苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠轴索损伤的改善作用

发布时间：2017-09-07 23:28

  本文关键词：苦参素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠轴索损伤的改善作用

  更多相关文章： 苦参素 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化症 轴索损伤

【摘要】：目的:观察苦参素(Matrine,MAT)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠临床症状、组织病理学的影响,分析大鼠发病过程中的β-淀粉样蛋白(β-Amyloid,Aβ),β分泌酶(B-site APP cleaving enzyme 1,BACE-1),髓磷脂碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP),S100B蛋白(S100B protein,S100B),神经元特异烯醇化酶(neuron specificenolase,NSE),脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达的变化,探究苦参素对EAE轴索损伤的防治效果及作用机制,旨在为多发性硬化症新的用药思路。方法:1建立EAE模型:在无菌条件下,完全弗氏佐剂(含6mg/ml卡介苗)与豚鼠的脊髓匀浆(guinea pig spinal cord homogenate,GPSCH),等体积混合,使用三通连接注射器,反复抽吸制备油包水型抗原乳剂作为抗原,给予30只雌性Wistar大鼠(6~8周龄)背部皮内选取四点抗原乳剂诱导EAE模型。自免疫当天起,观察并记录大鼠体重变化、活动能力变化、临床症状及神经功能学评分。2分组及给药:选取40只Wistar大鼠,随机分为四组,选取3组,分别标记为:EAE组(EAE)、MAT组(MAT)、甲强龙组(MET),每组10只。同时有10只健康大鼠作为对照组(Normal)。从免疫当天起,四组大鼠分别给予不同干预措施,其中MAT组每日腹腔注射注射苦参素3.3ml/kg(200mg/kg),MET组每日腹腔注射甲强龙3.3ml/kg(1mg/kg),正常对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水,四组大鼠均连续干预16天。3标本采集:在免疫第17天,应用10%水合氯醛麻醉后,眼眶后取血2ml,制血清备用;预冷生理盐水全身灌流完全后,打开大鼠颅腔,取大鼠左脑标本,用于制作石蜡切片,取右脑立即投入液氮留存备用。4相关指标检测:皮尔苏斯基氏染色(Bielschowsky staining)染色和苏木素-伊红(HE)染色和观察炎性细胞浸润及脱髓鞘情况,免疫组织化学法分析Aβ表达,双夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)检测MBP表达、S100B表达、NSE表达水平,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR法)分析BACE-1 m RNA、BDNF m RNA含量。结果:1发病率情况:每组动物中,未观察到正常组大鼠发病,观察到模型组10只全部发病,观察到MAT组有6只发病,MET组有4只发病。Fisher确切概率分析结果示:Normal组发病率显著低于EAE组(P0.05);MAT组、MET组大鼠发病率均低于EAE组,且之间差异具有统计学意义(P0.05)。2体重变化情况:Normal组大鼠自免疫第2天起平均体重上升,其余三组平均体重总体上均呈现下降趋势。MAT组体重降低幅度显著低于模型组(P0.05),亦低于甲强龙组(P0.05)。3神经功能学评分:本试验中Normal组神经评分一直稳定为0。免疫第17天,EAE组大鼠评分显著高于MAT组和MET组(P0.05)。MAT组和MET组组间平均评分差异无统计学意义(P0.05)。4组织病理学检查情况:EAE组平均炎症浸润评分较正常对照组明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。MAT组平均炎症浸润评分显著低于EAE组(P0.05),差异具有统计学意义。与MAT组相比,MET组平均炎症浸润评分显著性降低(p0.05),差异具有统计学意义。EAE组平均轴索损伤评分较Normal组明显升高,差异具有统计学意义(P0.05)。MAT组均轴索损伤评分显著低于EAE组(P0.05),差异具有统计学意义。与MAT组相比,MET组均轴索损伤评分显著性降低(p0.05)。5大脑中BACE-1,BDNF m RNA的表达:与Normal组相比,EAE组BDNF,m RNA含量显著性降低(P0.05)。MAT组BDNF m RNA表达均较EAE组明显升高(P0.05),MAT组与MET组在BACE-1,BDNF m RNA表达方面均无显著性差异(P0.05)。6大脑皮质Aβ表达:与正常对照组相比,EAE组Aβ含量显著升高(P0.05);两个药物干预组Aβ表达均较模型组显著性降低(P0.05),组间差异具有统计学意义(P0.05)。7血清中MBP,S100B,NSE水平:与Normal组相比,EAE组大鼠血清中MBP,S100B,NSE含量明显升高(P0.05)。MAT干预组MBP,S100B,NSE水平均较EAE组显著性降低(P0.05),MET组在抑制S100B病理性升高方面优于MAT组,差异存在统计学意义(P0.05)。结论:苦参素对Wistar大鼠EAE轴索损伤具有较好的改善作用。
【关键词】：苦参素 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化症 轴索损伤
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文缩略词表11-12
• 1 前言12-14
• 2 材料和方法14-28
• 2.1 材料14-18
• 2.2 方法18-26
• 2.3 统计分析26-28
• 3 结果28-42
• 3.1 发病情况28-31
• 3.2 组织病理学结果31-34
• 3.3 MAT对EAE大鼠生化指标的检测34-42
• 4 讨论42-46
• 4.1 苦参素对EAE大鼠的防治作用42-43
• 4.2 苦参素对EAE大鼠防治作用的机制探讨43-45
• 4.3 苦参素与甲强龙治疗EAE的比较45-46
• 5 结论46-47
• 参考文献47-52
• 综述52-63
• 参考文献59-63
• 个人简历63-64
• 致谢64

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈同度,张昌颖;素食大鼠的贫血现象[J];营养学报;1957年04期

2 陈伟强;赵善广;;自制注射用大鼠固定装置[J];上海实验动物科学;1992年04期

3 肖柳英,林培英,冯昭明,张丹;不同周龄的SD大鼠生理、生化及体重的正常值测定[J];中药新药与临床药理;1996年03期

4 李淑云;简易大鼠灌胃器的制作[J];锦州医学院学报;2001年04期

5 杨明智,陈积圣;一种大鼠抓取与固定的新工具介绍[J];上海实验动物科学;2001年03期

6 戴英,陆群;复方H_(505)对Wistar大鼠外周血的血液流变学指标的影响[J];中国血液流变学杂志;2001年01期

7 韦应波,孙喜庆,曹新生,姚永杰,冯岱雅,杨长斌;+Gz暴露时间对大鼠记忆功能和行为的影响[J];航天医学与医学工程;2003年01期

8 吕学军,郭俊生,李敏,周利梅,张永娟;晕船大鼠体内铁含量的变化[J];中国职业医学;2003年04期

9 汤仁仙,王迎伟,王慧,周峰;201A中药合剂对大鼠抗肾小球基底膜肾炎病变的影响[J];徐州医学院学报;2003年06期

10 孙同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陈伟;介绍一种简易的大鼠保定方法[J];上海实验动物科学;2004年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 尹音;孙振宇;胡敏;李冬霞;;持续性高正加速度对大鼠颞颌关节损伤的作用[A];第八届全国颞下颌关节病学及（牙合）学大会论文汇编[C];2011年

2 祝~=骧;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文编号：810534