母体能量水平对梅山和约克夏胎猪及生后卵巢发育的影响

发布时间：2017-09-07 07:01

  本文关键词：母体能量水平对梅山和约克夏胎猪及生后卵巢发育的影响

  更多相关文章： 梅山猪 约克夏猪 能量水平 卵巢 发育

【摘要】：卵巢发育与母猪的繁殖年限密切相关,适当的饲粮能量水平调控卵泡健康发育是保证母猪适时发情、受胎、并提高产仔数的基础。原始卵泡作为卵巢发育的起点,在胎儿期已形成。为弄清胎儿期具有时间依赖性的功能蛋白对卵巢发育的作用及母体能量水平对胎猪卵巢发育的影响,本研究比较了梅山猪和约克夏猪胎儿卵巢发育以及其对母体饲粮能量水平敏感性的差异,并在此基础上进一步研究了母体能量水平对后代(生前、生后)卵巢健康发育的影响,本研究包括以下三部分：试验一梅山和约克夏胎猪卵巢发育的差异研究本试验旨在比较梅山猪和约克夏猪胎儿卵巢发育过程中调控原始卵泡形成和转化为次级卵泡时的关键蛋白表达。试验分别选取日龄、体重相近的纯种梅山(72.58±0.73kg)和约克夏(135.73±0.54kg)初产母猪各8头,分别用同一头纯种梅山和约克夏公猪精液人工授精,配种后分别参照中国猪饲养标准(2004)和NRC(2012)配制梅山和约克夏母猪妊娠期饲粮。妊娠0-30天,每头母猪每天饲喂2kg；31-90天,每天饲喂2.4kg。妊娠第55天每个品种随机选择4头母猪深度麻醉后屠宰,剩余母猪于妊娠第90天屠宰,收集雌性胎猪卵巢,利用双向荧光差异凝胶电泳结合质谱分析的方法考察两个品种卵巢蛋白表达差异。结果显不：1.电泳结果：1)妊娠第55天,两个品种胎儿卵巢有1551个差异蛋白点,约克夏较梅山胎猪卵巢共计14个蛋白上调,13个蛋白下调(约克夏/梅山1.6,梅山/约克夏1.6,P0.05蛋白点27个)。2)妊娠第90天,两个品种胎儿卵巢中存在1400个差异蛋白点,约克夏较梅山胎猪卵巢共计7个蛋白上调,9个蛋白下调(约克夏/梅山1.6,梅山/约克夏1.6,P0.05蛋白点16个)。2.质谱分析结果：1)妊娠第55天,约克夏胎猪卵巢表达上调蛋白主要参与原始卵泡组装,如肌动蛋白、抗胰蛋白酶、波形蛋白；梅山胎猪卵巢表达上调蛋白为原始卵泡形成前的相关蛋白,如丝氨酸/苏氨酸蛋白质磷酸酶2调节亚基1β、丝氨酸/苏氨酸蛋白质磷酸酶2调节亚基1α等。2)妊娠第90天,约克夏胎猪卵巢表达上调的蛋白主要参与应激反应,如热休克蛋白；梅山胎猪卵巢表达上调蛋白为调节原始卵泡向初级卵泡转化相关的蛋白,如甲胎蛋白、转铁蛋白等。以上结果表明：梅山和约克夏胎猪卵巢发育过程中,梅山猪卵巢原始卵泡形成时间较晚,但是梅山胎猪于原始卵泡向初级卵泡转化阶段卵巢发育潜能优于约克夏猪。试验二母体能量水平对不同品种胎猪卵巢发育的影响本试验旨在考察母体能量水平对约克夏猪和梅山猪胎儿卵巢发育的影响。试验选取日龄、体重相近的纯种约克夏(135.54±0.66kg)和梅山(72.84±0.66kg)初产母猪各16头,分别用同一头纯种约克夏和梅山公猪精液人工授精,配种后约克夏母猪分别饲喂能量水平为3.4Mcal/kg、3.0Mcal/kg饲粮；梅山母猪饲喂能量水平为3.OMcal/kg、2.6Mcal/kg饲粮,饲喂量及饲喂方式同试验一。妊娠第55,90天时,每组随机选择4头母猪深度麻醉后屠宰,收集雌性胎猪卵巢,首先通过蛋白组学技术,测定约克夏3.OMcal/kg组以及梅山2.6Mcal/kg组卵巢样品,进而分析同一品种不同时间点卵巢发育差异蛋白,明确不同时间点特征性蛋白表达规律,并进一步考察能量水平对特征蛋白mRNA表达的影响。结果显示：1.蛋白组学分析结果：1)约克夏猪妊娠第55天与妊娠第90天相比胎儿卵巢有1551个差异蛋白点,其中25个蛋白上调,18个蛋白下调(55d/90d1.6,90d/55d1.6,P0.05的蛋白点43个)；质谱分析结果显示妊娠55天约克夏胎猪卵巢上调的蛋白主要有甲胎蛋白、抗胰蛋白酶、波形蛋白等,妊娠90天高表达的主要为凝溶胶蛋白、78葡萄糖调节蛋白等。