力竭运动及钝挫伤对大鼠骨骼肌卫星细胞体外增殖及AXIN、GSK-3β含量的影响

发布时间：2017-08-20 22:12

  本文关键词：力竭运动及钝挫伤对大鼠骨骼肌卫星细胞体外增殖及AXIN、GSK-3β含量的影响

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【摘要】：研究目的：研究力竭运动及钝挫伤对大鼠骨骼肌卫星细胞体外增殖及AXIN、GSK-3β含量的影响。研究方法：五周龄雄性SD大鼠24只,分为4组：对照组(Control,C);力竭运动即刻组(Exhaustive, EO);力竭运动后24h组(E24)；力竭运动后48h组(E48),一次性力竭下坡跑运动达到力竭状态。另取18只SD大鼠,分为三组：钝挫伤即刻组(contusion, Do);钝挫伤后24h组(D24)；钝挫伤后48h组(D48)。对照组、力竭运动组、钝挫伤组于安静状态、末次力竭后、钝挫伤后不同时间点,采用20%乌拉坦麻醉,宰杀后从腹主动脉取血5m1以制备血清,测定AXIN、GSK-3β含量的变化；取左侧股四头肌,一分为二,一份立即进行细胞培养实验,另一份样本液氮保存,测定AXIN、GSK-3β含量的变化。同时取左侧腓肠肌用于冰冻切片,观察肌纤维类型。另取新生鼠三只,亦取股四头肌进行细胞培养实验。研究结果：(1)肌卫星细胞培养结果显示：通过分离消化大鼠肌肉组织,可在体外培养获得高纯度具有成肌能力的肌卫星细胞。培养初期阶段,除新生鼠外各组的肌卫星细胞增长速度较慢,到第五天时各组开始大量增殖,第七天时达到增殖的高峰,随后增殖速度下降。各组培养之间结果比较可见,安静对照组骨骼肌卫星细胞含量最少,增殖速度缓慢；新生鼠的骨骼肌卫星细胞含量最高,增殖速度最快；而钝挫伤组的骨骼肌卫星细胞数量明显多于力竭运动组,增殖速度也快于力竭运动组。(2)ATP酶染色结果显示：骨骼肌快肌纤维呈黑褐色,慢肌纤维呈灰白色；相同视角下慢肌纤维的横切面积明显小于快肌纤维横切面积,并且力竭运动组的肌纤维密度大于钝挫伤组。与对照组比较,相同视角下,力竭运动组I型肌纤维百分比明显降低(P0.01),力竭运动组Ⅱ型肌纤维百分比明显增加(P0.01)；钝挫伤组Ⅰ型肌纤维百分比降低(P0.01),钝挫伤组Ⅱ型肌纤维百分比增加(P0.01)。(3) Elisa结果显示：力竭运动组、钝挫伤组骨骼肌、血清中GSK-3β的含量与对照组相比较均显著下降,且具有显著性差异,而力竭各组、钝挫伤各组之间无显著性差异。研究结论：(1)力竭运动及钝挫伤可使肌卫星细胞激活增殖分化,数量增殖变多；并且钝挫伤组的骨骼肌卫星细胞增殖数量明显多于力竭运动组,可能由于钝挫伤的刺激更强所致。新生鼠肌卫星细胞活性最强,细胞增殖情况明显。(2)力竭运动组Ⅰ型肌纤维百分比降低,Ⅱ型肌纤维百分比增加；钝挫伤组Ⅰ型肌纤维百分比降低,Ⅱ型肌纤维百分比增加,皆有显著性差异,呈现“由慢变快”的趋势。(3)与对照组相比,力竭运动组、钝挫伤组的骨骼肌、血清中GSK-3β的含量均显著下降,差异性显著,力竭各组、钝挫伤各组之间无显著性差异。力竭运动、钝挫伤可以下调AXIN、GSK-3β的含量,AXIN、GSK-3β可能在骨骼肌卫星细胞激活及骨骼肌损伤修复中起负调节作用。
【关键词】：力竭运动 钝挫伤 肌卫星细胞 轴蛋白 糖原合成酶激酶
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：G804.7
【目录】：

