小型猪复合麻醉剂及其颉颃剂对大鼠不同脑区AMPK的影响

发布时间：2017-08-18 16:00

  本文关键词：小型猪复合麻醉剂及其颉颃剂对大鼠不同脑区AMPK的影响

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【摘要】：本实验目的在于探讨小型猪复合麻醉剂(XFM)及其颉颃剂对大鼠不同脑区AMPK的影响,明确AMPKα1 mRNA、AMPKα2 mRNA、AMPK蛋白和p-AMPK蛋白在麻醉和催醒过程中的变化趋势,探讨XFM及其颉颃剂在麻醉过程中的的相互作用机制,为临床麻醉及科学研究提供依据。将90只SD大鼠随机分为三组:XFM麻醉组(M组)(n=30)、小型猪复合麻醉颉颃剂组(W组)(n=30)、XFM与颉颃剂交互组(MW组)(n=30)。其中M组又分为5个亚组,分别为:C1组(腹腔内注射与XFM等体积的0.9%NaCl)、M1组(腹腔注射XFM后10min)、M2组(腹腔注射XFM后20min)、M3组(腹腔注射XFM后40min)、M4组(腹腔注射XFM后1h);W组也分为5个亚组,分别为:C2组(腹腔内注射与颉颃剂等体积0.9%NaCl)、W1组(腹腔注射颉颃剂后10min)、W2组(腹腔注射颉颃剂后20min)、W3组(腹腔注射颉颃剂后40min)、W4组(腹腔注射颉颃剂后1h);MW组也分为5个亚组,分别为:C3组(腹腔内注射与XFM等体积的0.9%NaCl 10min后,注射与颉颃剂等体积的0.9%NaCl)、MW1组(腹腔注射XFM 10min后,注射其颉颃剂10min)、MW2组(腹腔注射XFM 10min后,注射其颉颃剂20min)、MW3组(腹腔注射XFM 10min后,注射其颉颃剂40min)、MW4组(腹腔注射XFM 10min后,注射其颉颃剂1h)。各组别到达预定时间后迅速处死并取脑,将大鼠大脑皮层、小脑、丘脑、脑干及海马这五个脑区分离开,用RT-PCR技术测定各脑区AMPKα1和AMPKα2基因mRNA的相对表达量,WB测定各脑区AMPK蛋白和p-AMPK蛋白的相对表达量。实验结果表明:1.XFM能使大鼠各脑区内AMPKα1 m RNA和AMPKα2 m RNA的相对表达量显著升高;小脑、海马、丘脑和脑干内p-AMPK蛋白的相对表达量显著升高,且m RNA转录和蛋白表达的变化较为一致。2.小型猪复合麻醉颉颃剂能使大鼠各脑区内AMPKα2 m RNA的相对表达量显著降低;大脑皮层和脑干内AMPKα1 m RNA的相对表达量显著降低,而丘脑内则显著升高;小脑、海马和脑干内p-AMPK蛋白的相对表达量显著降低。3.小型猪复合麻醉颉颃剂催醒XFM麻醉的大鼠后,能使大鼠大脑皮层和脑干内AMPKα1mRNA的相对表达量显著降低,小脑、海马和丘脑中则显著升高;大脑皮层和海马内AMPKα2mRNA的相对表达量显著升高,小脑、丘脑和脑干中则显著降低;小脑、海马和脑干内p-AMPK蛋白的相对表达量显著降低。综上所述,XFM对AMPKα1 m RNA、AMPKα2 m RNA和p-AMPK蛋白具有一定的激活作用,与小型猪复合麻醉颉颃剂对其的作用相反,但在催醒过程中颉颃剂并不能完全逆转麻醉剂对AMPKα2 m RNA和p-AMPK蛋白的激活,提示全麻机理研究的复杂性和多位点性。
【关键词】：小型猪 麻醉 XFM 小型猪复合麻醉颉颃剂 AMPK
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S859.7
【目录】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-11
• 1 引言11-19
• 1.1 全麻机制相关学说11-12
• 1.1.1 脂质学说11
