三黄益肾胶囊对糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶（MMP-9）及肿瘤坏死因子（TNF-α）影响的实验研究

发布时间：2017-08-23 15:24

  本文关键词：三黄益肾胶囊对糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶（MMP-9）及肿瘤坏死因子（TNF-α）影响的实验研究

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【摘要】：三黄益肾胶囊(制剂准字号:Z20050795)是沧州中西医结合医院院内制剂,用于早期糖尿病肾病临床,前期已进行了部分作用机制的研究,本课题是在前期研究的基础上,进行作用机制的深入研究。目的:观察三黄益肾胶囊对糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,从而了解基于此方面的作用机制,为临床应用三黄益肾胶囊治疗糖尿病肾病提供理论依据。方法:将60只清洁级成年雄性Wistar大鼠随机分为两组,正常组10只,造模组50只。造模组大鼠禁食12h后,一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)60mg/kg(STZ临用前用0.1M柠檬酸钠缓冲液配成浓度为1%、pH=4.2的溶液),正常组腹腔注射等量的柠檬酸钠缓冲液。72h后尾静脉取血,血糖值≥16.7mmol/L,确定为糖尿病大鼠。造模成功后大鼠随机抽取40只,分为模型组(10只)及三黄益肾胶囊低剂量治疗组(10只)、三黄益肾胶囊中剂量治疗组(10只)、三黄益肾胶囊高剂量治疗组(10只)。成模后一周,中药治疗组剂量按人体-大鼠体表面积比值表换算出大鼠的等效剂量。三黄益肾胶囊低剂量治疗组给予0.4g/(kg·d)灌胃、三黄益肾胶囊中剂量治疗组给予0.8g/(kg·d)灌胃、三黄益肾胶囊高剂量治疗组给予1.6g/(kg·d)灌胃,每日灌胃1次,连续8周。正常组和模型组每日给予同等剂量生理盐水灌胃。实验期间大鼠自由饮水,喂标准饲料,环境温度为22℃~26℃,湿度45%-65%,实验期间未使用胰岛素和其它降糖药物。给药8周后,尾静脉取血测血糖。腹腔注射麻醉大鼠,腹部正中切口,腹主动脉采血,离心分离血清。全自动生化分析仪检测血清甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)、肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、血清C反应蛋白(CRP)。大鼠取血后取双肾,去除肾包膜及肾门结缔组织并用生理盐水洗净后称重,得出肾重/体重指数(肾重/体重×1000)。将肾脏切割成小于0.5cm×0.5cm×0.1cm的组织块,置于4%中性福尔马林溶液中固定、脱水、石蜡包埋、切片厚4μm,采用免疫组织化学法检测mmp-9及tnf-α,苏木精-伊红(hematoxylin-eosinstaininghe)染色在光镜下观察肾小球及肾小管间质的病理变化。应用spss16.0分析软件进行统计处理,检验水准α=0.05。计量资料数据以?x±sd表示,组间比较采用单因素方差分析,组内治疗前后比较采用配对t检验。计数资料用x2检验。结果:1大鼠一般状态的影响正常组大鼠毛色纯白,精神状态良好,饮水量、进食量及尿量均正常,动作灵活。各糖尿病组大鼠毛色晦暗无光泽,明显消瘦,精神状态较差,饮水量、进食量及尿量明显增多,活动减少。2体重的变化造模前各组大鼠的体重相比无差异(p0.05);治疗前,与正常组相比,模型组及三黄益肾胶囊低、中、高剂量治疗组体重无明显变化(p0.05),模型组及三黄益肾胶囊低、中、高剂量治疗组间大鼠体重均无明显差异(p0.05);经灌胃治疗8周后,与正常组相比,模型组及三黄益肾胶囊低、中、高剂量治疗组体重明显降低(p0.05),模型组及三黄益肾胶囊低、中、高剂量治疗组间体重比较无差异(p0.05);正常组大鼠治疗后体重比治疗前明显增加(p0.05),模型组及三黄益肾胶囊低、中、高剂量治疗组间大鼠治疗后体重比治疗前明显降低(p0.05)。3对肾重/体重比的影响经灌胃治疗8周后,与正常组比较,模型组及三黄益肾胶囊低、中、高剂量治疗组肾重/体重比明显升高(p0.05);与模型组比较,三黄益肾胶囊低剂量治疗组肾重/体重比无明显差别(p0.05);中、高剂量治疗组肾重/体重比明显降低(p0.05);与三黄益肾胶囊低剂量治疗组比较,中、高剂量治疗组肾重/体重明显降低(p0.05);中、高剂量治疗组比较肾重/体重比无明显差别(p0.05)。4生化指标的影响4.1血糖的影响治疗前糖尿病各组大鼠血糖与正常组比较,均明显升高(p0.05),而糖尿病各组间血糖差异无统计学意义(p0.05),具有可比性。经灌胃治疗8周后,各组治疗前后血糖相比变化无明显差异(p0.05);模型组及三黄益肾胶囊低、中、高剂量治疗组组间对比变化无明显差异(p0.05),与正常组相比较有显著差异(p0.05)。4.2血清胆固醇、甘油三脂的影响8周后,与正常组比较,模型组、治疗组各组大鼠血清甘油三脂、胆固醇水平明显升高(p0.05)。三黄益肾胶囊低、中、高剂量治疗组与模型组比较,甘油三脂、胆固醇水平无明显差异(p0.05)。模型组、三黄益肾胶囊低、中、高剂量治疗组间比较胆固醇、甘油三脂无明显差异(p0.05)。三黄益肾胶囊低剂量治疗组与三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组比较,甘油三脂、胆固醇水平无明显差异(p0.05)。三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组间比较,甘油三脂、胆固醇水平无明显差异(p0.05)。