还阳参多糖对四氧嘧啶致Ⅰ型糖尿病大鼠及其相关并发症的影响

发布时间：2017-05-25 10:24

  本文关键词：还阳参多糖对四氧嘧啶致Ⅰ型糖尿病大鼠及其相关并发症的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究还阳参多糖(CTP)对四氧嘧啶致Ⅰ型糖尿病模型大鼠血糖、胰岛素水平、糖脂代谢的影响;研究还阳参多糖(CTP)对Ⅰ型糖尿病模型大鼠心脏等相关并发症的影响,并初步探讨其作用机制。方法:(1)还阳参多糖(CTP)对四氧嘧啶致Ⅰ型糖尿病模型大鼠的影响:采用腹腔注射四氧嘧啶复制Ⅰ型糖尿病模型大鼠;随机分为6组,即空白组(CON组);空白组+还阳参多糖(CON组+CTP组);模型组(DM组);模型组+还阳参多糖(DM+CTP组);模型组+胰岛素(DM+insulin组):模型组+胰岛素+还阳参多糖(DM组+insulin+CTP组),每组10只,雌雄各半;还阳参多糖(CTP)以40mg/kg剂量灌胃给药;胰岛素组给予胰岛素皮下给药,3IU/只,胰岛素加还阳参多糖组给予对应剂量还阳参多糖溶液,同时再皮下注射给予2IU/只胰岛素,空白加还阳参多糖组给予等剂量还阳参多糖溶液,空白组和模型组灌胃给予等体积生理盐水,1次/天,给药8周。每周测一次体重、血糖、摄食量和摄水量。给药6周后,末次给药前禁食6h,给药1h后再灌胃2g·kg-1的葡萄糖,检测给药后0、30、60、120min后各组大鼠的血糖变化。给药8周后,末次禁食12h,给药后2h检测大鼠血糖,眼眶后静脉丛取血,制备血清,检测血清胰岛素、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)。(2)CTP对四氧嘧啶致Ⅰ型糖尿病模型大鼠心脏并发症的影响:采用腹腔注射四氧嘧啶复制Ⅰ型糖尿病模型大鼠;末次给药禁食12h后,大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉,迅速做颈动脉插管,连接心电图测定仪,测定心电图;连接Bl-420S生物机能实验系统测定平均动脉压、心律、压力变化速率以及压力衰减率。后迅速开胸暴露心脏,取血,离心,制备血清,-20℃保存。用于肌酐、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、C-反应蛋白(CRP)含量。分离大鼠心脏,游离多余组织,称重。再分离左右心室,称重,计算心脏肥大指数(CHI)、左心室肥大指数(LV),左心室重比右心室重(LVW/RVW)、心脏总重比体重(HW/BW);并测定左心室壁厚度(利用螺旋测微计测定左心室壁厚度);部分心室以4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,每隔1mm横断面切数张4um厚的切片用以HE染色。部分心肌组织置于3%戊二醛中固定,进行电镜观察。结果:(1)Ⅰ型糖尿病大鼠模型的稳定建立:用生理盐水将四氧嘧啶(alloxan)配置成浓度为5%的溶液,现配现用。大鼠禁食不禁水12小时后,单次尾静脉注射四氧嘧啶(160mg/kg)溶液。72h后采用血糖仪检测随机血糖(不禁食),以血糖16.7mmol/l为造摸成功,如血糖16.7mmol/l,再次尾静脉注射四氧嘧啶100mg/kg,定期检测随机血糖,血糖16.7mmol/l,且稳定2周为造模成功。(2)还阳参多糖及还阳参多糖联合皮下注射胰岛素可使t1dm大鼠体重增加,与dm组比较,第5、8周dm+ins组和dm+ins+ctp组大鼠体重显著增加,差异有统计学意义,p0.05或p0.01;与dm+ins组比较,dm+ins+ctp在第8周体重显著下降,差异有统计学意义,p0.05。摄食量降低,与dm组比较,第2、8周dm+ins组和dm+ins+ctp组大鼠摄食量显著下降,差异有统计学意义,p0.05;与dm+ins组比较,dm+ins+ctp在第8周摄食量有所下降,差异无统计学意义。饮水量降低,与dm组比较,第2、5、8周dm+ins组和dm+ins+ctp组大鼠饮水量显著下降,差异有统计学意义,p0.05或p0.01;与dm+ins组比较,dm+ins+ctp在第8周饮水量显著下降,差异有统计学意义,p0.05。