溃肠宁对溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜TLR2、NF-κB、IKK-β及IL-13等细胞因子影响的研究

发布时间：2017-09-11 19:36

  本文关键词：溃肠宁对溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜TLR2、NF-κB、IKK-β及IL-13等细胞因子影响的研究

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【摘要】：研究目的通过运用三硝基苯磺酸灌肠,建立大鼠溃疡性结肠炎动物模型,研究中药方剂溃肠宁对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠粘膜TLR2、NF-κB、IKK-β和细胞因子IL-13、TNF-α和IL-1β等的影响,探寻溃肠宁治疗溃疡性结肠炎的机理机制,可为其更深入的药理及相应的临床研究奠定下确切的实验方面的基础。研究方法阶段一:实验大鼠分组:SPF级成年Wistar大鼠40只,雌雄各半,体重(170-200)g,随机分配成4组,分别为空白对照组、模型组、中药组(溃肠宁组)、西药组(柳氮磺胺吡啶组),各组10只。阶段二:溃疡性结肠炎的大鼠模型建立及给药:采用TNBS复合50%乙醇法造模。除空白对照组,其他各组用戊巴比妥钠麻醉大鼠后,将钝头导管从肛门插至距肛门8cm处,按80mg/kg三硝基苯磺酸(TNBS)复合50%的乙醇量缓慢灌肠,诱导急性结肠炎.15天后再次给予30 mg/kg TNBS溶液灌肠,造成复发性结肠炎。于第二次造模日,即第一次造模后16天开始灌胃给药,正常组和模型组分别给予0.9%的生理盐水1ml/100g灌胃,中药组给予中药方溃肠宁1ml/100g(1.35g/ml)灌胃,西药组给予柳氮磺胺吡啶1ml/100g(0.03g/ml)灌胃。以上各组每日灌胃1次,连续7天。阶段三:指标检测:大鼠禁食24h,0.3%戊巴比妥钠腹腔方式注射以麻醉大鼠,剖取全结肠以冰冷盐水清洗完全,先以肉眼观察大鼠结肠黏膜之充血、肿胀、溃疡或穿孔流血等的病变情况,取1cm左右结肠组织于4%多聚甲酸固定,脱水后石蜡包埋切片,常规HE染色,光学显微镜下观察结肠形态及组织学变化,剩下结肠组织运用免疫组化法(IHC-P)检测NF-κB及Toll样受体2的蛋白表达水平量,另外用Real-time PCR检测IKK-β的基因表达变化,用酶联反应吸附试验(ELISA法)检测大鼠结肠中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素-13(il-13)的表达水平。研究结果1.大鼠一般情况空白对照组大鼠精神佳,毛发浓密白亮有光泽,饮食状况佳、活动正常,大便成形,无脓血便和粘液便,体重明显增加。余三组于第二次造模出现大便不成形,伴有粘液或脓血便,毛发不同程度的失去光泽,反应迟钝,精神萎靡,活动减少,体重减轻。经治疗后,溃肠宁方组与模型组相比较:大鼠的一般情况明显好转,体重增加,活动灵敏,食欲好转,大便成形,无粘液及脓血。2.大鼠结肠中tlr2的含量与空白对照组比较,模型组大鼠tlr2表达显著增高,具有非常显著性差异(p0.01);与模型组相比较,溃肠宁方组可降低大鼠结肠tlr2的含量,有明显显著性差异(p0.01);与柳氮磺胺吡啶组比较,溃肠宁方组大鼠结肠粘膜tlr2含量与之无明显差异。(p0.05)。3.大鼠结肠中nf-κb的含量与空白对照组比较,模型组大鼠核因子-κb表达显著增高,具有较明显的差异(p0.01);与模型组相比,溃肠宁方组可明显降低大鼠结肠nf-κb的含量,有十分显著性差异(p0.01);与柳氮磺胺吡啶组比较,溃肠宁方组大鼠结肠粘膜nf-κb与之无明显差异。(p0.05)。4.大鼠结肠中ikk-β的表达量与空白对照组比较,模型组大鼠结肠中ikk-β表达显著增高,具有非常显著性差异(p0.01);与模型组相比较,溃肠宁方组可降低大鼠结肠ikk-β的含量,有显著性差异(p0.01);溃肠宁方组与西药治疗组比较无显著性差异(p0.05)。