还少丹对雌、雄老龄大鼠抗衰老作用的探究

发布时间：2017-09-08 20:49

  本文关键词：还少丹对雌、雄老龄大鼠抗衰老作用的探究

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【摘要】：中医学因其独特的理论体系,在抗衰老领域占重要位置。很多学者开始对中医抗衰老古方进行研究和重新利用。但中药复方的抗氧化、抗衰老机制研究仍然欠深刻,有很多未知需要探讨。本文试图以复方中药“还少丹”为试验药物,分别在细胞和动物水平探究还少丹抗氧化、抗衰老的作用。细胞水平:取4月龄SPF级(Specific pathogen Free,SPF)SD大鼠(Sprague Dawley)14只(雌、雄各半),制备大鼠血清,即载还少丹血清(载药血清)和大鼠空白血清;载药血清、空白血清、胎牛血清以及含有维生素C(VC)的载药血清和胎牛血清分别用于配制相应的培养基,用于体外培养成骨细胞(Rat osteoblast,ROBs);分别检测不同培养环境中ROBs的增殖、周期及mTOR(Mammalian target of rapamyein)的表达量,以期探讨还少丹对ROBs的作用。动物水平:取20月龄SPF级SD大鼠28只(雌、雄各半),随机分为雄性对照组(MC)、雄性还少丹组(MH)、雌性对照组(FC)、雌性还少丹组(FH);给还少丹组灌胃还少丹水溶液,对照组灌胃等量的无菌水,每天灌胃一次,每7天称重一次,并记录;第60天,一次灌两倍剂量的还少丹,末次灌胃1.5-2 h后,腹腔注射戊巴比妥钠,等深度麻醉时:(1)从心脏取血制备血清,检测血清中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase SOD)的活性和丙二醛(Malondialdehyde MDA)的含量;(2)依次打开胸腔、腹腔和颅腔,依次取出心、肝、脾、肺、肾、胃、胰、脑等,迅速放入冰生理盐水中清洗,用滤纸吸干生理盐水后称重、记录,以大鼠脏器重(g)/体重(100 g),计算各脏器系数;(3)分别称取大鼠肝脏和大脑0.1 g(5份),按10%(W:V)加入生理盐水,超声破碎肝和脑组织,制备10%组织匀浆,然后离心并取上清检测肝脏及脑中SOD的活性和MDA的含量;(4)把心、肝、脾、肾、胃、脑组织置于4%甲醛中固定,做石蜡切片并HE染色(hematoxylin-eosin staining),光学显微镜下观察脏器形态。实验结果表明:在细胞水平,还少丹有促进ROBs增殖、增加mTOR表达量、调控细胞周期的作用。在动物水平,还少丹对老龄SD大鼠的体重没有影响;还少丹能显著提高雄性的脏器系数而对雌性脏器系数作用不明显;还少丹显著增强了雄性血清、肝脏及脑中SOD的活性并同时降低MDA的含量;但对于雌性,SOD的活性在血清、肝脏和脑匀浆中均没有显著变化,也仅在血清中检测到MDA含量的显著降低;从组织切片染色的结果可以看出,还少丹有保持脏器处于年轻形态的趋势。总体地,还少丹有抗氧化、抗衰老的作用,而且存在性别差异。因此建议,在中药抗衰老的研究中应把性别因素列为考察内容。
【关键词】：成骨细胞 老龄SD大鼠 还少丹 抗衰老 性别
【学位授予单位】：重庆大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-7
• 主要缩略词7-11
• 1 绪论11-19
• 1.1 问题的提出11-13
• 1.2 国内外研究现状13-16
• 1.2.1 古方还少丹配方13-14
• 1.2.2 中药的研究现状14
• 1.2.3 抗衰老的研究现状14-16
• 1.3 研究思路及主要研究内容16-17
• 1.3.1 研究思路16-17
• 1.3.2 主要内容17
• 1.4 本文的创新点17-19
• 2 大鼠颅骨成骨细胞的分离、纯化、培养及鉴定19-24
• 2.1 引言19
• 2.2 实验部分19-21
• 2.2.1 实验试剂和仪器19-20
• 2.2.2 成骨细胞的分离、培养及纯化20
• 2.2.3 成骨细胞形态观察20
• 2.2.4 茜素红染色法鉴定成骨细胞20-21
• 2.3 实验结果21-22
• 2.3.1 成骨细胞形态观察21-22
• 2.3.2 茜素红染色22
• 2.4 讨论22-23
• 2.5 本章小结23-24
• 3 载药血清的制备24-30
• 3.1 引言24
• 3.2 实验部分24-26
• 3.2.1 实验试剂和仪器24-25
• 3.2.2 灌胃条件的选择25
• 3.2.3 载药血清的制备25-26
• 3.3 实验结果26-28
• 3.4 讨论28-29
• 3.5 本章小结29-30
• 4 载药血清对SD大鼠乳鼠成骨细胞的生物学效应30-40
• 4.1 引言30
• 4.2 实验部分30-34
• 4.2.1 实验材料30-31
• 4.2.2 还少丹对成骨细胞增殖能力的影响31-32
• 4.2.3 还少丹对体外培养细胞mTOR表达量的影响32-33
• 4.2.4 还少丹对细胞周期影响的研究33-34
• 4.3 实验结果34-37
• 4.3.1 还少丹对成骨细胞增殖能力影响的结果34-35
• 4.3.2 胞内mTOR的western blot检测结果35-36
• 4.3.3 不同培养环境中细胞周期的变化36-37
• 4.4 讨论37-38
• 4.5 本章小结38-40
• 5 还少丹对老龄SD大鼠抗衰老作用的研究40-51
• 5.1 引言40-41
• 5.2 实验部分41-44
• 5.2.1 实验材料41
• 5.2.2 SD大鼠称重41-42
• 5.2.3 计算老龄SD大鼠的脏器系数42
• 5.2.4 血清、肝和大脑组织匀浆中的SOD、MDA含量42-43
• 5.2.5 切片43-44
• 5.3 实验结果44-49
• 5.3.1 还少丹对老龄SD大鼠体重的影响44-45
• 5.3.2 还少丹对大鼠脏器系数的影响45
• 5.3.3 HSD对老龄SD大鼠血清、肝脏和脑中SOD活力及MDA含量的影响45-46
• 5.3.4 还少丹对器官组织形态学的影响46-49
• 5.4 讨论49-50
• 5.5 本章小结50-51
• 6 结论及后续工作建议51-54
• 6.1 结论51-52
• 6.2 未来工作的展望52-54
• 致谢54-55
• 参考文献55-63
• 附录63
• A 作者在攻读学位期间发表的论文63
• B 作者在攻读学位期间参加的科研项目63

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1 王S苟

本文编号：816267