针刺对PERK-CHOP介导的STZ-DM大鼠胰腺细胞凋亡的影响

发布时间：2017-06-01 17:00

  本文关键词：针刺对PERK-CHOP介导的STZ-DM大鼠胰腺细胞凋亡的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的(1)探讨PERK-CHOP信号通路对STZ-DM大鼠胰腺ERS的影响;(2)探讨PERK-CHOP信号通路介导的ERS与针刺改善STZ-DM大鼠胰腺细胞凋亡之间的关系。方法(1)SPF级(220±20)g雄性SD大鼠80只,适应性喂养1周,随机选取10只作为空白对照组,用普通饲料喂养4周。其余70只用高脂高糖饲料喂养4周加低剂量STZ腹腔注射制备STZ-DM大鼠模型,RBG≥16.7mmol·L-1为STZ-DM大鼠(30只),再随机分为3组,分别为模型对照组、针刺治疗组和二甲双胍组,每组10只。针刺治疗组:取后三里(足三里)、内庭、胰俞,其中后三里和内庭穴接电针治疗,每天1次,7次为1个疗程,共治疗4个疗程;二甲双胍组:100mg·kg-1盐酸二甲双胍灌胃,每天1次,疗程与针刺治疗组平行;模型对照组和空白对照组固定同针刺治疗组,不做其它任何处理。干预期间均采用普通饲料喂养。(2)干预结束后测4组大鼠的随机血糖及体重,采用10%水合氯醛腹腔麻醉,置冰碟上快速无菌取出胰体、胰尾置液氮中保存。每组另取1只大鼠胰体、胰尾置2.0%戊二醛中保存。采用实时荧光PCR和Western blot检测各组大鼠胰腺组织的CHOP、PERK、Bcl-2、Bax m RNA表达和蛋白含量,用透射电镜观察胰腺超微结构。采用SPSS17.0对实验数据进行统计分析。实验数据用均数±标准差(X±s)表示,两组间均数比较采用t检验,多组间均数的比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),组间两两比较采用LSD检验。结果(1)随机血糖:高脂高糖饲料喂养4周联合低剂量STZ诱导成模后大鼠RBG(26.213±4.637mmol·L-1)显著高于空白对照组(7.180±0.329mmol·L-1)(P0.01),提示造模成功。干预4周后,模型对照组RBG(26.303±3.593mmol·L-1)较治疗前(25.567±5.189mmol·L-1)有所升高(P0.05);空白对照组RBG(7.460±0.868mmol·L-1)较治疗前有所升高(P0.05);针刺治疗组RBG(21.833±5.369mmol·L-1)较治疗前(25.167±4.930mmol·L-1)明显降低(P0.05);二甲双胍组RBG(22.938±5.292mmol·L-1)较治疗前(26.750±4.407mmol·L-1)也明显降低(P0.05),与针刺治疗组无统计学差异(P0.05)。提示针刺治疗有降低STZ-DM大鼠RBG作用。(2)胰腺内质网应激:干预4周后,模型对照组大鼠胰腺组织PERK m RNA表达(2.638±0.274)显著高于空白对照组(1.000±0.066),针刺治疗组(1.627±0.118)与模型对照组相比显著性下降(P0.01),但仍高于空白对照组,差异有统计学意义(P0.01),与二甲双胍组(1.673±0.204)相比无显著差异(P0.05);模型对照组PERK蛋白表达(1.164±0.274)与空白对照组(0.465±0.089)相比显著升高(P0.01),针刺治疗组(0.783±0.117)与模型对照组相比明显降低(P0.05),与空白对照组(0.465±0.089)和二甲双胍组(0.711±0.333)相比差异均无统计学意义(P0.05);模型对照组大鼠胰腺组织CHOP m RNA表达(3.067±0.171)显著高于空白对照组(1.003±0.064),差异有统计学意义(P0.01),针刺治疗组(1.472±0.153)与模型对照组相比显著下降(P0.01),但仍高于空白对照组,差异有统计学意义(P0.01),与二甲双胍组(1.5988±0.172)相比无统计学意义;模型对照组CHOP蛋白表达(1.720±0.748)与空白对照组(0.916±0.453)相比明显升高(P0.05),针刺治疗组(1.071±0.700)与模型对照组相比有降低趋势,但差异无统计学意义(P0.05),与空白对照组和二甲双胍组(1.068±0.790)相比差异均无统计学意义(P0.05)。以上结果提示STZ-DM大鼠胰腺组织存在内质网应激,针刺可干预PERK-CHOP信号通路来改善胰腺组织内质网应激。(3)胰腺细胞凋亡:干预4周后,模型对照组大鼠胰腺细胞Bax m RNA表达(2.102±0.784)与空白对照组(1.005±0.120)相比显著升高(P0.01)。针刺治疗组(1.518±0.203)与模型对照组相比显著降低,差异有统计学意义(P0.01),与空白对照组相比仍有所升高(P0.01),与二甲双胍组(1.650±0.488)相比差异无统计学意义(P0.05);模型对照组Bax蛋白表达(2.102±0.784)与空白对照组(0.795±0.313)相比显著升高(P0.01)。针刺治疗组(1.095±0.049)与模型对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P0.05),与空白对照组和二甲双胍组(1.072±0.212)相比均无统计学意义(P0.05);模型对照组大鼠胰腺细胞Bcl-2 m RNA表达(0.398±0.058)与空白对照组(1.005±0.094)相比显著降低(P0.01)。针刺治疗组(0.642±0.083)与模型对照组相比显著升高,差异有统计学意义(P0.01),但仍低于空白对照组(P0.01),与二甲双胍组(0.620±0.049)相比差异无统计学意义(P0.05);模型对照组Bcl-2蛋白表达(0.412±0.250)与空白对照组(1.003±0.369)相比显著降低(P0.01)。针刺治疗组(1.400±0.472)与模型对照组相比显著升高,差异有统计学意义(P0.01),与空白对照组和二甲双胍组(1.119±0.073)相比均无统计学意义(P0.05)。结果提示STZ-DM大鼠的胰腺细胞出现凋亡,针刺可以抑制胰腺细胞凋亡。(4)电镜下胰腺组织细胞的形态学观察:干预4周后,通过投射电镜对STZ-DM大鼠胰腺细微结构进行观察,结果空白对照组可见丰富线粒体,呈圆形状,粗面内质网丰富,呈条索状,细胞浆周围有多量聚集成堆的酶原颗粒;模型对照组仅见少量线粒体,且大部分出现空泡变性、嵴距离明显扩张或断裂,粗面内质网扩张、断裂,核染色质有边集浓染现象,酶原颗粒明显减少;针刺治疗组线粒体数目减少,少数出现不同程度的空泡变性、肿胀、嵴扩张,粗面内质网略有扩张、变形,少数出现断裂,排列稍紊乱,酶原颗粒散在分布在细胞浆周围;二甲双胍组可见部分线粒体空泡变性、嵴断裂,细胞核边集,少量粗面内质网轻度扩张、断裂,酶原颗粒略减少。以上结果提示针刺治疗可有效保护STZ-DM大鼠胰腺组织的细胞形态。结论(1)STZ-DM大鼠胰腺组织存在着ERS,PERK-CHOP信号通路可能是诱导ERS的途径;(2)针刺可以降低STZ-DM大鼠的RBG,并能有效保护胰腺组织的形态,抑制胰腺组织的细胞凋亡;(3)针刺可以通过调节STZ-DM大鼠PERK-CHOP信号通路改善胰腺组织ERS,从而抑制胰腺组织的细胞凋亡。
【关键词】：针刺 STZ-DM大鼠 信号通路 细胞凋亡
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R245
【目录】：