5.tnf-α在大鼠结肠中的表达变化与空白对照组比较,模型组大鼠结肠中tnf-α表达显著增高,具有明显显著性差异(p0.01);与模型组相比较,溃肠宁方组可降低大鼠结肠tnf-α的含量,有显著性差异(p0.01);溃肠宁方组大鼠结肠粘膜tnf-α含量与西药组比较降低,具有显著差异(p0.01)。6.il-13在大鼠结肠中的表达变化与空白对照组比较,模型组大鼠结肠中il-13表达显著降低,具有明显显著性差异(p0.01);与模型组相比较,溃肠宁方组可显著增加大鼠结肠中il-13的含量,有显著性差异(p0.01);溃肠宁方组与西药组比较,大鼠结肠粘膜中il-13含量显著增加,具有显著差异(p0.01)。7.il-1β在大鼠结肠中的表达变化与空白对照组比较大鼠结肠粘膜中il-1β表达,模型组显著增高,具有相当显著的差异(p0.01);与模型组相比较,溃肠宁方组可降低大鼠结肠il-1β的含量,有显著性差异(p0.01);溃肠宁方组大鼠结肠粘膜中il-1β含量比西药组显著性降低,具有明显的差异(p0.01)。结论1溃肠宁方对溃溃疡性结肠炎的疗效确切,本课题uc模型建立成功,溃肠宁方可抑制uc的炎性浸润,并促进结肠粘膜的修复,起到治疗uc的作用。2溃肠宁方可降低uc大鼠结肠粘膜中tlr2的表达水平,调节肠道炎症介质的产量及免疫反应,减轻uc大鼠结肠粘膜的损伤程度,tlr-2可能是溃肠宁方治疗uc大鼠过程中较重要的靶位。3溃肠宁方可抑制uc大鼠模型中过度激活的nf-κb,nf-κb的表达水平在一定程度上可反应uc的粘膜损害程度。溃肠宁方可有效下调nf-κb的表达水平,并可减轻其结肠粘膜的炎症反应,这可能为本方治疗uc大鼠的机理之一。4溃肠宁方可下调uc大鼠结肠粘膜中ikk-β的表达量,这可能是溃肠宁方抑制nf-κb的活性,治疗uc的作用机理之一。5溃肠宁方可降低结肠中tnf-α的含量,从而减轻结肠粘膜的损伤。6溃肠宁方可增加UC大鼠结肠组织中IL-13的含量,从而促进结肠损伤粘膜的修复。7溃肠宁方可降低结肠中IL-1β的含量,进而减轻结肠粘膜的损伤,抑制炎症反应的发生发展。
【关键词】：溃肠宁方 溃疡性结肠炎 大鼠模型 实验研究 NF-κB TLR2 IKK-β TNF-α IL-13 IL-1β
【学位授予单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 摘要5-9
• ABSTRACT9-13
• 缩略词表13-14
• 前言14-16
• 实验研究16-24
• 1. 实验动物16
• 2. 实验试剂16-17
• 3. 实验方法17-24
• 4. 统计学方法24
• 实验结果24-28
• 1. 大鼠一般情况观察结果24
• 2. 各项指标检测结果24-28
• 理论研究28-51
• （一）祖国医学对应西医命名溃疡性结肠炎相关的文献研究28-33
• 1 古代医籍有关溃疡性结肠炎的相关认识与研究28-31
• 2 现代中医对UC发病机制的认识31-33
• 3 现代中医对溃疡性结肠炎的辨证分型33
• （二）现代医学对溃疡性结肠炎发病机制的相关研究33-38
• 1 结肠粘膜屏障功能与炎症的发生33-34
• 2 结肠粘膜改变与溃疡性结肠炎发生的相关研究34-38
• （三）中西医治疗溃疡性结肠炎的相关研究38-51
• 1 现代医学防治溃疡性结肠炎的研究进展38-42
• 2 UC的中医治疗42-48
• 3 中医药治疗溃疡性结肠炎的相关实验研究48-51
• 讨论51-56
• 1 溃肠宁的立法依据及方药分析51-53
• 1.1 溃肠宁的立法依据51-52
• 1.2 溃肠宁的方药分析52-53
• 2 溃肠宁对UC的治疗作用机制探讨53-56
• 2.1 溃肠宁对机体免疫力的调节作用53-54
• 2.2 溃肠宁对肠道菌群的调节作用54-55
• 2.3 肠宁对UC患者精神心理的调节55
• 2.4 改善微循环，，促进结肠粘膜修复55-56
• 结语56-57
• 参考文献57-63
• 附录63-66
• 致谢66

【参考文献】

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本文编号：832670