七氟醚后处理改善缺血缺氧脑损伤新生大鼠海马区神经胶质瘢痕的作用及其机制

发布时间：2023-10-06 17:12

　　目的:新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)是新生儿期比较常见的合并症,由宫内窘迫,新生儿窒息,肺透明膜病等众多原因产生,是造成婴儿死亡和神经系统后遗症的主要因素。在早产儿中,HIE发病率高达60%。而其中,90%的发病患者患有长期神经系统功能障碍,包括神经系统发育迟缓,癫痫,学习认知功能障碍,运动功能障碍等。然而,现阶段对于HIE的治疗主要集中于急性期的对症治疗包括机械通气,降温,高压氧疗法以及损伤后的康复治疗等,其效果并不令人满意。我们仍十分需要一种能够逆转或减轻远期脑损伤的治疗手段。随着吸入麻醉药在婴幼儿手术中的广泛应用,麻醉药的脑保护作用受到关注。作为拥有多种药理功能的临床常用药物,吸入麻醉药如异氟醚和七氟醚,能够提高缺血脑组织对低氧的耐受性。七氟醚作为一种新生儿临床手术常用的吸入麻醉药,具有呼吸道刺激性小,麻醉深度易调节等优点。随着吸入麻醉药器官保护作用的深入研究,七氟醚的预处理和后处理都已被证实具有神经保护作用。然而由于HIE发病的不可预见性,后处理的临床意义相对更佳。已有研究表明,七氟醚后处理能够减少脑梗死容积,抑制神经细胞凋亡,促进海马神经元再生。课题组前期实验研究显示,在缺血...

【文章页数】：84 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 七氟醚后处理对HIBI后胶质瘢痕及远期学习记忆功能的影响
    1 前言
    2 材料方法
        2.1 主要仪器和试剂
            2.1.1 主要仪器设备
            2.1.2 主要试剂
        2.2 实验动物模型与分组
            2.2.1 实验动物
            2.2.2 实验分组
            2.2.3 HIBI模型制备
            2.2.4 麻醉处理
        2.3 神经行为学测试
            2.3.1 旷场试验Openfieldtest,OFT
            2.3.2 悬吊试验Suspension test
            2.3.3 水迷宫测试Morris water maze tests MWM
        2.4 Westernblot蛋白分析
            2.4.1 蛋白提取
            2.4.2 BCA法测定蛋白浓度及蛋白变性
            2.4.3 配胶及电泳
            2.4.4 转膜、封闭及一抗孵育
            2.4.5 二抗孵育及显影
        2.5 海马组织病理学观察
            2.5.1 尼氏染色Nisslstaining
            2.5.2 高尔基染色Golgi staining
        2.6 统计学分析
    3 结果
        3.1 造模后各组死亡率及体重
        3.2 七氟醚改善HIBI后大鼠神经行为学功能
            3.2.1 对自主活动能力和焦虑情绪的影响
            3.2.2 对感觉运动的影响
            3.2.3 对空间学习记忆能力的影响
        3.3 七氟醚改善HIBI后大鼠海马CA1区神经元密度及树突棘密度
        3.4 七氟醚改善HIBI后海马区突触相关蛋白的表达
    4 讨论
    5 结论
第二部分: 七氟醚后处理减轻胶质瘢痕水平与HIF-1α蛋白的关系
    1 前言
    2 材料方法
        2.1 主要仪器和试剂
            2.1.1 主要仪器设备
            2.1.2 主要试剂
        2.2 实验动物模型与分组
            2.2.1 实验动物
            2.2.2 实验分组
            2.2.3 HIBI模型制备
            2.2.4 麻醉处理
            2.2.5 药物注射
        2.3 神经行为学测试
            2.3.1 旷场试验Openfieldtest,OFT
            2.3.2 悬吊试验Suspension test
            2.3.3 水迷宫测试Morris water maze tests MWM
        2.4 Westernblot蛋白分析
            2.4.1 蛋白提取
            2.4.2 BCA法测定蛋白浓度及蛋白变性
            2.4.3 配胶及电泳
            2.4.4 转膜、封闭及一抗孵育
            2.4.5 二抗孵育及显影
        2.5 海马病理学观察
            2.5.1 尼氏染色Nisslstaining
            2.5.2 高尔基染色Golgistaining
        2.6 免疫荧光双染
        2.7 统计分析
    3 结果
        3.1 造模后各组死亡率及体重
        3.2 七氟醚处理后HIF-1α表达水平变化
        3.3 七氟醚改善HIBI后大鼠神经行为学功能
            3.3.1 对自主活动能力和焦虑情绪的影响
            3.3.2 对感觉运动的影响
            3.3.3 对空间学习记忆能力的影响
        3.4 对大鼠海马区神经元密度及CA1区树突棘密度
        3.5 对海马区突触相关蛋白表达的影响
        3.6 免疫荧光双染
            3.6.1 缺血缺氧后及七氟醚后处理后星形胶质细胞和神经元形态
            3.6.2 缺血缺氧后及七氟醚后处理后胶质瘢痕形态
    4. 讨论
    5. 结论
第三部分: 七氟醚后处理通过调节DJ-1蛋白抑制HIF-1α泛素化过程改善脑内胶质瘢痕形成
    1 前言
    2 材料方法
        2.1 主要仪器和试剂
            2.1.1 主要仪器设备
            2.1.2 主要试剂
        2.2 实验动物模型与分组
            2.2.1 实验动物
            2.2.2 实验分组
            2.2.3 HIBI模型制备
            2.2.4 麻醉处理
            2.2.5 药物注射
        2.3 Westernblot蛋白分析
            2.3.1 蛋白提取
            2.3.2 BCA法测定蛋白浓度及蛋白变性
            2.3.3 配胶及电泳
            2.3.4 转膜、封闭及一抗孵育
            2.3.5 二抗孵育及显影
        2.4 Realtime PCR检测
        2.5 统计学分析
    3. 结果
        3.1 造模后各组死亡率及体重
        3.2 HIBI后HIF-1αmRNA水平变化
        3.3 DJ-1/VHL蛋白水平变化与胶质瘢痕的关系
    4. 讨论
    5. 结论
本论文创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3852119