4.3血清肌酐、尿素氮的影响8周后,与正常组比较,模型组大鼠血清肌酐、尿素氮水平明显升高(p0.05);三黄益肾胶囊低剂量治疗组血清肌酐、尿素氮水平明显升高(p0.05);三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组血清肌酐、尿素氮水平无明显差异(p0.05)。与模型组比较,三黄益肾胶囊低剂量治疗组血清肌酐、尿素氮水平无明显差异(p0.05);三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组血清肌酐、尿素氮水平明显降低(p0.05)。与三黄益肾胶囊低剂量治疗组比较,三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组血清肌酐、尿素氮水平有明显差异(p0.05)。三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组间比较,血清肌酐、尿素氮水平无明显差异(p0.05)。4.4血清超敏c反应蛋白的影响8周后,与正常组比较,模型组大鼠血清c反应蛋白水平明显升高(p0.05);三黄益肾胶囊低剂量治疗组血清c反应蛋白水平明显升高(p0.05);三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组血清c反应蛋白水平无明显差异(p0.05)。与模型组比较,三黄益肾胶囊低剂量治疗组血清c反应蛋白水平无明显差异(p0.05);三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组血清c反应蛋白水平明显降低(p0.05)。与三黄益肾胶囊低剂量治疗组比较,三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组血清c反应蛋白水平明显降低(p0.05)。三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组间比较,血清c反应蛋白水平无明显差异(p0.05)。5大鼠肾脏mmp-9及tnf-α的影响mmp-9在正常大鼠肾脏正常表达,与正常组大鼠比较,模型组表达明显降低(p0.05);三黄益肾胶囊低剂量治疗组表达明显降低(p0.05);三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组表达无明显差异(p0.05)。与模型组大鼠比较,三黄益肾胶囊低剂量治疗组表达无明显差异(p0.05);中、高剂量治疗组表达明显升高(p0.05)。与三黄益肾胶囊低剂量治疗组比较,中、高剂量治疗组表达明显升高(p0.05)。三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组间比较,表达无明显差异(p0.05)。tnf-α在正常大鼠肾脏有少量表达,与正常组大鼠比较,模型组表达明显升高(p0.05);三黄益肾胶囊低剂量治疗组表达明显升高(p0.05);三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组表达无明显差异(p0.05)。与模型组比较,三黄益肾胶囊低剂量治疗组表达无明显差异(p0.05);三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组表达明显降低(p0.05)。与三黄益肾胶囊低剂量治疗组比较,三黄益肾胶囊中、高剂量治疗表达明显降低(p0.05)。三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组组间比较无明显差异(p0.05)。6肾脏组织病理学的观察光镜下显示,正常组大鼠肾脏肾小球、肾小管结构正常,肾间质无炎性细胞浸润,血管无扩张充血;模型组肾小球内皮细胞肿胀、系膜细胞增多;肾小管上皮肿胀,甚至坏死;肾间质有炎性细胞浸润,血管扩张充血。三黄益肾胶囊低剂量治疗组大鼠肾小球系膜细胞及基质轻度弥漫性增生,局灶节段性加重,内皮细胞增生、肿胀,基底膜空泡变性;肾小管上皮空泡及颗粒变性,灶状萎缩,肾间质灶状淋巴单核细胞浸润,灶状纤维化,小动脉管壁轻度增厚,与模型组比较无明显变化。三黄益肾胶囊中、高剂量治疗组肾小球系膜细胞及基质轻度节段性增生,上皮细胞未见著变;肾小管上皮空泡及颗粒变性,未见萎缩,肾间质小灶淋巴单核细胞浸润,未见纤维化,小动脉管壁未见增厚,但中、高剂量组间比较无明显差异。结论:1三黄益肾胶囊对紊乱的糖脂代谢无治疗作用。2三黄益肾胶囊能够降低血尿素氮、肌酐、血清c反应蛋白的水平。3三黄益肾胶囊能够抑制mmp-9在肾脏表达的下降,抑制tnf-α在肾脏的表达,减轻糖尿病大鼠肾脏的肥大。4本实验表明三黄益肾胶囊中、高剂量对糖尿病肾病有治疗作用,而中、高剂量治疗结果组间无明显差异,说明其治疗作用存在剂量依赖性,但不存在线性关系,从药物经济学的角度考量,中剂量为临床上合适的治疗剂量。5本实验复制的糖尿病大鼠模型8周后血尿素氮、肌酐升高,血清CRP明显升高,肾脏MMP-9表达降低,TNF-α表达升高,但经三黄益肾胶囊治疗8周后血尿素氮、肌酐明显下降,肾损害减轻,血清CRP明显下降,肾脏MMP-9表达上升,TNF-α表达下降,从而表明三黄益肾胶囊通过以上机制延缓糖尿病大鼠的肾脏损害。
【关键词】：糖尿病肾病 三黄益肾胶囊 基质金属蛋白酶-9(MMP-9) 肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 血清C反应蛋白(CRP)
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 中文摘要4-9
• 英文摘要9-16
• 英文缩写16-17
• 前言17-18
• 材料与方法18-21
• 结果21-25
• 附图25-35
• 附表35-40
• 讨论40-44
• 结论44
• 参考文献44-47
• 综述 中医药治疗糖尿病肾病的研究进展47-54
• 参考文献51-54
• 致谢54-55
• 个人简历55

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