新生大鼠急性高氧肺损伤肺组织中SIRT1、TNF-α的蛋白表达及白藜芦醇的干预作用

发布时间：2017-09-01 23:36

  本文关键词：新生大鼠急性高氧肺损伤肺组织中SIRT1、TNF-α的蛋白表达及白藜芦醇的干预作用

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【摘要】：目的:1.研究新生大鼠急高氧性肺损伤;2.观察新生大鼠急性高氧肺损伤时肺组织中SIRT1、TNF-α蛋白的表达变化及白藜芦醇对二者表达的影响,并初步探讨白藜芦醇对急性高氧肺损伤的保护作用。方法:将108只出生满48小时的新生SD大鼠(雌雄不限),体重9-10g,按照随机原则分为三组:I组--空气组(空气+二甲基亚砜溶液,n=36);II组--高氧组(高氧+二甲基亚砜溶液,n=36);III组--白藜芦醇干预组(高氧+白藜芦醇溶液,n=36);I组新生大鼠置于常压空气中饲养,II组、III组新生大鼠置于氧浓度维持在90-95%的自制氧箱中饲养,时长均为7天。I组与II组于实验第一天起定时腹腔注射(100%二甲基亚砜,即DMSO100ul,0.9%生理盐水1.9ml)5ml/kg.次,每日一次。III组于实验第一天起定时腹腔注射白藜芦醇50mg/kg,即(分析纯白藜芦醇20mg,100%DMSO100ul,0.9%生理盐水1.9ml)5ml/kg.次,每日一次。每组动物按实验时间点分为1天、3天、7天三个亚组,每组于各实验时间点分别随机选取12只实验大鼠,麻醉处死后取材并完成以下指标的检测:(1)肺泡灌洗液中总蛋白的含量;(2)肺湿/干重之比值(W/D):选取左肺,称其湿重和干重,算出肺湿/干重比;(3)观察肺组织病理学情况:选取部分肺组织对其进行病理切片,以观察肺组织的病理改变;(4)肺组织SIRT1及TNF-α蛋白含量测定:选取右下肺,制成肺组织匀浆并提取蛋白,采用蛋白印记法对其蛋白含量分别加以测定。(5)结果:1.各组实验动物一般情况观察:i组中各实验动物精神反应佳,皮毛光泽,饮食正常,活动灵活,体重涨势良好。ii组中各实验动物高氧暴露第1天,反应好,唇色红润,脱离氧气后无呼吸困难,第3天起出现精神反应差,饮食减少,呼吸稍快,随着吸氧时间延长,到第7天时,出现明显的精神萎靡,皮毛无光泽,少食少动,脱离氧气后烦躁不安,呼吸频率加快,鼻唇发绀,体重增长缓慢。iii组的实验动物一般情况较ii组实验动物有所改善。2.肺组织病理学改变:i组新生大鼠随着日龄的增加,肺逐渐发育成熟,肺泡大小逐渐趋于一致,肺泡间隔逐渐变薄,肺泡毛细血管丰富,无炎症渗出和出血。ii组实验动物于高氧暴露1天时可见肺泡数量较多,结构仍较完整,肺泡腔内出现少许红细胞,肺泡壁增厚;3天后可见明显肺组织炎性改变,肺毛细血管扩张、充血,肺泡腔扩大,腔内可见坏死细胞、炎性细胞渗出、红细胞,肺泡间隔轻度增宽且水肿,肺间质细胞增多;7天时炎症反应进一步加重,肺实质结构紊乱,肺泡结构简单,肺泡腔大小不一,部分肺泡融合,肺泡数目明显减少,肺泡内可见大量的红细胞,肺泡间隔有较多炎性细胞浸润。iii组的肺组织病理改变较ii组明显减轻,主要表现为炎性细胞、红细胞渗出减少。3.肺组织湿/干重比(w/d):(1)组内比较:在各个时间点,i、iii组动物肺组织w/d无明显差异(p0.05);ii组动物随着高氧暴露时间延长,w/d逐渐升高,差异有统计学意义。(2)组间比较:实验1天时,各组实验动物的肺组织w/d无明显差异(p0.05)。实验3天、7天时,ii组实验动物的肺组织w/d较i组升高,差异有统计学意义(p0.05),iii组实验动物的肺组织w/d较i组无明显升高,与ii组相比则明显降低,差异有统计学意义(p0.05)。4.支气管肺泡灌洗液(blaf)中总蛋白(tp)含量测定:(1)组内比较:在各个时间点,i、iii组动物肺组织blaf中tp含量无显差异(p0.05);ii组动物随着高氧暴露时间延长,w/d均逐渐上升,差异有统计学意义。(2)组间比较:实验1天时,三组实验动物blaf中tp含量无明显差异(p0.05);而实验3天及7天时,ii组实验动物的blaf中tp含量明显高于Ⅰ组,差异有统计学意义(p0.05);iii组的blaf中tp含量较i组无明显升高,与ii组相比则明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。5.肺组织中SIRT1及TNF-α蛋白表达水平的变化:western blotting检测结果表明:(1)组内比较:在各个时间点,I组动物肺组织SIRT1、TNF-α表达无显差异(P0.05)。II、III组动物随着高氧暴露时间延长,肺组织SIRT1表达逐渐下降,差异有统计学意义;肺组织TNF-α表达逐渐上升,差异有统计学意义。(2)组间比较:各组实验动物肺组织中的SIRT1及TNF-α的蛋白表达水平在实验第1天无显著差异(P0.05);实验第3天及第7天时,II组SIRT1的蛋白表达水平较Ⅰ组明显下降(P0.05),TNF-α的蛋白表达水平较Ⅰ组明显升高(P0.05);III组肺组织中的SIRT1的蛋白表达较Ⅰ组下降(P0.05),但明显高于II组(P0.05),TNF-α的蛋白表达较Ⅰ组升高(P0.05),但明显低于II组(P0.05)。结论:(1)暴露于高浓度氧气可导致新生大鼠急性肺损伤,且随着暴露时间的延长,肺损伤进行性加重。主要的病理表现为肺组织局部充血水肿、炎症渗出、肺泡内出血、肺泡腔扩大、肺泡数目减少、肺组织结构紊乱等。(2)新生大鼠急性高氧肺损伤时,肺组织中TNF-α蛋白表达水平明显升高,且且高氧暴露越久,升高越明显;而SIRT1蛋白表达水平明显下降,且高氧暴露越久,降低越明显。提示SIRT1及TNF-α可能参与了高氧肺损伤的发病。(3)白藜芦醇在急性肺损伤后可能通过上调SIRT1蛋白表达水平,下调炎性因子TNF-α的表达,从而减轻肺损伤程度,对高氧性的肺损伤起到保护作用。
【关键词】：高氧肺损伤 新生大鼠 白藜芦醇 去乙酰化酶 肿瘤坏死因子α
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R722.1
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-23
• 结果23-29
• 讨论29-35
• 结论35-36
• 参考文献36-40
• 附录40-43
• 综述43-50
• 参考文献47-50
• 英汉双解缩略词表50-51
• 致谢51-52

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本文编号：775111