2)梅山猪妊娠第55天与妊娠第90天相比胎儿卵巢有1740个差异蛋白点,其中15个蛋白上调,12个蛋白下调(55d/90d1.6,90d/55d1.6,P0.05的蛋白点27个)；质谱分析结果显示妊娠55天梅山胎猪卵巢显著上调的蛋白主要包括甲胎蛋白、肽脯氨酰顺反异构酶等；妊娠90天胎猪显著上调的蛋白主要为抗胰蛋白酶、凝溶胶蛋白等。2.基因表达结果：1)与低能量水平组相比,约克夏猪妊娠期母体饲喂高能量水平饲粮,显著降低了妊娠55天胎儿卵巢中调控原始卵泡形成的关键蛋白抗胰蛋白酶、甲胎蛋白mRNA的表达量(P0.05),同时也降低了妊娠90天胎儿卵巢中调控细胞抗应激能力的关键蛋白78葡萄糖调节蛋白以及调控原始卵泡向初级卵泡转化的重要蛋白凝溶胶蛋白mRNA的表达量(P0.05)。2)妊娠55天,母体饲喂不同能量水平饲粮对梅山胎猪卵巢原始卵泡形成的关键蛋白如抗胰蛋白酶、甲胎蛋白等的表达量无显著影响,而且妊娠90天母体饲喂不同能量水平饲粮对梅山胎猪卵巢中调控原始卵泡向初级卵泡转化的凝溶胶蛋白以及参与机体炎症反应的关键蛋白肽脯氨酰顺反异构酶的表达量也无显著影响。本试验结果表明：母体高能量水平通过影响调控原始卵泡形成、原始卵泡向初级卵泡转化以及细胞抗应激能力等基因的表达,不利于约克夏胎猪卵巢发育；母体摄入不同能量水平饲粮不影响梅山猪胎儿卵巢发育。试验三母体妊娠期饲粮能量水平对后代卵巢健康的影响本试验旨在考察母体能量水平对约克夏猪后代卵巢发育过程中氧化应激、卵泡发育的影响。24头约克夏妊娠母猪高、低能量水平饲喂,前期处理(妊娠0-90天)与试验二相同,妊娠第90天屠宰后,各处理组余下4头母猪饲喂至分娩,每天饲喂3kg。泌乳期均采食相同饲粮,仔猪断奶后每窝选择6头雌性仔猪,按猪场后备母猪常规饲养管理方式饲养。母猪妊娠第55天、90天每组随机选择4头母猪屠宰并分别收集胎儿卵巢,子代母猪160天和初情时,每窝均选择平均体重的1头母猪屠宰并分别收集子代母猪卵巢样品,测定相关指标。结果显示：1.母体妊娠期高能量水平降低子代160天时大卵泡数目、肝脏重量以及初情阶段小卵泡数目(P0.05)。2.与妊娠期低能量水平组相比,母体高能量水平提高了妊娠90天胎猪卵巢丙二醛含量(P0.05),降低了总超氧化物歧化酶(P0.01)、CuZn-超氧化物歧化酶(P0.05)、谷胱甘肽还原酶(P=0.05)、谷胱甘肽过氧化物酶(P0.05)以及总抗氧化能力(P0.05)的酶活；妊娠期母体高能量水平降低子代后备母猪160天阶段时卵巢中总超氧化物歧化酶活力(P0.05)、谷胱甘肽过氧化物酶(P0.05)以及总抗氧化能力(P0.05)。3.母体妊娠期高能量水平导致妊娠90天胎猪卵巢中B细胞淋巴瘤因子2 (B-cell lymphoma-2, BCL2)等促凋亡相关因子mRNA相对表达量高于低能组(P0.05),程序性死亡调节因子(Bcl-2 Assaciated X protein, BAX)等凋亡抑制因子低于低能组(P0.05)。后备母猪160天时BAX的mRNA相对表达量低能组高于高能组(P0.05),同时,BCL2的mRNA相对表达量在160天和初情时低能组均低于高能组(P0.05)。本试验结果表明：妊娠期母体摄入高能量水平饲粮加剧了子代卵巢氧化应激和细胞凋亡,降低卵泡数目,不利于后代卵巢健康。综上所述,梅山胎猪原始卵泡形成时间晚于约克夏猪,但是梅山胎猪卵巢发育潜能优于约克夏猪,有利于原始卵泡向初级卵泡转化。母体妊娠期高能量水平对梅山胎猪卵巢发育无影响；母体妊娠期高能量水平加剧了约克夏胎猪和生后卵巢氧化应激水平和细胞凋亡,不利于其胎儿卵巢发育并影响后代卵巢健康。由此表明梅山猪和约克夏猪卵巢发育对饲粮能量具有不同的敏感性。
【关键词】：梅山猪 约克夏猪 能量水平 卵巢 发育
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S828
【目录】：