胰岛素水平未见明显变化。口服葡萄糖耐量增加,与dm组比较,dm+ins组和dm+ins+ctp组口服葡萄糖耐量显著增加,差异有统计学意义,p0.01;与dm+ins组比较,dm+ins+ctp组口服葡萄糖耐量有所增加,差异无统计学意义。糖化血红蛋白降低,与dm组比较,dm+ins组和dm+ins+ctp组糖化血红蛋白含量显著减少,差异有统计学意义p0.05或p0.01。(3)还阳参多糖可使t1dm大鼠血清中血脂含量降低,与dm组比较,dm+ins组和dm+ins+ctp组血清甘油三酯和低密度脂蛋白均显著降低,高密度脂蛋白显著升高,p0.01或p0.05;与dm+ins组,dm+ins+ctp组对高密度脂蛋白含量显著升高,差异有统计学意义,p0.05。肌酐及尿素氮含量降低,与dm组比较,dm+ctp组肌酐含量显著下降,dm+ins组肌酐、尿素氮含量含量显著降低,p0.05。乳酸脱氢酶(ldh)、磷酸肌酸激酶同工酶(ck-mb)和c-反应蛋白(crp)的含量均减少,与dm组比较,dm+ins组和dm+ins+ctp组血清ldh、ck-mb、crp含量水平显著降低,p0.01或p0.05;与dm+ins组比较,dm+ins+ctp组血清ldh、ck-mb、crp含量水平显著降低,p0.05。(4)各组大鼠心电图的变化:con组和con+ctp组大鼠心电图均正常。dm组大鼠均出现心电图异常或心肌梗死后波形。dm+ins+ctp组心电图异常较其他组均少。(5)各组大鼠血流动力学参数:与con组比较,dm组大鼠血压显著升高,差异有统计学意义,p0.05;与dm组比较,dm+ins组和dm+ins+ctp组血压降低,dm+ins+ctp组血压降低差异有统计学意义,p0.05;与dm+ins组比较,dm+ins+ctp组血压显著降低,差异有统计学意义,p0.05。与con组比较,dm组心率显著增加,差异有统计学意义,p0.01;与dm组比较,dm+ins组和dm+ins+ctp组心率显著降低,差异有统计学意义,p0.05;dm+ins+ctp组心率较dm+ins组心率有所下降。与con组比较,dm组压力变化率显著降低,差异有统计学意义,p0.01;与dm组比较,dm+ins+ctp组压力变化率显著升高,差异有统计学意义,p0.05;dm+ins+ctp组心率较dm+ins组压力变化率显著增加,差异有统计学意义,p0.05。与con组比较,dm组压力衰减率显著降低,差异有统计学意义,p0.05;与dm组比较,dm+ins组压力衰减率显著下降,差异有统计学意义,p0.05;dm+ins+ctp组心率较dm+ins组压力衰减率显著升高,差异有统计学意义,p0.05。(6)各组大鼠心室壁厚度发生变化:与con组比较,dm组大鼠心脏chi、lvw/rvw和左心室壁厚度水平显著升高,差异有统计学意义,p0.05;与dm组比较,dm+ins组和dm+ins+ctp组心脏chi、lvw/rvw和左心室壁厚度水平显著降低,差异有统计学意义,p0.05;dm+ins+ctp组较dm+ins组chi显著下降,差异有统计学意义,p0.05。(7)各组大鼠心肌细胞染色光镜检测结果:con组和con+ctp组:无明显改变。dm组和dm+ctp组:心肌细胞广泛坏死,肌纤维严重断裂,肌细胞核大量溶解、消失,中性粒细胞大量渗出。dm+ins组:大部分肌纤维连续完整,水肿不明显,胞核形态正常。dm+ins+ctp组:大部分肌纤维连续完整,水肿不明显,胞核形态正常。(8)各组大鼠心肌细胞电镜检测结果:con组和con+ctp组:可见心肌细胞完整,肌原纤维排列整齐,明暗带清楚,富含线粒体且结构正常,嵴排列整齐、密集;核膜完整,染色质均匀,细密。dm组和dm+ctp组:肌原纤维部分溶解,肌膜线粒体膜破损明显,可见线粒体肿胀,嵴排列紊乱,局部或整个线粒体嵴断裂溶解和空泡化,局部核膜破坏,并可见到凋亡小体。DM+INS组:肌纤维结构大致正常,线粒体形态基本正常,但仍有部分线粒体肿胀,少数嵴排列紊乱、溶解等;肌膜、核膜完整。DM+INS+CTP组:心肌结构损伤程度轻,肌膜基本完整,肌原纤维平行排列,明暗带基本可辨,少部分肌丝断裂;线粒体积聚,轻度肿胀,基质变淡,细胞核结构基本正常。结论:CTP对腹腔注射四氧嘧啶诱导的Ⅰ型糖尿病模型大鼠的血糖、肌酐、尿素氮含量未见明显变化。CTP可以改善腹腔注射四氧嘧啶诱导的Ⅰ型糖尿病模型大鼠体内的脂代谢紊乱。CTP联合皮下注射胰岛素可降低1型糖尿病大鼠血清中CRP、CK-MB及LDH水平,保护心肌细胞免受损伤,同时还可以改善血流动力学,抑制心脏肥大,心肌细胞纤维化。
