TGF-β1和EGFP体外电转化兔骨髓间充质干细胞的实验研究

发布时间：2017-09-08 23:20

  本文关键词：TGF-β1和EGFP体外电转化兔骨髓间充质干细胞的实验研究

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【摘要】：目的:通过电转化法介导转化生长因子β1(TGF-β1)和EGFP基因转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs),观察Ⅱ型胶原蛋白表达情况。方法:取3只1周龄清洁级健康新西兰大白兔,麻醉后处死,无菌条件下取出胫骨及股骨,暴露髓腔冲出骨髓,应用全骨髓细胞贴壁培养法分离、培养出兔的BMSCs;流式细胞仪法检测细胞表型;将培养获得的BMSCs分3组:TGF-β1+EGFP共转染组,EGFP单独转染组,空白对照组。利用电转化技术将TGF-β1和EGFP对BMSCs进行转染,荧光显微镜观察转染效果,继续培养至14d[1],应用免疫组化法和western blot法分别检测Ⅱ型胶原表达情况。结果:成功分离并培养出BMSCs,经流式细胞仪鉴定其细胞表型CD90和CD44表达为阳性,CD31和CD45表达为阴性;成功转染TGF-β1至BMSCs后;通过免疫组化检测TGF-β1组细胞内(0.4870±0.0181)Ⅱ型胶原有较强的表达,与EGFP组(0.0858±0.0097)及空白对照组(0.0805±0.0098)相比较有显著差异性(P0.05)。western blot检测TGF-β1组细胞内(0.320 0±0.006 7)Ⅱ型胶原有较强的表达,与EGFP组(0.2012±0.007 4)及空白对照组(0.1964±0.0041)相比较有显著差异性(P0.05)。结论:电转TGF-β1质粒至兔BMSCs,能促进Ⅱ型胶原高效表达,进而可以为进一步研究奠定基础。
【关键词】：TGF-β1 骨髓间充质干细胞 电转染 Ⅱ型胶原
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R681.53
【目录】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 英汉缩略词对照表6-7
• 前言7-10
• 1 材料与方法10-20
• 1.1 实验动物10
• 1.2 主要实验试剂及材料10-12
• 1.3 实验方法12-19
• 1.4 统计学分析19-20
• 2 结果20-24
• 3 讨论24-30
• 4 结论30-31
• 参考文献31-36
• 综述（TGF-β1 修复退变椎间盘相关研究进展）36-44
• 参考文献41-44
• 攻读学位期间发表的学术论文目录44-45
• 致谢45-46

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 夏万尧;王毅敏;刘伟;丁文龙;钟梅芳;周广东;崔磊;曹谊林;;重组hTGF-β1基因转染的BMSCs在体内成软骨能力的初步研究[J];解剖科学进展;2010年04期

2 于书记;姜鑫;;胰岛素样生长因子Ⅰ/Ⅰ型胶原复合物修复兔半月板无血运区损伤[J];辽宁医学院学报;2013年03期

3 康健;侯洋;周许辉;杨立利;陈华江;唐先业;袁文;;TGF-β3和BMP-7腺病毒共转染兔骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化的研究[J];中国脊柱脊髓杂志;2014年02期

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本文编号：816925