• 1.1.2 蛋白质学说11-12
• 1.1.3 基因学说12
• 1.2 全麻与中枢神经系统12-14
• 1.3 XFM及其颉颃剂的研究进展14-15
• 1.3.1 XFM的研究进展14-15
• 1.3.2 小型猪复合麻醉颉颃剂的研究进展15
• 1.4 AMPK研究进展15-17
• 1.4.1 AMPK的结构特点及组织分布15-16
• 1.4.2 AMPK的活性调节16-17
• 1.5 麻醉与AMPK的关系17-18
• 1.6 研究目的与意义18-19
• 2 材料与方法19-30
• 2.1 实验材料19-21
• 2.1.1 实验动物19
• 2.1.2 实验试剂19-20
• 2.1.3 实验仪器20
• 2.1.4 实验试剂的配制20-21
• 2.2 实验方法21-30
• 2.2.1 实验分组与样品采集21-22
• 2.2.2 各脑区样品中AMPK m RNA含量的测定22-25
• 2.2.3 不同脑区AMPK、p-AMPK蛋白含量的测定25-30
• 3 结果30-52
• 3.1 大鼠各脑区AMPK m RNA含量测定结果30-42
• 3.1.1 总RNA的鉴定结果30
• 3.1.2 Real Time PCR扩增曲线结果30-31
• 3.1.3 Real Time PCR熔解曲线结果31-32
• 3.1.4 Real Time PCR产物凝胶电泳结果32-33
• 3.1.5 XFM对大鼠各脑区AMPKα1 mRNA表达影响的测定结果33-34
• 3.1.6 小型猪复合麻醉颉颃剂对大鼠各脑区AMPKα1 mRNA表达影响的测定结果34-36
• 3.1.7 颉颃剂催醒XFM麻醉对大鼠各脑区AMPKα1 m RNA表达影响的测定结果36-37
• 3.1.8 XFM对大鼠各脑区AMPKα2 mRNA表达影响的测定结果37-39
• 3.1.9 小型猪复合麻醉颉颃剂对大鼠各脑区AMPKα2 mRNA表达影响的测定结果39-40
• 3.1.10 颉颃剂催醒XFM麻醉对大鼠各脑区AMPKα2 mRNA表达影响的测定结果40-42
• 3.2 XFM及其颉颃剂对大鼠各脑区AMPK蛋白表达的影响42-47
• 3.2.1 XFM对大鼠各脑区AMPK蛋白表达影响的测定结果42-44
• 3.2.2 小型猪复合麻醉颉颃剂对大鼠各脑区AMPK蛋白含量测定结果44-45
• 3.2.3 颉颃剂催醒XFM麻醉对大鼠各脑区AMPK蛋白含量测定结果45-47
• 3.3 XFM及其颉颃剂对大鼠各脑区p-AMPK蛋白表达的影响47-52
• 3.3.1 XFM对大鼠各脑区p-AMPK蛋白表达影响的测定结果47-48
• 3.3.2 小型猪复合麻醉颉颃剂对大鼠各脑区p-AMPK蛋白表达影响的测定结果48-50
• 3.3.3 颉颃剂催醒XFM麻醉对大鼠各脑区p-AMPK蛋白表达影响的测定结果50-52
• 4 讨论52-56
• 4.1 实验设计依据52-53
• 4.1.1 AMPK的选取52
• 4.1.2 脑区的选取52-53
• 4.2 实验的影响因素53
• 4.3 AMPK在麻醉与催醒过程中的机制探讨53-55
• 4.3.1 XFM及其颉颃剂对AMPKα1 mRNA和AMPKα2 m RNA表达的影响53-54
• 4.3.2 XFM及其颉颃剂对p-AMPK蛋白表达的影响54-55
• 4.4 全麻机理研究的复杂性55-56
• 5 结论56-57
• 致谢57-58
• 参考文献58-65
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文65

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