高迁移率族蛋白1介导的炎症反应在动脉粥样硬化进展的作用及机制研究

发布时间：2017-09-06 02:08

  本文关键词：高迁移率族蛋白1介导的炎症反应在动脉粥样硬化进展的作用及机制研究

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【摘要】：研究背景与目的：动脉粥样硬化炎症是导致斑块进展及斑块不稳定的重要因素。高迁移率族蛋白1(HMGB1)可以通过多条途径促进炎症发展。本研究的目的是研究探讨HMGB1介导的炎症对斑块进展的作用及机制。方法：(1)8周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠12只以及C57BL/6系ApoE-/-雄性小鼠12只分别作为对照组及实验组,每组分为两个亚组,早中期组(10周高脂饮食)及晚期组(20周高脂饮食)。10周、20周后处死小鼠,主动脉窦冰冻切片用于油红O染色评估斑块大小,巨噬细胞免疫组化染色用于定位巨噬细胞;主动脉窦石蜡切片用于HMGB1 免疫组化染色检测HMGB1表达。(2)ApoE-/-雄性小鼠14只随机分为对照组及实验组.实验组每日给予腹腔注射HMGB1 抑制剂丙酮酸乙酯(EP,50mg/Kg),对照组每日给予等量生理盐水。12周高脂饮食后,麻醉处死小鼠,血清测定血脂水平,主动脉窦冰冻切片用于油红O染色评估斑块大小,巨噬细胞免疫组化染色用于评估巨噬细胞含量;HMGB1 免疫组化染色及western blot用于检测HMGB1表达。RT-qPCR检测HMGB1受体TLR2、TLR4,单核细胞趋化因子MCP-1和肿瘤坏死因子TNF-a的mRNA表达水平。(3)THP-1细胞经佛波酯(PMA, 100ng/ml)刺激分化为巨噬细胞,分别与oxLDL (50mg/L)及oxLDL (50mg/L)+EP (5mmol/L)共培养24h后取细胞爬片油红O染色评估脂质吞噬情况,免疫组化评估HMGB1在细胞内表达情况,RT-qPCR检测炎症因子白细胞介素1β (IL-1β)。结果：(1) HMGB1在正常小鼠主动脉中主要表达在内皮细胞胞核,在ApoE-/- 小鼠主动脉动脉粥样硬化斑块中,主要表达在内皮细胞、巨噬细胞,平滑肌细胞胞核亦有表达;早中期动脉粥样硬化的HMGB1的表达高于晚期动脉粥样硬化HMBG1的表达(0.05±0.007 vs.0.02±0.005,P0.05)：晚期动脉粥样硬化斑块面积比高于早中期动脉粥样硬化斑块面积比(0.40+0.03 vs.0.25±0.02,P0.05)。(2)HMGB1表达抑制组HMGB1表达减少85%, HMGB1表达抑制组斑块面积(289845±26450μm2 vs.499247±45880μm2, P0.05)及斑块面积比(22.7%±2.1%vs.39.1%±3%,P0.05)明显减少,斑块内巨噬细胞含量降低(11.3%±8%vs.39.24%±13.85%.P0.05), TLR2、TLR4、MCP-1、TNF-α mRNA的表达水平分别降低59%,39%,47%,45%。(3)oxLDL可以诱导巨噬细胞表达HMGB1及IL-1β,丙酮酸乙酯能够抑制oxLDL诱导的巨噬细胞HMGB1及IL-1β的表达,可减少巨噬细胞吞噬脂质(4.89%±0.8%vs.8.44%±1.2%,,P0.05)。结论：(1)HMGB1在斑块组织中高表达,HMGB1在动脉粥样硬化斑块中主要表达于内皮细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞;早中期HMGB1的表达高于晚期。(2)HMGB1介导的炎症促进了斑块的发展及加重了斑块内炎症。(3)泡沫细胞高表达HMGB1,抑制HMGB1可以抑制oxLDL诱导的巨噬细胞炎症反应及脂质吞噬。
【关键词】：动脉粥样硬化 高迁移率重组蛋白1 炎症 巨噬细胞
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R543.5
【目录】：

• 英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-11
• 第一部分 高迁移率族蛋白1在小鼠动脉粥样硬化板块中的分布及表达11-20
• 1. 实验资料及方法11-16
• 2. 结果16-19
• 3. 讨论19-20
• 第二部分 抑制高迁移率族蛋白1对小鼠动脉粥样硬化斑块进展的影响20-33
• 1. 实验材料及方法20-28
• 2. 结果28-32
• 3. 讨论32-33
• 第三部分 HMGB1对巨噬细胞的功能影响33-40
• 1. 实验材料及方法33-36
• 2. 结果36-38
• 3. 讨论38-40
• 结论40-41
• 参考文献41-44
• 综述44-59
• 参考文献49-59
• 研究生期间发表文章情况59-60
• 致谢60

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本文编号：801525