盐酸贝那普利对糖尿病大鼠P53、α-SMA基因表达的影响

发布时间：2017-08-06 19:28

  本文关键词：盐酸贝那普利对糖尿病大鼠P53、α-SMA基因表达的影响

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【摘要】：目的:近年来糖尿病的发病率呈上升趋势,由糖尿病所致心力衰竭的发病率较非糖尿病患者显著升高,糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DC)是糖尿病患者最终出现心功能不全、心力衰竭的一个关键因素。心肌间质的纤维化、心肌细胞的凋亡以及心脏结构的重构等都对糖尿病心肌病的发病以及疾病的进展起到了重要的作用。本文将通过心肌病理切片及心肌组织α平滑激动蛋白(α-smooth muscleaction,α-SMA)基因表达论证糖尿病心肌病心肌纤维化的存在,并从P53基因表达方面探讨其对糖尿病状态下心肌组织病为理变化的影响。盐酸贝那普利最新一代的血管紧张素转化酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitors,ACEI)类药物,其主要的药理学机制为通过抑制血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)的相关作用而发挥其自身作用,具有良好的控制血压的作用。近年来的研究发现,盐酸贝那普利还可通过抑制肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensinsystem,RAS)、减少活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的过度生成等来延缓机体动脉粥样硬化过程的进展,并能减轻机体氧化应激的程度、降低炎症细胞的活性。RAS系统的激活、ROS过度生等成都参与了糖尿病心肌病的发病进展。盐酸贝那普利是否能够改善糖尿病心肌病患者的预后、及其相关的可能机制现在尚无定论。本试验将采取链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)一次性腹腔注射的方法来诱导1型糖尿病大鼠模型,在此基础上予以盐酸贝那普利灌胃干预,观察心肌细胞P53、α-SMA基因mRNA的表达。方法:1.试验动物分组及标本处理本实验将SD大鼠分为三组:空白对照组、糖尿病组、贝那普利组。具体试验方法:雄性8周sd大鼠42只,初使体重200-220g,通过适应性饲养一周左右以后,随即分为空白对照组12只、实验组30只。空白对照组予以自由进食进水,实验组禁食12小时后一次性腹腔注射2%stz65mg/kg;注射72小时后测量大鼠尾静脉随机血糖,血糖16.5mmol/l为糖尿病模型制备成功的标准。为便于统计且去除造模失败的模型,将模型成功的sd大鼠随即分为糖尿病组12只、贝那普利组12只,两组分别自由进食进水饲养8周,8周后贝那普利组每日予以盐酸贝那普利片10mg/kg灌胃干预,其余给予相同剂量的生理盐水灌胃干预。试验期间死亡的以及血糖降至正常的大鼠不纳入最终的统计学处理。灌胃干预8周后处死各组大鼠。处死前各组大鼠禁食12小时,并予以25%乌拉坦6ml/kg腹腔注射,待大鼠处于麻醉状态后迅速打开胸腔并取出大鼠心脏,减去血管及心脏周围结缔组织,用生理盐水冲洗并用纱布吸取心脏表面水分后称重。称重后取各自大鼠心尖部少许组织置于多聚甲醛溶液中,以便行he病理切片制作。其余心肌组织置于-80℃冰箱冻存,用于后来提取总rna,测定心肌组织中p53、α-sma的基因表达。2.大鼠尾静脉血糖测定:采用氧化酶法测定。3.心肌切片制作:采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosinstaining,he)染色法制作sd大鼠心肌切片。4.心肌组织p53、α-sma基因mrna表达的测定采用trigol法提取心肌总rna,以gadph为内参,用反转录时实荧光定量pcr(theabbreviationforreversetranscript-qpcr,rt-qpcr)法测定心肌p53、α-sma基因mrna的相对表达量。5.数据处理本实验所有数据均采用x±s表示,采用spss15.0软件进行统计学处理,各组间采用两两t检验,以α=0.05为检验标准,以p0.05为差异有统计学意义。结果:1动物模型制作1.1各组大鼠尾血糖水平模型组予以stz左下腹腹腔注射,空白对照组予以等量生理盐水注射。72小时后,取尾静脉血测大鼠血糖,除去模型制作失败的,其余模型组大鼠均符合1型糖尿病标准,且伴有多饮多食多尿症状,空白对照组血糖水平尚未达糖尿病标准,表明模型制作成功。1.2各组大鼠心脏重量、体重及心脏体重指数情况造模16周后将各组大鼠称重后处死,测量心脏重量,糖尿病组及贝那普利组大鼠体重及心脏重量较空白对照组下降(p0.05),但心脏体重指数较空白对照组升高(p0.05)。糖尿病组与盐酸贝那普利组对比,上述指标均无明显统计学差异。2.心肌he染色空白对照组大鼠心肌he染色可见心肌肌纤维排列整齐,心肌横纹结构较为清晰,无间质纤维增生,细胞核大多呈圆形、椭圆形,胞核染色较淡,无肌纤维断裂、溶解。糖尿病组较空白对照组可见心肌肌纤维肥大,且排列紊乱,细胞间质纤维成分出现增生现象,并伴有心肌纤维断裂。细胞核较空白对照组染色加深,且同一视野下细胞核数增多,细胞核形态不规则,核大小不均一。盐酸贝那普利组各病理学改变较糖尿病组均有不同改善,心肌细胞肥大、心肌纤维断裂较少见,细胞核染色较淡。3.p53、α-sma基因mrna表达与空白对照组相比,糖尿病组心肌组织p53、α-sma基因mrna的表达升高,差异有统计学意义(p0.05);与糖尿病组相比,盐酸贝那普利组心肌组织p53、α-sma基因mrna的表达降低,差异有统计学意义(p0.05)。结论:1.与空白对照组大鼠对比,糖尿病大鼠出现体重降低的现象,且心脏体重指数升高;2.糖尿病大鼠心肌组织p53基因mrna的表达较空白对照组升高;通过对糖尿病大鼠进行盐酸贝那普利干预后,相对于糖尿病组,贝那普利组p53基因mrna的表达降低。3.糖尿病大鼠心肌组织α-sma基因mrna的表达较空白对照组升高;通过对糖尿病大鼠进行盐酸贝那普利干预,其α-SMA基因mRNA表达降低。
【关键词】：糖尿病心肌病 P53 α-SMA 盐酸贝那普利 大鼠
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.2;R54
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-8
• 摘要8-12
• ABSTRACT12-16
• 前言16-19
• 研究材料（资料、内容）和方法19-30
• 1 试验材料19-20
• 1.1 试验动物19
• 1.2 主要试剂19
• 1.3 主要仪器19-20
• 1.4 相关试剂的配制20
• 2 试验方法20-30
• 2.1 糖尿病动物模型的建立及分组20-21
• 2.2 给药方法21
• 2.3 标本的采集21
• 2.4 观测指标及相关检测方法21-29
• 2.5 统计学处理29-30
• 结果30-36
• 讨论36-42
• 结论42-43
• 参考文献43-48
• 综述48-62
• 参考文献57-62
• 作者简介及读研期间主要科研成果62-63
• 致谢63

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