【关键词】：还阳参多糖 Ⅰ型糖尿病 脂代谢紊乱 心脏并发症
【学位授予单位】：山西省中医药研究院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 摘要3-7
• Abstract7-16
• 引言16-19
• 第一部分 还阳参多糖的制备19-24
• 1 材料、仪器与试剂19
• 1.1 材料19
• 1.2 仪器19
• 1.3 试剂19
• 2 试验方法19-22
• 2.1 还阳参多糖提取20-21
• 2.2 还阳参多糖的纯化21
• 2.3 小分子的去除21
• 2.4 多糖含量测定21-22
• 3 讨论22-24
• 第二部分 还阳参多糖对四氧嘧啶致Ⅰ型糖尿病大鼠的影响24-44
• 试验一 还阳参多糖对四氧嘧啶致Ⅰ型糖尿病大鼠的作用25-32
• 1 试验材料与方法25-27
• 1.1 试验材料25
• 1.1.1 试验动物25
• 1.1.2 试验试剂与仪器25
• 1.2 试验方法25-26
• 1.2.1 Ⅰ型糖尿病模型大鼠的复制25-26
• 1.2.2 分组、给药方法26
• 1.2.3 一般情况检测26
• 1.2.4 OGTT检测26
• 1.2.5 生化指标的检测26
• 1.3 统计学处理26-27
• 2 试验结果27-31
• 2.1 CTP对各组大鼠一般生理状态的影响27-28
• 2.2 CTP对各组大鼠OGTT的影响28-29
• 2.3 CTP对各组大鼠糖化血红蛋白的影响29-30
• 2.4 CTP对各组大鼠血清胰岛素含量的影响30
• 2.5 CTP对各组大鼠脂代谢的影响30-31
• 2.6 CTP对各组大鼠血清肌酐、尿素氮含量的影响31
• 3 讨论31-32
• 3.1 模型的选择31
• 3.2 CTP对大鼠机体代谢的影响31-32
• 3.3 CTP对模型大鼠肾脏功能影响32
• 4 结论32
• 试验二 还阳参多糖（CTP）对四氧嘧啶致Ⅰ型糖尿病心脏并发症的影响32-44
• 1 实验材料与方法33-35
• 1.1 实验仪器33
• 1.2 实验方法33-35
• 1.2.1 心电图监测33
• 1.2.2 血流动力学参数测定33
• 1.2.3 心脏各指标参数33
• 1.2.4 心脏肥大评估33
• 1.2.5 左心室组织病理学观察33-34
• 1.2.6 电镜标本的制备34-35
• 2 试验结果35-44
• 2.1 各组大鼠心电图的变化35-36
• 2.2 CTP对各组大鼠血流动力学的影响36-37
• 2.3 CTP对各组大鼠血清中LDH、CK-MB、CRP的影响37-38
• 2.4 CTP对各组大鼠心肌肥大的影响38
• 2.5 染色光镜观察结果38-40
• 2.6 电镜观察结果40-44
• 结语44-45
• 参考文献45-47
• 综述47-51
• 参考文献49-51
• 攻读学位期间发表文章情况51-52
• 致谢52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 刘宁,张玲玲;CK-MB对急性心肌梗死的诊断意义[J];实用临床医学;2004年01期

2 单铁英;关华;苏安英;唐军民;;枸杞多糖对人外周血淋巴细胞免疫调节功能的影响[J];实用医学杂志;2010年03期

3 ;中国2型糖尿病防治指南(2010年版)[J];中国糖尿病杂志;2012年01期

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本文编号：393476