针刺不同经穴对心肌缺血大鼠大脑皮质区NGF、TrkA表达影响的研究

发布时间：2017-09-16 16:11

  本文关键词：针刺不同经穴对心肌缺血大鼠大脑皮质区NGF、TrkA表达影响的研究

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【摘要】：目的:通过观察电针心经原穴“神门”、小肠经络穴“支正”和“心俞”穴对心肌缺血大鼠模型大脑皮质内的神经生长因子(NGF)及其受体酪氨酸激酶A(Trk A)表达的影响,比较针刺不同经穴抗心肌缺血脑损伤的差异性,并探讨针刺对心肌缺血脑保护作用的效应机制。以期为“心主神明”理论及经穴效应的差异性提供实验依据,为临床诊治心功能不全引起的脑功能损伤探索新的治疗途径,并为临床选穴提供参考依据。方法:选择健康雄性SD大鼠80只,体重为220±20g,分笼饲养,随机选取其中10只作为假手术对照组,其余70只在乙醚麻醉状态下采用左冠状动脉前降支结扎法复制急性心肌缺血大鼠模型,并采用Powerlab多导生理记录仪记录其心电图的变化,最后将模型复制成功的大鼠随机分为模型组、电针“神门”组和电针“支正”组,电针“心俞”组,每组15只。各电针组刺激电流为1 m A,频率为2 Hz,每次刺激15 min,进行电针治疗。电针结束后,对各组大鼠行断头处死,开颅取出完整的脑组织,在冰块上分离出大脑皮质部分,分别对各组大鼠大脑皮质采用免疫组化方法和荧光定量PCR技术检测其皮质中NGF及其受体Trk A的表达。采用Spass17.0进行数据统计分析,比较各组大鼠大脑皮质NGF及其受体Trk A表达的差异。结果:(1)Powerlab心电图与假手术组比较,造模后大鼠心率显著性下降,ST段显著性抬高,T波倒置,显示心肌缺血模型复制成功。(2)免疫组化检测电针“支正”、“神门”、“心俞”对大鼠大脑皮质NGF及其受体Trk A的表达结果①与假手术组比较,模型组大鼠大脑皮质NGF及其受体Trk A的表达差异无统计学意义(P0.05),但阳性细胞表达细胞数目高于假手术组;②与模型组比较:各针刺治疗组的阳性表达细胞数目与模型组比较有显著增加,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);③治疗组组间比较:与支正组比较,神门组表达数目增多,但无统计学差异(P0.05),心俞组与支正组比较表达数目增多,差异显著(P0.01),心俞组与神门组比较表达增多,有显著性差异(P0.05);(3)实时荧光定量PCR检测电针“支正”、“神门”、“心俞”对大鼠大脑皮质中NGFm RNA、Trk Am RNA的基因表达的结果①样本熔解曲线为单一峰,无非特异性荧光,样本扩增曲线整体平行性好,拐点清楚,指数期明显、陡度大,基线平而无上扬现象,表明反应模板无污染,定量准确,结果可信。②各组相对表达量比较总体与免疫组化检测结果一致,与假手术组比较,模型组大鼠大脑皮质NGFm RNA及其受体Trk Am RNA的表达差异无统计学意义(P0.05),但阳性细胞表达细胞数目高于假手术组;与模型组比较:各针刺治疗组的阳性表达细胞数目与模型组比较有显著增加,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);治疗组组间比较:与支正组比较,神门组表达量高于支正组,但无统计学差异(P0.05),心俞组与支正组比较表达增多,差异显著(P0.01),心俞组与神门组比较表达增多,有显著性差异(P0.05);结论:⑴电针不同经穴能够提高急性心肌缺血大鼠大脑皮质中神经生长因子(NGF)及其受体酪氨酸激酶A(Trk A)的含量水平;并且对其调节作用具有相对特异性,电针“心俞”穴的调整作用明显优于心经原穴“神门”和小肠经络穴“支正”,而电针“神门”穴优于电针“支正”穴,但无显著统计学差异;⑵通过提高脑细胞中神经生长因子(NGF)及其受体酪氨酸激酶A(Trk A)的含量,可能是针刺抗心肌缺血造成脑损伤的作用机制之一。
【关键词】：心肌缺血 NGF Trk A 脑损伤 电针 心俞穴 神门穴 心主神明
【学位授予单位】：安徽中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R245
【目录】：

• 一．中文摘要7-9
• 二、ABSTRACT9-12
• 三．缩略词中英文对照表12-13
• 四．前言13-16
• 五．实验研究16-41
• 1 材料16-17
• 1.1 动物16
• 1.2 试剂16
• 1.3 仪器与材料16-17
• 2 方法17-22
• 2.1 动物选择及分组17-18
• 2.2 动物模型的复制18
• 2.3 实验方法18-19
• 2.3.1 穴位的选取与定位18
• 2.3.2 电针方法18-19
• 2.3.3 各组动物处理19
• 2.3.4 标本采集19
• 2.6 观察指标及检测方法19-21
• 2.6.1 免疫组化染色观察分析NGF、TRKA的表达19
• 2.6.2 荧光定量PCR检测NGF、、TRKA基因的表达19-21
• 2.7 统计学方法21-22
• 2.8 技术路线图22
• 3 结果22-29
• 3.1 POWERLAB心电图结果22-24
• 3.2 各组大鼠免疫组化检测结果24-25
• 3.4 各组大鼠荧光定量定量PCR检测结果25-29
• 3.4.1 扩增曲线25-27
• 3.4.2 溶解曲线27-28
• 3.4.3 相对表达量28-29
• 4 讨论29-38
• 4.1 对心肌缺血的相关认识29-31
• 4.1.1 祖国医学对心肌缺血的认识29-30
• 4.1.2 现代医学对心肌缺血的认识30-31
• 4.2 心肌缺血与脑损伤31-32
• 4.3 针灸治疗心肌缺血的研究概况32-33
• 4.4 穴位特异性研究进展33-34
• 4.5 神经生长因子NGF的研究背景34-35
• 4.6 荧光定量PCR检测技术简介35-36
• 4.7 实验设计依据36-37
• 4.7.1 心肌缺血的动物模型的选取36
• 4.7.2 穴位选取依据36-37
• 4.7.3 观察指标的选取37
• 4.8 实验结果分析37-38
• 4.8.1 电针“支正”、“神门”、“心俞”对大鼠大脑皮质NGF及其受体TRKA的影响37
• 4.8.2 电针“支正”、“神门”、“心俞”对大鼠大脑皮质中NGF、TRKA的基因表达的影响37-38
• 5 结论38
• 6 启示与展望38-41
• 6.1 启示与展望38-39
• 6.2 创新39-41
• 六．参考文献41-48
• 七．综述48-55
• 参考文献51-55
• 八．个人简介55-56
• 九．攻读学位期间发表学术论文和参与课题情况56-57
• 十．致谢57

【参考文献】

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本文编号：864065