• 中文摘要6-10
• Abstract10-15
• 英文缩略词表15-17
• 1 前言17-21
• 2 材料与方法21-33
• 2.1 实验动物21
• 2.2 实验试剂与仪器21-23
• 2.3 动物筛选与分组23-24
• 2.4 动物模型的制备24-25
• 2.5 干预方法25
• 2.6 取材25-26
• 2.7 基因表达检测26-28
• 2.8 蛋白表达检测28-31
• 2.9 光镜下胰腺组织的形态学观察31
• 2.10 图片灰度值分析31-32
• 2.11 实验结果统计方法与处理32-33
• 3 结果33-50
• 4 讨论50-63
• 4.1 古代医家对消渴病的认识50-52
• 4.2 中医学对消渴病的治疗52-54
• 4.3 现代中医对T2DM的研究54-55
• 4.4 针灸治疗T2DM的现代实验研究55-58
• 4.5 模型的建立和实验观察指标的选择58-61
• 4.6 选穴的理论依据61-62
• 4.7 西药对照的选用依据62-63
• 5 结果分析63-66
• 6 结论66-67
• 7 不足与展望67-68
• 8 参考文献68-74
• 综述74-80
• 参考文献77-80
• 个人简历80-81
• 致谢81

【参考文献】

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本文编号：413033