基于微透析技术的青藤碱家兔关节腔局部药动学的可行性研究

发布时间：2017-08-31 01:27

  本文关键词：基于微透析技术的青藤碱家兔关节腔局部药动学的可行性研究

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【摘要】：探索微透析探针的最佳植入部位和植入方法,建立了家兔膝关节腔中微透析探针的植入方法。考察不同影响因素对探针回收率和损失率的影响,为进行青藤碱体内微透析实验提供参考依据。探索微透析技术应用于家兔关节局部药动学研究的可行性,建立了以微透析技术为核心的家兔关节腔局部药动学的关键技术和研究方法,为后续探讨青藤碱外用制剂关节炎局部药动学及药效学研究奠定方法学基础。本课题的研究内容主要包括以下四部分：1.透析液中青藤碱定量分析方法的建立及确证建立透析液中青藤碱的UPLC测定方法。色谱柱：ACQUITY UPLC HSS C18 (2.1mm X 50 mm,1.8μm);流动相组成：乙腈：水：乙二胺(30：70：0.25)；流速：0.3 ml·min-1;检测波长：265nm；柱温：30℃。进行了标准曲线绘制、线性范围考察、精密度及稳定性实验等。在此色谱条件下,青藤碱峰形对称,出峰保留时间为1.7min左右。课题组建立的透析液中青藤碱UPLC检测方法可以将青藤碱与灌流液峰分离良好,并且青藤碱在检测要求范围内线性关系良好,色谱的专属性、精密度等测定结果均符合实验要求,证明该方法可用。2.家兔关节腔徽透析探针植入方法的建立对实验动物模型家兔的各关节进行解剖,观察各关节的骨骼、韧带及肌肉等生理结构,记录各关节的解剖学特征,选择合适的微透析探针,并确定探针的植入部位和植入点,建立微透析探针的植入方法,并用X-射线检查探针活性透析膜在关节腔中的位置。确定了家兔的后膝关节和膝关节外侧膝眼作为微透析探针的植入部位和植入点。购买了瑞典CMA公司特制的CMA/20线性微透析探针,使用的是与探针配套的CMA系列的微透析装置。在注射针头和撕裂管的导引下,将微透析探针按照膝关节外侧膝眼处水平方位穿刺法植入到家兔的关节腔中。通过X-射线检查后,证明了所建立的探针的植入方法可以将探针的活性透析膜精准的落在膝关节的腔隙中。该植入方法具有较好的可行性,并在对关节的局部药动学研究中比其他的植入方法更有优势。3.青藤碱微透析取样方法的建立采用增量法(正透析法)和减量法(反透析法)测定青藤碱微透析探针的体外回收率和损失率,探讨二者之间的关系,考察反透析法用于测定青藤碱微透析探针体内回收率的可行性；考察灌流速度、浓度、温度等不同因素对探针体外回收率的影响；考察了青藤碱微透析探针体内、外回收率在14h内的稳定性以及相互之间存在的关系。建立了青藤碱体内微透析实验的取样方法,为了证明可以将微透析技术应用在关节局部药动学的研究提供有力依据。在其他条件恒定不变时,增量法测定的探针回收率与减量法测定的损失率近似相等,符合应用反透析法的前提条件,证明了在进行青藤碱体内微透析实验时可以使用反透析法来校正探针的体内回收率。在保持药液浓度不变的条件下,探针的回收率和损失率均是随着灌流速度的加快而呈下降的趋势；灌流液中药物浓度的变化对回收率几乎无影响：探针的回收率与灌流液中乙醇的浓度百分比和温度呈现一定的线性关系；探针的体外回收率和损失率在14h内相对稳定,高、低浓度灌流液下的探针的体内回收率在14h内也是相对稳定的。确定了青滕碱体内微透析取样参数：灌注速度为2μL·min-1,取样的间隔时间为1h,透析液取样体积为120 μL。4.基于微透析技术的健康家兔关节局部药动学的可行性研究家兔在麻醉状态时进行关节微透析的预处理,将自制的青藤碱凝胶涂抹于家兔的膝关节,将微透析探针按照建立的植入方法埋植到家兔的关节腔中,收集关节微透析液样品,UPLC测定透析液中青藤碱浓度。使用反透析法测定体内回收率,并对透析液浓度进行校正,同时绘制青藤碱的相关药时曲线,采用DASS2.1.1药动学软件得到药动学参数。反透析法计算出的探针体内回收率为(15.82+2.12)%,3h内探针回收率保持稳定,青藤碱经皮给药后10h内关节微透析液中还可检测到青藤碱的存在,证明了所建立的微透析取样方法可以用于青藤碱关节局部药动学的研究。
【关键词】：微透析技术 青藤碱 超高液相色谱法 关节局部药动学
【学位授予单位】：黑龙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 英汉缩略语对照表7-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-15
• 第一章 文献综述15-29
• 1. 微透析技术基本原理15
• 2. 微透析系统的基本组成15-16
• 3. 微透析探针的种类16
• 4. 微透析技术的特点16-18
• 5. 微透析技术的不足18
• 6. 微透析回收率的重要性及影响因素18-21
• 7. 微透析探针回收率的校正方法21-23
• 8. 微透析采样的分析检测技术23-25
• 9. 微透析技术的应用25-29
• 第二章 透析液中青藤碱定量分析方法的建立及确证29-33
• 1. 仪器与试剂29
• 2. 方法和结果29-32
• 2.1 青藤碱对照品储备液的配制29
• 2.2 青藤碱供试品溶液的制备29-30