• 中文摘要5-9
• Abstract9-14
• 缩写词符号14-18
• 前言18-19
• 第一部分 文献综述19-26
• 1 猪卵巢发育和功能19-20
• 1.1 猪卵巢发育历程19-20
• 1.2 不同品种猪卵巢发育历程比较20
• 1.3 猪卵巢的功能20
• 2 营养水平对梅山和约克夏母猪卵巢发育的影响20-22
• 2.1 蛋白水平对梅山和约克夏母猪卵巢发育的影响21
• 2.2 饲喂水平对梅山和约克夏母猪卵巢发育的影响21-22
• 2.3 能量水平对梅山和约克夏母猪卵巢发育的影响22
• 3 母体营养对后代卵巢发育的影响22-24
• 4 营养水平通过氧化应激影响卵巢发育的机制24-25
• 4.1 氧化应激的发生及其危害24
• 4.2 营养水平对氧化应激的影响24
• 4.3 氧化应激对卵巢发育的影响24-25
• 5 有待研究的问题25-26
• 第二部分 研究目的、意义、内容和技术路线26-28
• 1 研究目的26
• 2 研究意义26
• 3 研究内容26-27
• 4 技术路线27-28
• 第三部分 试验研究28-71
• 试验一 梅山和约克夏胎猪卵巢发育的差异研究28-41
• 1 材料和方法28-31
• 1.1 主要仪器设备28-29
• 1.2 主要试剂29
• 1.3 试验设计29
• 1.4 饲养管理29
• 1.5 样品收集29
• 1.6 蛋白组学分析29-31
• 2 结果与分析31-37
• 2.1 差异蛋白表达31-35
• 2.2 差异蛋白功能分类35-37
• 3 讨论37-40
• 4 小结40-41
• 试验二 母体能量水平对不同品种胎猪卵巢发育的影响41-56
• 1 材料和方法41-45
• 1.1 试验设计41-42
• 1.2 试验饲粮42-43
• 1.3 饲养管理43
• 1.4 样品收集43
• 1.5 指标测定及方法43-45
• 1.5.1 蛋白组学分析43
• 1.5.2 卵巢组织基因表达分析43-45
• 1.6 数据分析45
• 2 结果与分析45-52
• 2.1 品种内不同时间点差异蛋白的表达45-50
• 2.2 母体能量水平对胎猪卵巢中基因mRNA表达量影响50-52
• 3 讨论52-55
• 4 小结55-56
• 试验三 母体能量水平对后代卵巢发育的影响56-71
• 1 材料与方法56-59
• 1.1 试验设计56-57
• 1.2 饲养管理57
• 1.3 样品收集57
• 1.4 指标测定及方法57-59
• 1.4.1 生产性能57
• 1.4.2 卵巢形态观察57-58
• 1.4.3 卵巢中氧化应激指标测定58
• 1.4.4 卵巢中基因mRNA的表达量检测58-59
• 1.5 数据统计59
• 2 结果与分析59-68
• 2.1 母体能量水平对后代卵泡发育和生长性能的影响59-61
• 2.2 母体能量水平对后代卵巢形态学的影响61-63
• 2.3 母体能量水平后代卵巢氧化应激的影响63-66
• 2.4 母体能量水平对后代卵巢中基因mRNA表达量影响66-68
• 3 讨论68-70
• 4 小结70-71
• 第四部分 全文总体讨论和结论71-73
• 1 总体讨论71-72
• 2 结论72
• 3 本研究的创新点72
• 4 有待进一步研究的问题72-73
• 参考文献73-86
• 致谢86-87
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文87

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本文编号：808075