA显示兔眼光斑部视网膜可见点状荧光;OCT图像显示光斑部视网膜色素上皮层断裂;外周血VEGF有不同程度的增加。给药4周,模型组外周血VEGF降低幅度为63.3%,而模型对照组降低幅度为48.6%;给药8周,模型组外周血VEGF降低幅度为46.7%,模型对照组降低幅度为20.1%。给药8周模型组日本大耳白兔房水VEGF浓度为2271.4 ng/L,而模型对照组房水中VEGF浓度为2967.5 ng/L。给药4周,模型组外周血PEDF降低幅度为55.9%,而模型对照组降低幅度为58.6%;给药8周,模型组外周血PEDF降低幅度为12.1%,模型对照组降低幅度为53.1%。给药8周,模型组大耳白兔房水PEDF浓度为195.1μg/L,而模型对照组房水中PEDF浓度为153.3μg/L。给药8周,模型组VEGF mRNA的表达量显著低于模型对照组(P〈0.01),其表达量分别是正常对照的0.5倍和13.9倍;模型组PEDF mRNA的表达量,显著低于模型对照组(P〈0.01),其表达量分别是正常对照的1.7倍和4.8倍。给药8周,模型对照组(未给药组)可见明显CNV,而模型给药组未见明显CNV。给药8周,模型组肝脏指数和脾脏指数低于模型对照组(P=0.147和P=0.223),模型组肾脏指数与模型对照组没有明显差异(P=0.874)。结论:倍频532 nm激光光凝(功率900mW,时间0.1 s)日本大耳白兔眼底能有效诱导CNV形成,发展血管渗漏,成功建立兔WAMD模型。DMY下调VEGF蛋白表达与其下调VEGF-mRNA表达趋势一致;而DMY上调PEDF蛋白表达与其下调PEDF-mRNA表达趋势不一致。DMY具有一定的抑制WAMD模型日本大耳白兔CNV生长的药理作用,其作用机制可能与其下调VEGF的表达、上调PEDF表达和益气活血、健脾疏肝有关。
【关键词】：湿性年龄相关性黄斑变性 脉络膜新生血管 藤茶 二氢杨梅素
【学位授予单位】：湖北民族学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-7
• 缩略词表7-10
• 第一章 前言10-19
• 1 AMD的介绍10
• 2 CNV的介绍10-11
• 3 CNV的诱导方法11
• 3.1 激光光凝11
• 3.2 Matrigel法11
• 4 CNV的检查方法11-15
• 4.1 眼底血管造影11-12
• 4.2 光学相干断层扫描12
• 4.3 组织学观察12-13
• 4.4 荧光素标记脉络膜血管平铺13-14
• 4.5 血管内皮生长因子检测14-15
• 5 藤茶以及二氢杨梅素15-17
• 5.1 DMY 的生理作用研究15-17
• 6 研究意义17-19
• 第二章 日本大耳白兔WAMD模型的建立19-25
• 1 实验材料19
• 1.1 实验动物19
• 1.2 试剂19
• 1.3 仪器19
• 2 实验方法19-21
• 2.1 激光光凝AMD造模19-20
• 2.2 荧光眼底血管造影20
• 2.3 相干光断层扫描20
• 2.4 VEGF因子检测20-21
• 3 结果21-23
• 3.1WAMD模型兔的FFA观察21
• 3.2 WAMD模型兔的OCT观察21-22
• 3.3 WAMD模型兔血清VEGF因子检测22-23
• 4 讨论23-25
• 第三章 藤茶活性成分DMY对兔WAMD的影响25-42
• 1 实验材料25
• 1.1 实验动物25
• 1.2 试剂25
• 1.3 仪器25
• 2 实验方法25-28
• 2.1 激光光凝AMD造模25-26
• 2.2 试验动物分组和处理26
• 2.3 VEGF和PEDF因子mRNA的Real-time PCR检测26-27
• 2.4 VEGF和PEDF因子检测27
• 2.5 HE染色观察CNV27-28
• 3 结果28-37
• 3.1 藤茶活性成分DMY对WAMD兔VEGF因子的影响28-30
• 3.2 藤茶活性成分DMY对WAMD兔PEDF因子的影响30-32
• 3.3 藤茶活性成分DMY对WAMD兔VEGF和PEDF-mRNA表达的影响32-35
• 3.4 HE染色观察DMY对WAMD模型兔脉络膜的影响35
• 3.5 DMY对WAMD模型兔主要肝、肾和脾指数的影响35-37
• 4 讨论37-42
• 4.1 AMD治疗方法的选择37-39
• 4.2 DMY对WAMD模型兔VEGF和PEDF蛋白表达水平的影响39-40
• 4.3 DMY对WAMD模型兔VEGF和PEDF mRNA表达水平的影响40-41
• 4.4 DMY治疗WAMD的有效性评价41-42
• 参考文献42-48
• 攻读硕士学位期间发表的文章48-49
• 致谢49

【参考文献】

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