毛细管电泳—电致化学发光在生物分析中的应用研究

发布时间：2017-06-21 08:21

  本文关键词：毛细管电泳—电致化学发光在生物分析中的应用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：毛细管电泳-电致化学发光(CE-ECL)是毛细管电泳(CE)和电致化学发光(ECL)结合的产物,兼具了两者分离效率高和检测灵敏度高的优点。CE-ECL是一种很有发展潜力的分离分析技术。本文将CE-ECL应用于蛋白与药物的相互作用和酶反应的研究。第一章:概述了毛细管电泳-电致化学发光(CE-ECL)联用技术及其在药物分析、药物与蛋白之间的作用分析、酶活性测定等方面的应用。第二章:以表面修饰了包裹Ru(bpy)32+的二氧化硅纳米粒子(Ru DS)-壳聚糖复合膜的石墨电极作为工作电极。阿齐霉素存在时,ECL信号明显提高,基于此柱端检测阿奇霉素的浓度。通过非线性回归分析计算出阿奇霉素和人血清白蛋白(HSA)之间的结合常数为7.46×104 L/mol。华法林和酮洛芬作为特异性探针来研究阿奇霉素和人血清白蛋白(HSA)相互作用的机理,结果表明阿奇霉素与人血清白蛋白(HSA)在位点Ⅰ结合。第三章:基于二甲基乙醇胺对Ru(bpy)32+电致化学发光的增敏作用,建立了评估丁酰胆碱酯酶(BCh E)活性的新方法。本文对影响BCh E活性的主要因素进行考察,其中包括:BCh E激活剂金属镁、钙离子浓度;孵育p H值;孵育温度和孵育时间;底物浓度。二甲基乙醇胺的检出限为1.98×10-8 mol/L(S/N=3)。以盐酸丁卡因为底物时,BCh E的米氏常数Km和最大反应速率Vm分别为1.16×10-3 mol/L和2.71×10-7 mol/L/min。第四章:盐酸奥布卡因滴眼液又称倍诺喜,化学名称为2-(二乙胺基)乙基-4-氨基-3-丁氧基苯甲酸酯盐盐酸盐,主要应用于眼科手术领域内的表面麻醉。本文研究了在日光或不同的p H值中滴眼液中盐酸奥布卡因的含量随时间的变化情况。以盐酸奥布卡因作为水解底物,发现在丁酰胆碱酯酶存在下其水解成4-氨基-3-丁氧基安息香酸和二乙胺基乙醇。研究了盐酸奥布卡因在丁酰胆碱酯酶存在下的药物代谢动力学。以盐酸奥布卡因为底物时,BCh E的米氏常数Km和最大反应速率Vm分别为1.28×10-3 mol/L和3.3×10-6mol/L/min。
【关键词】：毛细管电泳 电致化学发光 联吡啶钌 阿奇霉素 人血清白蛋白 丁酰胆碱酯酶 盐酸奥布卡因
【学位授予单位】：河北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R917;O657
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-11
• 第1章 绪论11-18
• 1.1 毛细管电泳-电致化学发光联用概述11
• 1.2 鲁米诺发光体系11-12
• 1.3 Ru(bpy)_3~(2+)发光体系12-15
• 1.4 Ru(bpy)_3~(2+)的加入方式15
• 1.5 毛细管电泳-电致化学发光在药物分析、生物分析领域的应用15-16
• 1.6 展望16-18
• 第2章 包裹Ru(bpy)_3~(2+)的二氧化硅纳米粒子探针研究阿奇霉素和人血清白蛋白的相互作用18-28
• 2.1 引言18-19
• 2.2 实验部分19-20
• 2.2.1 仪器与试剂19
• 2.2.2 Ru(bpy)_3~(2+)修饰电极19-20
• 2.3 分析过程20-21
• 2.4 结果与讨论21-27
• 2.4.1 RuDS修饰电极在阿奇霉素溶液中的ECL行为21
• 2.4.2 pH的优化21-22
• 2.4.3 孵育和透析时间的优化22-23
• 2.4.4 线性、检出限和重现性23-24
• 2.4.5 阿奇霉素-HSA在生理条件下的结合参数24-26
• 2.4.6 阿奇霉素与HSA相互作用的结合位点26-27
• 2.5 结论27-28
• 第3章 毛细管电泳-电致化学发光方法表征丁酰胆碱酯酶活性28-38
• 3.1 引言28-29
• 3.2 实验部分29-30
• 3.2.1 仪器与试剂29
• 3.2.2 CE-ECL分析29-30
• 3.2.3 酶促反应过程30
• 3.2.4 样品制备30
• 3.3 结果与讨论30-35
• 3.3.1 线性、检出限和重现性30-31
• 3.3.2 影响BChE酶活性的主要因素31-34
• 3.3.3 米氏方程34-35
• 3.4 评估血浆胆碱酯酶活性的应用35-37
• 3.5 结论37-38
• 第4章 盐酸奥布卡因滴眼液的稳定性及其代谢行为38-50
• 4.1 引言38-39
• 4.2 实验部分39-41
• 4.2.1 试剂与仪器39-40
• 4.2.2 分离和检测的优化40
• 4.2.3 稳定性试验40
• 4.2.4 酶促反应试验40-41
• 4.3 结果与讨论41-49
• 4.3.1 线性、检出限和重现性41-42
• 4.3.2 稳定性42-44
• 4.3.3 酶促反应44-49
• 4.4 结论49-50
• 第5章 总结50-51
• 参考文献51-66
• 致谢66-67
• 攻读硕士期间发表的学术论文67

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