• 中文摘要2-4
• ABSTRACT4-6
• 缩略词表6-10
• 前言10-11
• 第一部分 文献综述11-23
• 1 骨骼肌损伤与再生概述11-13
• 1.1 骨骼肌损伤的修复概述11
• 1.2 骨骼肌损伤的病理11-12
• 1.2.1 骨骼肌急性损伤的病理11
• 1.2.2 骨骼肌慢性损伤的病理11-12
• 1.3 力竭运动对骨骼肌超微结构的影响12
• 1.4 钝挫伤对骨骼肌超微结构的影响12
• 1.5 骨骼肌损伤的修复12-13
• 2 骨骼肌卫星细胞体外培养与骨骼肌损伤修复13-18
• 2.1 骨骼肌卫星细胞概述13-14
• 2.2 骨骼肌卫星细胞的培养14-17
• 2.2.1 骨骼肌卫星细胞的培养方法14-15
• 2.2.2 骨骼肌卫星细胞的培养条件15
• 2.2.3 骨骼肌卫星细胞的鉴定15-16
• 2.2.4 骨骼肌卫星细胞的激活16
• 2.2.5 骨骼肌卫星细胞的增殖与分化16-17
• 2.3 力竭运动和钝挫伤对肌卫星细胞的影响17-18
• 2.3.1 力竭运动对骨骼肌卫星细胞的影响17
• 2.3.2 钝挫伤对骨骼肌卫星细胞的影响17-18
• 2.4 骨骼肌卫星细胞在骨骼肌损伤修复中的作用18
• 3 AXIN/GSK-3B/WNT/B-CATENIN信号通路与骨骼肌损伤修复18-23
• 3.1 WNT信号通路19
• 3.1.1 WNT家族19
• 3.1.2 多条WNT信号途径19
• 3.2 WNT/B-CATENIN信号通路19-21
• 3.2.1 AXIN、GSK-3B的概述19-21
• 3.2.2 AXIN/GSK-3B对WNT/B-CATENIN信号通路的调节作用21
• 3.3 AXIN/GSK-3B/WNT/B-CATENIN信号通路在骨骼肌损伤修复中的作用21-23
• 第二部分 实验部分23-48
• 1 实验动物及方法23-24
• 1.1 实验动物23
• 1.2 实验分组23
• 1.3 建模方法23-24
• 1.3.1 力竭运动模型23
• 1.3.2 钝挫伤实验模型23-24
• 1.4 动物取材24
• 2 细胞培养实验仪器、试剂及方法24-27
• 2.1 细胞培养实验仪器24-25
• 2.2 细胞培养实验试剂25
• 2.3 试剂配置方法25-26
• 2.4 骨骼肌卫星细胞的分离与培养26-27
• 2.4.1 骨骼肌卫星细胞培养的条件要求26-27
• 2.4.2 骨骼肌卫星细胞的分离与培养27
• 3 腓肠肌肌纤维类型的观察27-28
• 3.1 实验试剂及配置27-28
• 3.2 实验仪器及器械28
• 3.3 冰冻切片及ATP酶染色28
• 3.4 摄像分析28
• 4 酶联免疫实验方法(ELISA)28-29
• 4.1 样品收集、处理及保存28-29
• 4.2 ELISA操作步骤29
• 5 蛋白含量测定方法29-30
• 5.1 蛋白测定条件29
• 5.2 蛋白含量的测定29-30
• 6 数据处理30-31
• 7 实验结果与分析31-43
• 7.1 力竭运动组及钝挫伤组及新生鼠不同时期卫星细胞的体外培养结果31-37
• 7.1.1 各组培养1天后骨骼肌卫星细胞生长状况31-32
• 7.1.2 各组培养3天后骨骼肌卫星细胞生长状况32-34
• 7.1.3 各组培养5天后骨骼肌卫星细胞生长状况34-35
• 7.1.4 各组培养7天后骨骼肌卫星细胞生长状况35-37
• 7.2 力竭运动及钝挫伤不同时期大鼠腓肠肌肌纤维类型的变化37-40
• 7.3 力竭运动及钝挫伤不同时期大鼠骨骼肌、血清中GSK-3B含量变化40-41
• 7.4 力竭运动及钝挫伤不同时期大鼠骨骼肌、血清中AXIN含量变化41-43
• 8 讨论与分析43-47
• 8.1 骨骼肌卫星细胞的体外培养43-44
• 8.2 力竭运动、钝挫伤及新生鼠体外培养卫星细胞增殖分化情况对比44
• 8.3 力竭运动、钝挫伤对大鼠腓肠肌肌纤维类型的影响44-45
• 8.4 力竭运动及钝挫伤对不同时期大鼠GSK-3B、AXIN含量的影响45-47
• 9 研究结论47-48
• 参考文献48-55
• 致谢55-56

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本文编号：709160