肾病兔Apobec-1重组腺病毒降脂效应及机制研究

发布时间：2017-07-08 10:07

  本文关键词：肾病兔Apobec-1重组腺病毒降脂效应及机制研究

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【摘要】：目的观察肝脏获得性表达载脂蛋白B编辑催化多肽-1 (apolipoprotein B editing catalytic polypeptide-1, Apobec-1)对肾病兔血脂代谢的影响及肝脏Apobec-1、载脂蛋白B48 (apolipoprotein B48, ApoB48)、低密度脂蛋白受体(1ow density lipoprotein receptor, LDLR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白(low density lipoprotein receptor related protein, LRP)等蛋白表达的影响,探究其降脂效应及其可能机制。方法6月龄健康雄性普通级新西兰兔30只,体重1000-2000g,随机分为3组：(1)假手术组(n=10)；(2)肾病组(n=10)；(3)Apobec-1治疗组(n=10),置于代谢笼中饲养。适应性喂养1W,肾病组和Apobec-1治疗组以30%戊巴比妥30mg/KG腹腔注射麻醉,无菌条件下行左肾切除；假手术组只探及肾包膜,并不切除左肾。1W后,肾病组和Apobec-1治疗组耳缘静脉注射阿霉素4mg/KG,假手术组注射等量生理盐水。术后11W,Apobec-1治疗组耳缘静脉注射Apobec-1重组腺病毒(1x1013病毒颗粒/KG),肾病组及假手术组注射等量生理盐水。术后12W,禁食12h后留取血液及24h尿液,随后全部处死,血液、尿液及时送检,通过双缩脲比色法检测24小时尿蛋白(24 hour urinary protein,24UPr)浓度：酶法测定白蛋白(Albumin, Alb)、尿素氮(Blood urea nitrogen, BUN)、肌酐(Creatinine, Cr)、总胆固醇(Total cholesterol, TC)、总甘油三酯(Total triglyceride, TG)和高密度脂蛋白(High density lipoprotein, HDL-C)浓度；Friedewald公式估算血浆极低密度载脂蛋白(Very low density lipoprotein, VLDL-C)、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein, LDL-C)浓度；放射免疫法测定血浆载脂蛋白B100 (apolipoproteinB100, ApoB100)和ApoB48浓度；摘除肾脏,滤纸吸干后于10%中性福尔马林溶液固定,通过HE染色观察肾脏病理；摘除肝脏,滤纸吸干后剪取部分组织放置EP管中,-80℃低温冰箱保存,通过Western blot方法测定肝脏Apobec-1, ApoB48, LDLR, LRP等蛋白的表达水平,对条带进行相关光密度分析,通过与内参β-actin的条带光密度值的比值来间接反映各蛋白的表达量。数据以x±s表示,运用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析,两两比较采用SNK-q检验,检验水准a=0.05。结果1.各组血清及尿液指标变化三组之间血尿指标比较显示24UPr、Alb、BUN、Cr、TC、TG、VLDL-C、 LDL-C、ApoB100、ApoB48差异均有统计学意义(P0.05)。与假手术组相比,肾病组24UPr、BUN、Cr、TC、TG、LDL-C、LDL-C、ApoB100明显升高(P0.05),Alb明显下降(P0.05),而HDL-C、ApoB48未见明显变化；与肾病组相比,Apobec-1治疗组TC、TG、VLDL-C、LDL-C、ApoB100、ApoB48明显下降(P0.05),而24UPr、Alb、BUN、Cr、HDL-C未见明显变化；与假手术组比较,Apobec-1治疗组24UPr、BUN、Cr增高(P0.05), Alb、ApoB48下降(P0.05),而TC、TG、VLDL-C、LDL-C、HDL-C、ApoB100未见明显变化。2.各组肾脏病理改变假手术组肾组织结构无明显异常；肾病组和apobec-1治疗组肾脏组织细胞增生肥大、排列紊乱,肾小球囊壁增厚,局部可见粘连,肾间质增宽,充满基质,可见大量炎性细胞浸润,部分可见肾小球局灶性坏死。3.各组肝脏Apobec-1, ApoB48, LDLR, LRP等蛋白表达情况Western blot结果显示,与假手术组比较,肾病组肝脏LDLR蛋白表达明显下调(P0.05)；LRP蛋白表达明显上调(P0.05)；而Apobec-1、ApoB48蛋白表达未见明显变化；与肾病组、假手术组比较,Apobec-1治疗组LDLR蛋白表达明显下调(P0.05,P0.01),而Apobec-1、ApoB48、LRP蛋白表达明显上调(P0.01)。结论(1) Apobec-1重组腺病毒感染肾病兔具有一定的降脂效应,并可达正常程度。(2) Apobec-1重组腺病毒感染肾病兔,可使肾病兔肝脏表达Apobec-1,并伴有ApoB48的合成,进而起到一定的降脂效应。(3) Apobec-1重组腺病毒感染肾病兔,可上调LRP,加速apoB48-脂蛋白的清除,进而起到一定降脂效应。
【关键词】：低密度脂蛋白受体 低密度脂蛋白受体相关蛋白 高脂血症 肾病综合征 载脂蛋白B编辑催化多肽-1 载脂蛋白B100 载脂蛋白B48
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R726.9
【目录】：

• 中英文缩略语表7-8
• 中文摘要8-11
• Abstract11-15
• 1. 引言15-20
• 2. 材料与方法20-26
• 2.1 材料20-23
• 2.1.1 动物来源20
• 2.1.2 主要实验仪器及试剂20-21
• 2.1.3 溶液配制21-22
• 2.1.4 Apobec-1重组腺病毒的制备22-23
• 2.2 实验方法23-26
• 2.2.1 动物分组23
• 2.2.2 模型制备23
• 2.2.3 标本制备23-24
• 2.2.4 血液及尿液检测方法24
• 2.2.5 肾脏组织病理检测24
• 2.2.6 肝脏组织蛋白提取及Western Blot检测24-25
• 2.2.6.1 肝脏组织蛋白的提取24-25
• 2.2.6.2 Western Blot检测25
• 2.2.7 统计学处理25-26
• 3 结果26-31
• 3.1 各组兔血尿生化指标水平26-27
• 3.2 肾脏病理学改变27-28
• 3.3 肝脏LDLR、LRP蛋白表达比较28-29
• 3.4 肝脏Apobec-1、ApoB48蛋白表达变化29-31
• 4 讨论31-36
• 4.1 肾病模型的建立32-33
• 4.2 血脂水平的变化33-34
• 4.3 Apobec-1腺病毒降脂效应的肝内可能机制34-35
• 4.4 Apobec-1腺病毒降脂效应的肝外可能机制35-36
• 4.5 展望与小结36
• 5 结论36-37
• 参考文献37-41
• 附录41-42
• 致谢42-43
• 综述43-60
• 摘要43
• 引言43-44
• VLDL内质网内合成44-46
• VLDL内质网内转出46-47
• VLDL转运囊泡的形成47-49
• VTV与高尔基体的融合49-50
• VLDL在高尔基体中的加工过程及高尔基体转出过程50-51
• 总结51-52
• 参考文献52-60

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本文编号：534064