阿托伐他汀对哮喘小鼠气道炎症的影响及免疫调节作用的机制研究

发布时间：2017-08-01 22:25

  本文关键词：阿托伐他汀对哮喘小鼠气道炎症的影响及免疫调节作用的机制研究

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【摘要】：目的:采用卵清蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型,观察阿托伐他汀对哮喘小鼠Th1、Th2、Th17相关细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17表达的影响,探讨阿托伐他汀对哮喘小鼠气道炎症的影响及其免疫调节作用的机制,为临床应用阿托伐他汀治疗支气管哮喘提供理论依据。方法:将清洁级BABL/c小鼠24只随机分成3组:正常对照组(NS组)、哮喘模型组(OVA组)、阿托伐他汀干预组(AT组),每组8只。OVA组、AT组:第0、7、14天分别腹腔+皮下注射0.2m L致敏液(含OVA 50μg、Al(OH)3 2mg)致敏;NS组用0.2m L生理盐水代替。第21天起,OVA组、AT组给予OVA 50μL(含OVA20μg)滴鼻激发,NS组给予50μL生理盐水代替激发,每天1次,连续7天。AT组于每次激发前30分钟给予阿托伐他汀10mg/kg腹腔注射,NS组及OVA组以等量生理盐水腹腔注射。各组小鼠于末次激发24小时后,戊巴比妥50mg/kg麻醉,摘除眼球放血,颈椎脱臼处死。收集肺泡灌洗液(BALF)行细胞总数、细胞分类计数;肺组织石蜡切片、苏木精-伊红(HE)染色,观察支气管肺组织的病理改变;酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)、白介素-17(IL-17)的浓度;免疫组化检测肺组织中IL-17、维甲酸相关孤核受体(RORγt)的表达,以平均光密度值(OD值)表示各组指标的相对表达量。结果:(1)小鼠的行为学表现:OVA组小鼠滴鼻激发后数十秒出现口唇发绀、前肢搔鼻、呼吸急促、点头呼吸、腹式呼吸明显,甚者出现大小便失禁等表现;AT组小鼠激发后也出现口唇发绀、前肢挠鼻、呼吸急促、腹式呼吸等表现,但3天后激发上述症状较OVA组小鼠减轻;NS组小鼠表现无明显异常。(2)肺组织病理学表现:OVA组小鼠气道及伴行血管周围大量炎症细胞浸润,支气管管腔变窄,管腔内可见黏液栓,气道上皮脱落,黏膜皱壁减少等改变;AT组小鼠也可见炎症细胞浸润,上皮脱落,黏液栓形成,支气管管腔变窄,但程度较OVA组减轻;NS组无上述改变。(3)BALF细胞计数:与NS组细胞总数(7.1±0.4)、嗜酸性粒细胞(0.0±0.0)、中性粒细胞(1.4±0.08)、淋巴细胞(0.3±0.02)比较,OVA组小鼠细胞总数(24.3±2.1)、嗜酸性粒细胞(7.9±0.6)、中性粒细胞(2.8±0.2)、淋巴细胞(0.9±0.04)均明显升高,差异均有统计学意义(P0.05);与OVA组比较,AT组细胞总数(13.6±1.5)、嗜酸性粒细胞(2.5±0.12)、中性粒细胞(1.9±0.09)、淋巴细胞(0.7±0.05)均降低(P0.05),但仍高于NS组,差异均有统计学意义(P0.05)。(4)BALF中IL-4、IFN-γ、IL-17的浓度(pg/m L)及IFN-γ/IL-4比值:OVA组IL-4、IL-17的浓度(157.45±9.01、195.68±20.68)较NS组(37.58±1.62、29.76±3.54)明显升高,差异均有统计学意义(P0.05),而IFN-γ水平(248.47±21.62)较NS组(256.00±17.71)有所降低,但差异无统计学意义(P0.05),OVA组IFN-γ/IL-4比值(1.57±0.10)较NS组(6.81±0.56)明显降低,差异有统计学意义(P0.05);经阿托伐他汀干预后,AT组BALF中IL-4、IL-17的浓度(72.82±6.98、111.378±8.75)较OVA组下降,但仍高于NS组,差异均有统计学意义(P0.05);IFN-γ水平(213.23±10.37)较OVA组降低,差异有统计学意义(P0.05),而IFN-γ/IL-4(2.93±0.19)较OVA组升高,但仍低于NS组,差异均有统计学意义(P0.05)。(5)免疫组化检测肺组织中IL-17、RORγt的表达:IL-17、RORγt主要表达在气道周围、肺组织及肺间质中的淋巴细胞胞浆和细胞核内,OVA组IL-17、RORγt的OD值(0.258±0.035、0.523±0.060)均高于NS组(0.032±0.004、0.096±0.010)及AT组(0.115±0.019、0.300±0.033),差异均有统计学意义(P0.05),与NS比较,AT组IL-17、RORγt的OD值仍升高,差异有统计学意义(P0.05)。(6)相关性分析:BALF中IL-17水平与嗜酸性粒细胞数(r=0.922,P0.05)、中性粒细胞数(r=0.708,P0.05)均呈正相关;肺组织免疫组化中IL-17与RORγt的表达量亦呈正相关(r=0.818,P0.05)。结论:(1)采用OVA腹腔加皮下注射致敏及OVA滴鼻激发能复制哮喘小鼠模型;(2)哮喘小鼠存在Th1/Th2失衡及Th2、Th17功能亢进;(3)阿托伐他汀具有抑制哮喘小鼠气道炎症的作用;(4)阿托伐他汀可通过纠正Th1/Th2失衡、抑制RORγt表达进而抑制Th17分泌IL-17而发挥免疫调节作用,可能是其抗炎机制之一。
【关键词】：支气管哮喘 气道炎症 阿托伐他汀 免疫调节
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R562.25
【目录】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-12
• 材料与方法12-19
• 结果19-26
• 讨论26-33
• 结论33-34
• 参考文献34-39
• 英汉缩略词对照表39-40
• 致谢40-41
• 综述 他汀类药物治疗支气管哮喘的研究进展41-52
• 参考文献47-52

【参考文献】

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1 赵灵芝;卢美萍;;哮喘儿童支气管肺泡灌洗液IL-17、IL-8和VEGF水平测定及意义[J];中国病理生理杂志;2011年03期

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本文编号：606511