• 2.3 色谱条件30
• 2.4 方法的专属性30-31
• 2.5 线性关系考察31
• 2.6 精密度试验31-32
• 2.7 准确度试验32
• 2.8 稳定性试验32
• 2.9 定量限与检测限32
• 3. 结论32
• 4. 讨论32-33
• 第三章 家兔关节腔微透析探针植入方法的建立33-45
• 1 植入部位的可行性分析33-36
• 1.1 器械和试剂33
• 1.2 方法和结果33-35
• 1.2.1 肘关节的解剖学特征33-34
• 1.2.2 踝关节的解剖学特征34
• 1.2.3 膝关节的解剖学特征34-35
• 1.3 结论35
• 1.4 讨论35-36
• 2 植入点的可行性分析36-41
• 2.1 器械和试剂36
• 2.2 方法和结果36-40
• 2.2.1 家兔膝关节的X-射线图37
• 2.2.2 膝关节伸直时对植入点的研究37-38
• 2.2.3 膝关节屈膝状态下进针植入点的研究38-40
• 2.3 结论40-41
• 3 微透析探针植入方法和位置的确定41-44
• 3.1 仪器、试剂、实验动物41
• 3.2 方法和结果41-43
• 3.2.1 探针类型的选择41-42
• 3.2.2 植入方法的建立42
• 3.2.3 探针植入位置的确定42-43
• 3.3 结论43
• 3.4 讨论43-44
• 4 本章总结44-45
• 第四章 青藤碱微透析取样方法建立45-64
• 1 灌流液预处理对微透析探针回收率的影响45-48
• 1.1 仪器和试剂45
• 1.2 方法和结果45-47
• 1.2.1 分析条件45-46
• 1.2.2 含青藤碱生理盐水液的制备46
• 1.2.3 过滤对微透析探针回收率的影响46
• 1.2.4 超声脱气时间对微透析探针回收率的影响46
• 1.2.5 搅拌速率对微透析探针回收率的影响46
• 1.2.6 数据处理46-47
• 1.3 结论47
• 1.4 讨论47-48
• 2 灌流液流速对微透析回收率的影响48-51
• 2.1 仪器和试剂48
• 2.2 方法和结果48-50
• 2.2.1 分析条件48
• 2.2.2 含青藤碱生理盐水液的制备48
• 2.2.3 增量法测定流速对相对回收率RR的影响48-49
• 2.2.4 减量法测定流速对相对损失率RL的影响49
• 2.2.5 数据处理49-50
• 2.3 结论50-51
• 2.4 讨论51
• 3 浓度对探针回收率的影响51-56
• 3.1 仪器和试剂51
• 3.2 方法和结果51-55
• 3.2.1 分析条件51
• 3.2.2 含青藤碱生理盐水液的制备51
• 3.2.3 增量法测定浓度对相对回收率RR的影响51-52
• 3.2.4 减量法测定浓度对相对损失率RL的影响52-53
• 3.2.5 增量法中透析液浓度与介质浓度的关系53-54
• 3.2.6 减量法中灌流液与透析液浓度之差与灌流液浓度的关系54-55
• 3.3 结论55-56
• 4 温度及乙醇浓度对探针回收率的影响56-59
• 4.1 仪器和试剂56
• 4.2 方法和结果56-58
• 4.2.1 分析条件56
• 4.2.2 含青藤碱生理盐水液的制备56
• 4.2.3 温度对探针回收率的影响56-57
• 4.2.4 乙醇浓度对探针回收率的影响57-58
• 4.3 结论58
• 4.4 讨论58-59
• 5 探针回收率的稳定性考察59-61
• 5.1 仪器和试剂59
• 5.2 方法和结果59-61
• 5.2.1 分析条件59
• 5.2.2 含青藤碱生理盐水液的制备59
• 5.2.3 体外相对回收率的稳定性考察59-60
• 5.2.4 体外相对损失率的稳定性考察60
• 5.2.5 高、低浓度下的体内相对损失率的稳定性考察60
• 5.2.6 数据处理60-61
• 5.3 结论61
• 6 体外回收率与体内回收率的关系61-64
• 6.1 仪器和试剂61
• 6.2 方法和结果61-63
• 6.2.1 分析条件61
• 6.2.2 含青藤碱生理盐水液的制备61-62
• 6.2.3 采用增量法测定体外相对回收率RR62
• 6.2.4 采用减量法法测定体外相对损失率RL62
• 6.2.5 采用减量法测定家兔体内相对损失率RL62-63
• 6.2.6 数据处理63
• 6.3 结论63-64
• 第五章 微透析技术应用于青藤碱关节局部药动学采样的可行性研究64-69
• 1. 仪器和试剂64-65
• 2. 方法和结果65-67
• 2.1 色谱条件65
• 2.2 关节局部的药动学研究65-66
• 2.2.1 探针的前处理65
• 2.2.2 家兔关节微透析手术方法65
• 2.2.3 探针植入后的操作65-66
• 2.2.4 关节局部的药动学实验66
• 2.2.5 微透析探针体内回收率校正66
• 2.2.6 探针的后处理66
• 2.3 数据处理66-67
• 3. 结论67
• 4. 讨论67-69
• 全文结论69-70
• 致谢70-71
• 参考文献71-80
• 个人简历80

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：762653